Запись синаптических реакций CA3-CA1 в срезе гиппокампа крысы

Поместите срез гиппокампа крысы в электрофизиологическую установку.

Расположите стимулирующие электроды в слое лучевого слоя области CA1 гиппокампа, который получает аксональные проекции от нейронов CA3.

Поместите записывающий электрод рядом с апикальными дендритами CA1.

Поместите еще один записывающий электрод в слой пирамидального слоя.

При стимуляции проекции аксонов CA3 деполяризуются и генерируют потенциалы действия, высвобождая возбуждающие нейротрансмиттеры.

Эти нейротрансмиттеры связываются с постсинаптическими апикальными дендритами CA1, индуцируя положительный приток ионов и деполяризацию мембраны, называемую возбуждающим постсинаптическим потенциалом, или EPSP.

Записывающий электрод измеряет суммируемые ЭПСП из апикальных дендритов — поля ЭПСП или фЭПСП. Как только будут получены стабильные сигналы fEPSP, опустите электроды и сделайте короткую паузу.

Примените диапазон интенсивностей стимуляции, чтобы определить зависимость «вход-выход» от наклона fEPSP, затем выберите и примените конкретную интенсивность на основе наклона.

Второй регистрирующий электрод измеряет потенциалы комбинированного действия тел нейронных клеток CA1, генерируя популяционные всплески.

В экспериментах по синаптическому мечению и захвату под микроскопом расположите два стимулирующих электрода в лужающем слое области CA1 для стимуляции коллатеральных волокон Шаффера и один записывающий электрод в апикальной дендритной области CA1 посередине между стимулирующими электродами для регистрации ответов fEPSP.

Поместите еще один регистрирующий электрод в слой пирамидального слоя для регистрации всплеска населения. Когда все электроды касаются среза, проведите тестовую стимуляцию, чтобы убедиться, что на обоих входах может быть получен сигнал EPSP соответствующего поля.

Как только будет получен правильный сигнал fEPSP, осторожно опустите электроды еще на 200 микрон, используя ручки тонкого движения манипуляторов, затем дайте 20 минут, чтобы срез восстановился. После этого определите соотношение вход/выход, измерив наклон поля EPSP в диапазоне интенсивностей тока от 20 микроампер до 100 микроампер.

Затем для каждого входного сигнала установите интенсивность стимуляции, которая вызывает 40% от максимального наклона EPSP поля в качестве постоянного стимула на протяжении всего эксперимента. Через 15–20 минут начните записывать базовый уровень.

Запишите стабильный базовый уровень не менее чем за 30–60 минут до индукции LTP/LTD.