March 30th, 2012
Экспресс-метод для анализа летучих соединений в плодах описано. Летучих соединений, присутствующих в свободном пространстве от гомогената образца быстро отделяются и обнаружил с ультра-быстрой газовой хроматографии (ГХ) в сочетании с поверхностной акустической волны (ПАВ) датчиком. Процедура обработки данных и анализа также обсуждается.
Общая цель этой процедуры заключается в проведении экспресс-анализа летучих соединений в плодах. Это достигается путем предварительного разрезания и гомогенизации ткани плода. Затем паровая фаза над жидким образцом анализируется с помощью электронного носа.
После электронного анализа носа данные экспортируются и преобразуются. Заключительным этапом процедуры является определение окон индекса covas и объединение пиков под одной меткой индекса covas с помощью графического интерфейса. В конечном счете, результаты показывают, что различия в обилии плодовых фолликулов, измеренных с помощью электронного носа, могут быть связаны с экспериментальными методами лечения, такими как сорт фруктов, зрелость и хранение.
Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как традиционная газовая хроматография, заключается в том, что она позволяет проводить более быстрый анализ летучих соединений в плодах. При выполнении этого анализа могут наблюдаться незначительные изменения времени удержания аналита. Это может привести к неправильной интерпретации данных без тщательного рассмотрения процесса выравнивания пиков.
После сбора плодов на нужной стадии зрелости промойте водопроводной водой. Для того чтобы удалить грязь и пыль, выберите фрукты для анализа. Исходя из отсутствия внешних и внутренних дефектов и размеров, однородности, плоды разрезают в продольном направлении на дольки, которые используются для отбора летучих проб.
Если применимо, удалите семена кожицы, ткани полости семян или плоды без косточек. Выбор тканей должен быть последовательным на протяжении всего эксперимента, и следует учитывать изменчивость в пределах одного плода. Например, образцы должны быть получены в равной степени из экваториального цветка и концевой части стебля.
Соедините выбранную фруктовую ткань, перемешайте ее для того, чтобы рандомизировать, а затем взвесьте 200 грамм в коммерческом блендере. Добавьте 200 миллилитров насыщенного раствора хлорида кальция. Хлорид кальция предназначен для того, чтобы действовать как ингибитор ферментативной активности, которая может возникнуть после разрезания и гомогенизации мякоти плода.
Затем добавьте 50 микролитров 100 миллимолярного раствора двух метилбутилизо в метаноле. Это решение добавлено в качестве внутреннего стандарта для мониторинга любых возможных потерь летучих соединений в процессе гомогенизации. Далее гомогенизируйте смесь в лабораторном блендере в течение 30 секунд при 18 000 об/мин.
Затем сразу перелить в стеклянную бутылку и укупорить тефлоновой крышкой. Держите гомогенат в бутылке до тех пор, пока не будут подготовлены все образцы. Пипеткой пятимиллилитровые аликвоты сока без пены в стеклянные янтарные флаконы объемом 20 миллилитров, приготовив не менее трех флаконов на образец.
Служить в качестве технических репликаций. Запечатайте флаконы стальными винтовыми крышками, оснащенными тефлоновыми силиконовыми перегородками. На этом этапе образцы могут быть проанализированы немедленно или заморожены в жидком азоте и храниться при сверхнизкой температуре для последующего анализа.
Загрузите соответствующий метод анализа на Xenos. Введите параметры, найденные в письменном протоколе. Подсоедините иглу из нержавеющей стали с наконечником без отбора керна к входному отверстию ксеноса.
Несколько раз продуйте систему окружающим воздухом до тех пор, пока базовый уровень не станет стабильным и не будут обнаружены пики более 200 отсчетов. Подготовьтесь к настройке инструмента, вставив иглу в перегородку флакона, содержащего раствор аски с прямой цепью для сброса давления. Затем введите иглу, соединенную с входом инструмента, в перегородку.
Исполните мелодию, начав сэмплирование свободного пространства. Результат настройки используется программным обеспечением прибора для преобразования времени удержания указанных пиков из единиц времени в индекс коваса или единицы KI. Следовательно, после настройки системы время хранения сообщается в единицах KI.
Начните анализ образца после уравновешивания образца в течение 30 минут, вставив иглы в перегородку флакона с образцом. Как это делается для решения с прямой цепью acas. Запустите отбор проб в свободном пространстве вручную, нажав кнопку воспроизведения, в результате чего насос активируется и удаляет пары, присутствующие над образцом.
В конце анализа на экране появляется хроматограмма и датчик автоматически нагревается до 150 градусов Цельсия в течение 10 секунд для его очистки. Когда окно состояния системы становится зеленым, прибор снова готов к анализу другого образца. Чтобы обеспечить стабильную базовую линию и надлежащую очистку системы, запускайте по крайней мере одну воздушную заглушку между каждым образцом.
