Технический подход к структурному анализу неизвестного соединения в пероральной жидкости Хуосян Чжэнци на основе масс-спектрометрии линейной ионной ловушки

Был разработан многоступенчатый метод фрагментации масс-спектрометрии для идентификации и характеристики сложных составляющих в ротовой жидкости Хуосян Чжэнци. Традиционная тандемная масс-спектрометрия не может определить неизвестные составные структуры. Многоступенчатая масс-спектрометрия обеспечивает более глубокую фрагментацию для всестороннего разъяснения структуры.

Для ультраэффективной подготовки к жидкостной хроматографии начните с двойного клика по программе Xcalibur, чтобы открыть его. Нажмите «Готовы к загрузке», затем нажмите «Прямой контроль». В всплывающем окне нажмите на столбец Pump Module и установите процент B на 50, процент C к нулю и процент D к нулю.

Нажмите кнопку «Мотор», чтобы переключиться в включённое состояние. Нажмите «Больше опций», установите поток на пять миллилитров в минуту и время на 180 секунд в всплывающем окне. Нажмите «Очищение», затем нажмите «Выполнить», несмотря на предупреждение в окне.

Вернитесь в основное окно программного обеспечения и нажмите View Sequence Setup View. Нажмите «Открыть», чтобы импортировать отредактированный шаблон. Кликните правой кнопкой мыши по имени метода и выберите «Открыть файл», чтобы открыть файл метода.

В главном окне программного обеспечения установите первое отношение массы к заряду 100, а последнее — на 1200 массы к заряду. Нажмите «Сохранить», чтобы сохранить метод. Нажмите «Запустить последовательность», выберите «Ожидать» в системе после последовательности, затем нажмите «Хорошо» в всплывающем окне.

Дождитесь, пока инъекция образца будет завершена. Нажмите «Просмотр дорожной карты», затем нажмите значок «Qual Browser», чтобы открыть окно «Qual Browser». Нажмите «Открыть», выберите файл данных в формате RAW, и дважды кликайте для открытия.

Кликните правой кнопкой мыши по окну хроматограммы и выберите «Диапазоны». В разделе фильтра сканирования выберите ESI full MS. В разделе типа сюжета выберите TIC, затем нажмите Окей. Наблюдайте за полной ионной хроматограммой, которая отображается.

Нажмите кнопку pin в окне масс-спектра. В окне хроматограммы нажмите и скользите, чтобы выбрать временной регион с наибольшим относительным содержанием. Наблюдайте соответствующие ионы масс-спектра и записывайте значения соотношения массы к заряду.

Откройте окно настройки приборов. Определите исходный столбец массы N равного двум строкам и введите ранее зафиксированное значение соотношения массы к заряду. Нажмите «Сохранить», чтобы сохранить метод.

Вернитесь в режим настройки последовательности в окне программного обеспечения, измените имя файла и нажмите «Сохранить» для сохранения последовательности. Нажмите «Запустить последовательность», затем нажмите «Хорошо» в всплывающем окне. Дождитесь, пока инъекция образца будет завершена.

Зайдите в окно Qual Browser, нажмите «Открыть», выберите RAW-файл и дважды кликните, чтобы открыть его. Кликните правой кнопкой мыши по окну хроматограммы и выберите «Диапазоны». В разделе фильтра сканирования выберите ESI full MS.In разделе типа графика, выберите TIC и нажмите Okay, чтобы отобразить хроматограмму.

В окне масс-спектра нажмите кнопку PIN. Выберите временную область с самым сильным относительным содержанием и наблюдайте ионы масс-спектра. Запишите значения соотношения массы к заряду для следующего уровня масс-спектрометрии.

В окне настройки прибора найдите родительский столбец массы N с тремя строками, и введите ранее зафиксированное значение соотношения массы к заряду. Нажмите «Сохранить», чтобы сохранить метод. Как уже было показано, повторите процедуру просмотра данных для завершения инъекции образца и анализа.

После открытия исходного файла данных нажмите кнопку нажатия в окне масс-спектра и наблюдайте за изменяющимися пиками ионов фрагментов. В окне настройки приборов перейдите в колонку Act Type и нажмите CID. Затем выберите PQD или ETD, чтобы изменить режим столкновения.

В столбце «Нормализованная энергия столкновения» нажмите 35 и измените её на 50, чтобы отрегулировать энергию столкновения. Рисуйте родительские ионы и фрагментационные ионы в программном обеспечении для рисования, включая структуру родительского иона, название состава и значение отношения массы к заряду. В качестве примера определите фрагмент при соотношении массы к заряду 461,15 и изучите ион-предшественник с отношением массы к заряду 623,21 в спектре тандемной масс-спектрометрии.

Вычислите разницу масс. Проанализируйте дальнейшую фрагментацию промежуточного иона с соотношением массы к заряду 461,15. Для получения продукта иона с отношением массы к заряду 315,09 в кубическом МС вычисляется разница масс на основе положения соединения и анализа связей всех фрагментов.

Выведите окончательную структуру неизвестного соединения с отношением массы к заряду 623,21. Неизвестное соединение с соотношением массы к заряду 623,21 потеряло одну гексозную единицу и дало ион фрагмента с соотношением массы к заряду 461,15. Третичная масс-спектрометрическая фрагментация промежуточного вещества получила необьякантеликол с соотношением массы к заряду 315,09 после потери одного рамнозного блока.

Четырёхкратная масс-спектрометрия необякангеликола дала фрагментный ион с соотношением массы к заряду 135,09. Структура неизвестного соединения была выведена из многоступенчатого фрагментационного паттерна. Неизвестные соединения с соотношением массы к заряду 545,41 и 365,12 были выведены тем же методом фрагментации.

Этот протокол позволяет проводить детальный анализ и структурную характеристику более неизвестных соединений в лекарственных травах и китайских патентованных лекарствах. Четкое понимание основной структуры основных компонентов необходимо для точной фрагментации и анализа с использованием этого протокола. Эта процедура позволяет разработать многоступенчатую базу данных фрагментации масс-спектрометрии для улучшения идентификации соединений и сравнительного анализа.