Тюнинг параллельного Колонка сегментированные потока и включение мультиплексированных обнаружения

Общая цель этой процедуры ВЭЖХ заключается в настройке колонки параллельного сегментированного потока для обеспечения обнаружения мультиплексирования. Этот метод отвечает на ключевые вопросы в области здоровья и благополучия, наук об окружающей среде, криминалистики и любых областей, требующих анализа сложных образцов, таких как биооткрытие. Этот метод позволяет проводить всесторонний анализ образцов, а также получать информацию о химической и биологически активной природе веществ в сложных смесях.

Мультипротоколы обнаружения также обеспечивают быстрый анализ. Этот метод позволяет разрабатывать стратегии для определения химических отпечатков сложных смесей, таких как кофе и вино, позволяя производителям отличать свою продукцию от дешевых контрафактных сортов. Поначалу может показаться необычным не отправить весь образец только на один детектор для точного анализа.

Однако концентрация аналита в каждом потоке выше, чем общий расход обычной колонны. Для начала настройте прибор ВЭЖХ со 100% UE водой и чистым метанолом для подвижных фаз А и В соответственно. Если вы хотите использовать детектор МС, добавьте 0,1% муравьиной кислоты в обе подвижные фазы, затем продуйте насосы ВЭЖХ в соответствии с инструкциями производителя.

Соберите MS UV VS. И детекторы DPPH. В соответствии с инструкциями производителя. Убедитесь, что компоненты расположены надлежащим образом, чтобы мертвый объем в линиях детектора был минимальным.

Затем установите длину волны детектора UV VISTA на длину волны, характерную для данного образца. 280 нанометров для детектора MS. Используйте положительный режим для общего количества ионов или анализа TIC с методом обнаружения полного сканирования.

Уравновесьте температуру и расход газа детектора МС до следующих значений. Температура испарителя 500 градусов Цельсия, капиллярная температура 350 градусов Цельсия, расход вспомогательных газов 40 единиц, расход разверточного газа пять единиц, расход газов оболочки 60 единиц, напряжение распыления 3,5 киловольта. Для приготовления реагента DPPH radical начинают с растворения 25 миллиграмм DPPH радикала DPPH в 250 миллилитрах метанола в объемной колбе.

Добавьте в раствор 250 микролитров муравьиной кислоты и обработайте раствор ультразвуком в течение 10 минут. Затем накройте колбу и фольгу крышкой, чтобы предотвратить попадание света. Затем продуйте насос радикальным раствором DPPH в соответствии с рекомендациями производителя для настройки радикальной системы DPPH.

Убедитесь, что линия насоса закреплена на входе Т-образного элемента, а затем подсоедините реакционную катушку объемом 100 микролитров к выходному отверстию Т-образного элемента. Прикрепите детектор к другому концу корпуса реакционной катушки ENC, реакционной катушки и нагревателя колонны. Наконец, установите детектор DPPH radical UV V на 520 нанометров.

Чтобы построить колонну с параллельным сегментированным потоком или PSF, сначала подключите вход колонки к прибору для ВЭЖХ. Далее с помощью кусок трубки подключите центральный порт к детектору МС. Используйте трубки одинаковых размеров для подключения одного периферийного порта колонки к УФ-VS-детектору, а другого — к Т-образной части системы обнаружения радикалов DPPH.

Заблокируйте все неиспользуемые периферийные порты с помощью стопоров столбцов. Отрегулируйте расход ВЭЖХ до одного миллилитра в минуту 100% подвижной фазы В для колонны 4,6 миллиметра, внутреннего диаметра и 250 миллиметров в длину. Уравновесить в течение 20 минут.

Чтобы начать настройку системы PSF, сначала разорвите до опорожнения сборных емкостей. Используйте эти флаконы для раздельного сбора подвижной фазы от УФ-VS. И порты DPPH для радикалов. Обратите внимание на период сбора и соберите не менее 500 миллиграммов растворителя в каждой емкости.

Затем взвесьте сборные емкости, чтобы определить массу подвижной фазы, и разделите массу на плотность метанола, чтобы рассчитать объем подвижной фазы, собранной из каждого порта. Наконец, определите расход до детектора MS и рассчитайте доли потока всех детекторов в процентах от общего расхода, как указано в текстовом протоколе. Если пропорции потока существенно отклоняются от идеальных значений, при необходимости добавьте дополнительные трубки для регулировки противодавления и повторите процесс сбора и расчета.

Наконец, установите скорость потока насоса радикального реагента DPPH в соответствии со скоростью потока выходного отверстия, подключенного к детектору. Был проведен мультиплексный анализ ВЭЖХ на образце кофе. Возможность регистрации DPPH радикала UV VS. И MS.Chromatograms одновременно позволяет соединениям в образце, которые положительно отреагировали на радикал DPPH, быть легко сопоставленными с ответами УФ и

МС на основе выравнивания по времени удержания, когда положительный ответ был виден от детектора MSS TIC, молекулярная масса пика была зарегистрирована. Простота сопоставления пиков между различными процессами обнаружения позволяет быстро и эффективнее проводить скрининг и характеризацию сложных образцов, таких как кофе. Для получения дополнительной информации об образце можно использовать другие детекторы, такие как флуоресцентный метод с показателем преломления, и химический детектор, такой как химическая люминесценция.

После просмотра этого видео вы должны осознать важность процессов обнаружения мультиплексирования для лучшего понимания сложной выборки. Кроме того, мультиплексное обнаружение с использованием параллельных сегментированных колонн потока является чрезвычайно эффективным способом проведения биоисследований.