Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:49 мин. • July 8th, 2025
Возьмите многолуночную пластину с фильтрами в основании.
Добавьте тестовый образец, содержащий разные цитокины.
Добавьте различные наборы микросфер, дифференцированные по размеру и интенсивности внутренней флуоресценции.
Каждый набор конъюгирован с антителом, нацеленным на определенный цитокин.
Инкубируйте тарелку в темноте при перемешивании.
Антитела связываются со своими цитокинами-мишенями, иммобилизуя их на микросферах.
Примените вакуум для удаления несвязанных цитокинов. Связанные с микросферами цитокины сохраняются благодаря меньшему размеру пор мембраны.
Добавьте коктейль из конъюгированных с биотином детекционных антител, которые связываются с микросферическими цитокинами.
Добавьте флуоресцентный репортер-конъюгированный стрептавидин и инкубируйте в темноте при перемешивании. Стрептавидин связывается с биотином, обездвиживая репортера на микросферном комплексе.
Удалите несвязанные молекулы и снова суспендируйте микросферы.
С помощью проточной цитометрии можно идентифицировать связанные цитокины путем определения размера и внутренней флуоресценции микросфер.
Чтобы определить количество конкретного цитокина, измерьте интенсивность флуоресценции репортера.
Для проведения анали
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео