Количественная оценка распределения пресинаптического белка в мозге мыши с помощью иммунофлюоресценции

Возьмем химически фиксированный срез мозга мыши, помещенный в среду, обеспечивающую встраивание тканей.

Промойте ломтик буфером, чтобы удалить среду.

Добавьте раствор, который пронизывает мембраны и блокирует неспецифические участки связывания.

Удалите раствор.

Чтобы визуализировать нейрональные синаптические белки, инкубируйте срез с первичными антителами.

Эти антитела нацелены на пресинаптический белок, экспрессируемый в синапсах определенных областей мозга, и повсеместно экспрессируемый синаптический белок в качестве референсного маркера.

Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.

Введение меченных флуорофорами вторичных антител, нацеленных на первичные антитела.

Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные вторичные антитела.

Покрасьте ядра ДНК-связывающим красителем.

Промойте с помощью буфера и закрепите ломтик с помощью подходящего монтажного материала.

Визуализируйте срез под конфокальным микроскопом.

Рассчитайте средние отношения интенсивности флуоресценции целевого белка и референсного маркера, чтобы проанализировать распределение целевого белка по различным областям мозга.

Чтобы подготовить срезы к иммуноокрашиванию, с помощью пластиковой пипетки удалите раствор