Сообщение Колонка дериватизации с использованием реакции потока высокоэффективной жидкостной хроматографии Колонки

Общая цель этого метода заключается в повышении эффективности и чувствительности высокоэффективной жидкостной хроматографии постколоночной дериватизации, или метода PCD, за счет использования колонки реакционного потока. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в таких областях, как фармацевтика, биомедицина и науки об окружающей среде, где анализируются соединения, которые имеют низкую реакцию на детекторы ВЭЖХ. Основное преимущество этой методики заключается в том, что не нужны реактивные катушки.

Так как смешивание стоков колонны и дериватизирующего реагента происходит более эффективно, чем при традиционных методах. Этот метод был использован для получения информации об антиоксидантах, аминокислотах и фенолах. Его также можно применять к соединениям другого класса, таким как тиолы, металлы, антибиотики и токсины.

Несмотря на то, что вся проба не дериватизируется, из-за более низкого уширения полосы концентрация аналита в потоке сточных вод выше, чем при обычном анализе дериватизации после колонны. Чтобы начать эту процедуру, подготовьте прибор для ВЭЖХ со 100% водой на линии А и 100% метанолом на линии В в качестве подвижной фазы, продувая насосы в соответствии с требованиями производителя. Настройте инструментальные компоненты ВЭЖХ и дополнительный дериватизационный насос.

После этого настройте УФ/ВИД детектор на анализ на длине волны 520 нанометров. Подсоедините входное отверстие колонки реакционного потока (РЧ) к прибору для ВЭЖХ. Подключите к УФ/ВИД детектору выходной периферийный порт с помощью трубки длиной 15 сантиметров и внутренним диаметром 0,13 миллиметра.

Далее подключите насосную линию DPPH к периферийному порту на выходе радиочастотной колонки. Заблокируйте неиспользуемый периферийный порт на выходе радиочастотной колонки с помощью ограничителя колонки. Подсоедините трубку длиной 15 сантиметров и внутренним диаметром 0,13 миллиметра к выходному центральному порту радиочастотной колонки.

Доведите расход насоса ВЭЖХ до одного миллиметра в минуту при 100% метаноле. Затем уравновесьте колонну со 100% метанолом в течение 10 минут. К этому моменту приготовьте 0,1 миллиграмм на миллилитр раствора DPPH и метанола.

Просните колбу с реагентом DPPH в течение 10 минут. Продуйте насос DPPH подготовленным реагентом DPPH в соответствии с требованиями производителя. После этого возьмите два сухих и чистых сосуда и пометьте один как центральный, а другой как периферийный.

Соберите стоки, выходящие из центрального порта, в судно с надписью «центральный» в течение одной минуты. После повторного взвешивания центрального портового судна рассчитайте вес потока из центрального порта. Повторите предыдущие шаги для сброса, выходящего из UV/VIS, который подключен к периферийному порту радиочастотной колонки.

Рассчитайте вес периферийного портового судна. Далее рассчитайте процент потока, поступающего из центрального и периферийного портов. Повторяйте предыдущие шаги до тех пор, пока соотношение расхода не станет правильным, затем установите расход насоса DPPH на 0,5 миллилитра в минуту.

После завершения прогона остановите поток насоса дериватизационного реагента. Снимите линию насоса реагента DPPH с периферийного порта и закройте порт. Уравновесьте колонну с подвижной фазой, в которой она будет храниться, позволив подвижной фазе проходить через колонну со скоростью один миллиметр в минуту в течение 10 минут.

Затем остановите подачу насоса пузырьковой фазы на приборе ВЭЖХ. Наконец, замените реагент DPPH на метанол и продуйте дополнительный насос. Здесь показаны две хроматограммы образца кофе ристретто, дериватизированного с помощью радикала DPPH с использованием обычных инструментов PCD и RF-PCD.

Здесь перечислены расчетные пределы количественного определения и детектирования для каждой из проанализированных аминокислот как в режиме RF-PCD, так и в обычном режиме PCD. Здесь показана хроматограмма четырех аминокислот, проанализированных с использованием традиционного метода PCD, метода RF-PCD и недериватизированного потока метода RF-PCD. Здесь показано сравнение сигналов, полученных для пиков, вызванных глицином и лейцином, с использованием традиционных методов PCD и RF-PCD.

Здесь показано сравнение ширины пика триптофана при анализе с использованием традиционного метода PCD, метода RF-PCD и недериватизированного потока из метода RF-PCD. 21-компонентный тестовый образец, который содержал некоторые компоненты, которые демонстрируют реакцию на схему дериватизации, и некоторые, которые не были разделены, дериватизированы и обнаружены. Эта же смесь также была отделена и обнаружена недериватизированной для сравнения.

Здесь показано сравнение формы пика пара-крезола, как дериватизированных с помощью колонки RF-PCD, так и недериватизированных. После освоения этот метод может быть настроен за то же время, что и обычный анализ дериватизации столбцов. При выполнении этой процедуры важно помнить о том, что нужно быть как можно ближе к предписанным коэффициентам расхода.

После этой процедуры для анализа других соединений можно использовать другие реагенты после дериватизации колонки, такие как ОПА, нингидрин или галогены. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как настроить и настроить колонку потока реакций.