Визуализация миграции клеток нервного гребня у эмбриона рыбки данио с помощью многофотонной покадровой визуализации

Начните с живого, дехорионированного трансгенного эмбриона данио-рерио, помещенного в агарозу с низкой температурой плавления и помещенного в камеру, заполненную средой для эмбрионов.

Эмбрион экспрессирует усиленные клетки нервного гребня, меченные зеленым флуоресцентным белком (EGFP).

Расположите камеру на предметном столике микроскопа. Используя светлопольное освещение, отрегулируйте объектив для фокусировки и центрирования эмбриона в поле зрения.

Переключитесь на цель погружения в воду и снова сфокусируйтесь на эмбрионе.

Отрегулируйте параметры визуализации для получения изображений Z-стека от латерального до медиального края, захватывая ширину глаза.

Выключите освещение в ярком поле, накройте сцену и включите интервальную съемку.

При необходимости заполняйте камеру фильтрующим материалом во время визуализации.

Под действием лазерного излучения клетки нервного гребня флуоресцируют.

Визуализируйте миграцию этих клеток из нервной трубки в черепно-лицевые области, вокруг развивающегося глаза, чтобы заселить периокулярную мезенхиму и лобно-насальный отросток, и вентрально, чтобы сформировать дуги глотки.

После того, как вся установка будет помещена на столик микроскопа, в соответствии с тек