Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:39 мин. • June 17th, 2025
Возьмите покровную крышку с генетически модифицированными первичными нейронами в камере визуализации, заполненной буфером для визуализации.
Эти клетки экспрессируют окислительно-восстановительный индикатор на основе флуоресцентного белка в митохондриальном матриксе.
Поместите камеру под флуоресцентный микроскоп, определите клетки в видимом свете, затем переключитесь на флуоресцентную визуализацию.
Подайте две длины волны возбуждения для стимуляции индикатора и измерения флуоресцентного излучения.
Отношение интенсивности флуоресценции на этих длинах волн отражает степень окисления митохондрий.
Вводите NMDA для активации клеточных рецепторов NMDA, вызывая внутриклеточный приток кальция.
Увеличение вызывает поглощение кальция митохондриями, индуцируя выработку АФК и окисление митохондрий
.
АФК окисляет индикатор, изменяя его флуоресценцию и увеличивая коэффициент сигнала.
Вводите окислители для полного окисления индикатора, максимизируя коэффициент сигнала.
Удалите буфер, затем введите восстановители, чтобы полностью уменьшить краситель, минимизируя отношение сигнала.
Используйте максимальные и минимальные отношения сигналов для калибровки и количественного определения митохондриального окислени
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео