Флуоресцентная визуализация агрегации белка PolyQ в нейронах Caenorhabditis elegans

Начните с обезболенных червей контрольной группы и червей с дефицитом шаперона Caenorhabditis elegans.

Обе группы экспрессируют помеченные флуорофорами белки polyQ в своих нейронах, которые склонны к неправильному сворачиванию.

У контрольных червей белки-шапероны ограничивают неправильно свернутую агрегацию polyQ, в то время как у червей с дефицитом шаперона неправильно свернутый polyQ легко образует агрегаты.

Поместите предметное стекло на предметный столик конфокального микроскопа для флуоресцентной визуализационной микроскопии (FLIM).

Подсветите червей с помощью импульсного лазера.

Лазер возбуждает флуорофор, который испускает фотон при возвращении в основное состояние.

FLIM измеряет время жизни флуоресценции — время, в течение которого флуорофор остается в возбужденном состоянии.

У червей с дефицитом шаперонов агрегация polyQ кластеризует флуорофоры, способствуя передаче энергии между соседними флуорофорами, а не излучению фотонов, тем самым сокращая время жизни флуоресценции.

Программное обеспечение FLIM обрабатывает эти времена жизни для создания карт с цветовой кодировкой, что позволяет визуализировать агрегацию.

Уменьшенное время жизни флуоресценции у червей с дефицитом шапер