Визуализация полисом, выделенных из мозга мыши, с помощью атомно-силовой микроскопии

Начните со слюдяного листа с прилипшими полисомами, выделенными из ткани мозга мыши.

Полисома представляет собой комплекс из нескольких рибосом, прикрепленных к цепи РНК.

С помощью скотча закрепите лист слюды на держателе образца.

Поместите держатель образца в предметный столик для атомно-силового микроскопа.

Установите предустановленную консоль. Совместите лазер и детектор для обеспечения точного обнаружения сигнала во время визуализации.

Отрегулируйте частоту колебаний кантилевера для оптимизации обнаружения особенностей поверхности при сохранении целостности образца.

Начните получение изображения с колебания кончика кантилевера над поверхностью образца.

Когда наконечник сталкивается с возвышенной поверхностью полисомы, лазер отклоняется.

Эти отклонения лазера улавливаются детектором, который генерирует изображение с наноразмерным разрешением.

Используйте соответствующее программное обеспечение для коррекции произвольных эффектов наклона и дрейфа, что позволяет визуализировать полисому.

Прикрепите подготовленный образец к держателю образца АСМ с помощью двустороннего скотча. Затем вставьте держатель образца в столик АСМ в соответствии с инструкциями производителя. После калибровки приближайтесь к образцу до тех пор, пока кончик кантилевера не войдет в зацепление с поверхностью.

Выберите область сканирования 2 на 2 мкм, разрешение не менее 512 на 512 пикселей. Выберите режим вычитания живого фона и выберите Z-масштаб от 20 до 25 нанометров. Затем начните получение изображения. Изучите изображение, ища наличие круглых объектов, характеризующихся высотой от 10 до 15 нанометров при получении изображений в воздухе.

Далее отрегулируйте заданное значение и параметры обратной связи до тех пор, пока не будут визуализированы острые объекты. Фон должен выглядеть относительно плоским в хороших образцах с объектами высотой от 2 до 4 нанометров. Как только изображение будет выглядеть хорошо, получите несколько сканов размером 2 на 2 микрона в разных областях образца.