Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 3:55 мин. • July 8th, 2025
Физическое взаимодействие между двумя белками-партнерами модулирует нисходящие биологические механизмы.
Для выявления белок-белковых взаимодействий с помощью иммуноферментного анализа ИФА берут многолуночный иммуноферментный планшет. Добавьте оболочечный буфер, содержащий один из взаимодействующих белков — белок приманки — и инкубируйте. Белки приманки адсорбируются на поверхности скважины за счет неспецифических гидрофобных взаимодействий.
Выбросьте отработанный раствор и промойте пластину буфером, чтобы удалить несвязанные белки. Добавьте блокирующий раствор и инкубируйте, позволяя молекулам блокирующего агента раствора блокировать неспецифические участки связывания на поверхности лунки.
Добавьте партнера по взаимодействию белка — белок-добычу — помеченный остатками гистидина для удобства количественного определения. Инкубируйте, позволяя белку добычи специфически связываться со своим интерактивным партнером — приманкой. Добавьте раствор антигистидиновых антител, конъюгированных с ферментами пероксидазы хрена, которые связываются с добычей, образуя комплекс приманка-добыча-антитела.
Пипетку пипеткой введите раствор, содержащий субстрат фермента и перекись водорода, и инкубируйте.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео