Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:51 мин. • June 17th, 2025
Начните с установки для флуоресцентного микроскопа с полным внутренним отражением (TIRF) с закрытой камерой визуализации, содержащей стеклянную защитную крышку с прилипшими клетками нейробластомы человека в буфере.
Эти клетки экспрессируют флуорофоры, специфичные для мембран синаптических везикул.
В режиме эпифлуоресценции выберите ячейку для визуализации.
В режиме TIRF через объектив направьте лазер на образец, появляющийся в виде пятна на крышке.
Отрегулируйте угол так, чтобы он превышал критический угол на границе раздела между покровным стеклом с высоким коэффициентом преломления и образцом с более низким показателем преломления, что приведет к полному внутреннему отражению (TIR), видимому в виде тонкой линии.
МДП генерирует затухающую волну, которая возбуждает флуорофоры на ближайшей мембране.
Излучаемая флуоресценция собирается объективом и фиксируется камерой.
Тонкая настройка для получения высококонтрастного изображения клеточной мембраны вблизи покровного стекла.
Оптимизируйте настройки сбора данных, чтобы свести к минимуму фотообесцвечивание и задать частоту дискретизации.
Начните визуализацию TIRF для визуализации сросшихся синаптических везикул.
В режиме эпифлюоресценции сосредо
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео