Идентификация киназы-подложки пар Использование высокопроизводительного скрининга

Общая цель этой процедуры заключается в идентификации киназ, которые фосфорилируют представляющий интерес субстрат, с использованием высокопроизводительных методов скрининга. Это достигается путем первого пересечения клеток с плазмидами, экспрессирующими киназы FU, в глутатион в виде трансферазы или GST. Вторым шагом является вытягивание киназы GST.

Затем образцы загружаются в гели, которые затем запускаются и окрашиваются блестящим синим красителем кумаси. Заключительным этапом является сушка гелей и воздействие на них авторентгенографической пленки. В конечном счете, разрабатывая и интерпретируя полученные пленки, можно идентифицировать пары киназного субстрата, поскольку каждая полоса является репрезентативной для отдельного киназного анализа.