Использование метода рукав в мышиной модели аортальной трансплантации - обучающее видео

При этой процедуре аорта донора размещается в ортопноэлезном положении, а поверхностные прикусы забираются в питательный сосуд. Обезболивайте мышей смесью 1,5 объемного процента изофлурана и 100% кислорода через лицевую маску. Положите мышь на платформу в лежачем положении и примотайте все ножки к операционному столу.

Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость во время процедуры. Проверьте рефлексы, пощипывая задние лапы, чтобы убедиться, что мышь достаточно обезболилась. Удалите все волосы с живота.

Нанесите крем для депиляции или используйте бритву. Проводят операцию в стерильных условиях. Продезинфицируйте брюшную полость.

Чтобы удалить донорскую аорту, сделайте разрез живота по средней линии и вручную втяните кишечник вправо. Аккуратно вручную отведите кишечник в сторону, используя неопудренные перчатки. Поместите кишечник на кусок марли, смоченный солевым раствором, чтобы он оставался влажным.

Очень осторожно отделите брюшную аорту от окружающих тканей с помощью тупого рассечения пинцетом. Рассеките пинцетом сегмент аорты между почечной артерией и разветвлением от полой вены. Закрепите все мелкие ветви этого сегмента с помощью монофиламентного одинарного шва 11-0.

Перед удалением аорты введите в нижнюю полую вену 0,5 миллилитра физиологического раствора, содержащего 50 единиц гепарина. Дайте донорскому животному провести обескровливание до того, как сегмент аорты будет удален. Полностью промойте привой солевым раствором и после этого сразу же поместите его в емкость с ледяным солевым раствором.

Чтобы подготовить реципиента, обезболите животное через маску для лица, удалите шерсть и продезинфицируйте, как указано выше, и сделайте разрез по средней линии от мечевидной кости до таза с помощью скальпеля. Втяните брюшные стенки с помощью ретракторов. Оберните кишечник марлей, смоченной в солевом растворе, и очень аккуратно переместите их вправо от животного.

Рассеките свободную инфраренальную аорту между почечными артериями проксимально и разветвление дистально с помощью пинцета. Закрепите все мелкие ветви этого сегмента с помощью монофиламентного одинарного шва 11-0. Зажмите проксимальную и дистальную части аорты с помощью одинарного шелкового шва 6-0.

Разделите аорту посередине между зажимами и орошите концы порезов гепаринизированным солевым раствором, чтобы промыть просвет. Поместите трансплантат в ортопническое положение. Выполняют анастомоз в рукавной технике с наложением швов с использованием мононити 11-0.

При этом методе конец подающего сосуда помещается в приемный сосуд. Поместите конец инфраренальной аорты реципиента в проксимальный конец донорской аорты. Выполняйте дистальный анастомоз таким же образом.

Поместите дистальный конец донорской аорты в дистальный конец аорты реципиента. Позаботьтесь о том, чтобы избежать перекрута аорты, обеспечив идеальное выравнивание донорской и реципиентной аорты. Момент снятия зажима является очень важным этапом процедуры и должен быть выполнен очень аккуратно.

Убедившись, что анастомоз в порядке, отпустите зажимы. Сначала осторожно отпустите дистальный зажим, а затем проксимальный зажим. Таким образом, создается низкое давление, чтобы удерживать стенки вместе, прежде чем сторона высокого давления будет освобождена.

Трансплантат немедленно перфузируется и просматривается пульс. Аккуратно удалите остатки шелка. Поместите содержимое брюшной полости обратно в брюшную полость и закройте рану с помощью проточного шва полигликолевой кислоты 3-0.

Введите бупренорфин в дозе 0,05 мг на килограмм мыши перед окончанием анестезии. Мы представляем примеры снимков вскрытия трансплантата через шесть недель после трансплантации и его ультразвукового трехмерного и B-режима. На снимках показана проходимость трансплантата.

Размеры просвета трансплантата не изменяются. Кроме того, мы не обнаружили стеноза или аневризматических образований. Существенных поражений в трансплантированных аортах при гистологическом и иммуногистохимическом окрашивании мы не наблюдали.

Ядра окрашивали с помощью DAPI. В заключение следует отметить, что этот очень быстрый метод анастомоза может быть использован для изучения сосудистых заболеваний у генетически модифицированных мышей.