Очистки белков-Free метод привязки Определение Affinity по Микромасштабные Термофорез

30.6K просмотров

Цитируется: 54

10:22 мин.

15 августа 2013 г.

10.3791/50541-v

15 августа 2013 г.

30.6K просмотров

Lyuba Khavrutskii¹^,² , Joanna Yeh¹ , Olga Timofeeva³ , Sergey G. Tarasov⁴ , Samuel Pritt¹ , Karen Stefanisko¹ , Nadya Tarasova¹

¹Cancer and Inflammation Program, National Cancer Institute, ²Basic Science Program, SAIC-Frederick, Inc., ³Departments of Oncology and Radiation Medicine, Georgetown University Medical Center, ⁴Structural Biophysics Laboratory, National Cancer Institute

Микромасштабные термофореза (MST) могут быть широко использованы для определения аффинности связывания без очистки целевого белка из клеточных лизатов. Протокол включает сверхэкспрессии GFP-слитый белок, лизис клеток в неденатурирующих условиях, и обнаружение MST сигнала в присутствии различных концентраций лиганда.