Проанализируйте не менее трех технических реплик на образец, а также заготовки флаконов. Экспортируйте данные в файл Microsoft Excel после получения с помощью функции сохранения данных журнала в программном обеспечении Mense. После того, как данные будут экспортированы, добавьте столбцы, содержащие метки для переменных и репликации.
Формат данных, экспортированный из программного обеспечения прибора, может быть преобразован для упрощения работы с помощью скрипта Python 0.6, созданного в этой лаборатории. Имя исходного файла и имя листа для входных данных, а также желаемое имя файла для вывода редактируются непосредственно в скрипте. Этот скрипт облегчает обработку и анализ данных за счет идентификации уникальных kis во всех образцах.
Данные переупорядочиваются с помощью выборочной информации в строках и уникальных KIS в столбцах, где каждая ячейка представляет соответствующую пиковую область. Если пик для значения KI в образце не обнаружен, соответствующая ячейка остается пустой. Затем с помощью второго скрипта, созданного в результате этого лабораторного импорта, данные из файла, отредактированного на предыдущем шаге.
Анализ основан на просмотре и анализе количества обнаружений каждого значения KI. Таким образом, программа отображает гистограмму попаданий КИ. Для каждого значения KI оцените K попаданий в определенные подмножества образцов, анализируя каждую группу технических реплик вместе.
Для этого проанализируйте каждую обработку или переменную отдельно, установив или сняв соответствующие флажки. Определив ширину каждого окна КИ с помощью графического интерфейса, случайным образом выберите несколько соответствующих хроматограмм. В мобильном программном обеспечении оцениваются перекрывающиеся пики среди технических реплик.
После того, как окно КИ индивидуализировано, функция слияния в графическом интерфейсе используется для объединения KIS, которые попадают в окно, в наиболее населенные ки Первый. Нажмите на кнопку объединения, чтобы активировать функцию, и выберите наиболее населенный ки в центре окна, щелкнув левой кнопкой мыши по соответствующей панели. После того, как полоса была выбрана, она меняет цвет и становится зеленой, чтобы объединить КИС, которые попадают в окно, в выбранную ки, щелкните правой кнопкой мыши по соответствующим полосам.
Это приводит к тому, что полосы становятся красными, в то время как синяя полоса соответствующей длины добавляется поверх центральной ки. После того, как все выбранные KI будут объединены в соответствующую центральную ки, нажмите на кнопку объединения еще раз, чтобы принять изменения. Это приводит к тому, что кнопка объединения становится желтой в случае ошибок.
Кнопка «Объединить» также доступна для объединения. Нажмите кнопку «Объединить» в графическом интерфейсе. Затем щелкните правой кнопкой мыши по красной полосе, чтобы отменить слияние.
Из красного полоса становится синей. Нажмите кнопку «Отменить слияние» еще раз, чтобы принять изменения. При попытке неправильного объединения двух пиков в одном образце в одно значение KI выводится сообщение об ошибке.
После того, как все операции объединения были сохранены, файл сохранен перед тем, как приступить к статистическому анализу, хроматограммы воздуха и заготовок флаконов анализируются для мониторинга возможных загрязнений. После того, как ki пиков и бланков были идентифицированы, вычтите площадь пика, обнаруженного в воздухе, и/или бланк флакона из площади присутствующего пика. В образце электронный нос смог обнаружить различия в профилях летучих веществ среди плодов дыни, собранных на разных стадиях зрелости.
Здесь показаны примеры хроматограмм раннезрелых и полностью спелых фруктов, показывающие различия в площади пика. Анализ вариантов показал, что из этих различных kis обилие 14 пиков, обнаруженных электронным носом, значительно варьировало между двумя стадиями зрелости. Здесь пик численности раннезрелых плодов для каждого из этих ки обозначен зеленым цветом, а полностью созревший плод – оранжевым.
После завершения этой процедуры могут быть выполнены другие методы, такие как газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией, чтобы идентифицировать компоненты, соответствующие отдельным пикам на электронном носу после его разработки. Этот метод обеспечит инструмент быстрого анализа и позволит исследователям в области патологии растений, физиологии растений, биологии после сбора урожая и науки о продуктах питания изучать изменения в летучем составе фруктов в зависимости от зрелости, сорта или хранения. После просмотра этого видео вы должны хорошо понимать, как быстро анализировать летучие соединения с помощью электронного носа и выполнять выравнивание пиков с помощью нашего графического интерфейса.
Эта статья представляет быстрый метод анализа летучих соединений в фруктах с использованием ультрабыстрой газовой хроматографии, связанной с поверхностным акустическим волновым датчиком. Процедура включает подготовку образцов, обработку данных и анализ для выявления различий в содержании летучих соединений, связанных с различными экспериментальными обработками.