丝状真菌

Environmental Microbiology

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Overview

资料来源: 实验室的博士伊恩胡椒和博士查尔斯称-亚利桑那大学
演示作者: 布拉德利施密茨

真菌是异养的真核生物,和酵母,除了是有氧。他们在表层土壤丰富,是重要的在养分循环中的作用和有机物质和有机污染物分解。白的腐真菌 (黄 chryosporium) 例如,(图 1) 已知能够降解芳烃。

Figure 1
图 1。白腐病桦木。

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JoVE Science Education Database. 环境微生物学精要. 丝状真菌. JoVE, Cambridge, MA, (2019).

Principles

土壤通常包含数以百万计的每克,真菌,因此土壤通常稀释使用稀释系列。一稀释系列是土壤的由分散的解决方案,如去离子水中的悬浮给定。暂停的整除数然后转移到新鲜的溶液,直到暂停充分稀释,允许个别离散的真菌菌落在琼脂平板上生长。(图 2)

接种后几个复制琼脂板上,板孵化在 25 ° c。宏观的真菌殖民地的形成后,他们都被计数,如图 3所示。因为假设是一个真菌菌落源自一种有机体,菌落形成单位(CFUs) 一词用于在最后的分析中,结果每克干土,烤箱用 CFUs 表示。

正常可培养真菌计数从肥沃的土壤是土壤的范围内的 106-106真菌"繁殖体"(孢子、 菌丝或菌丝片段) 每克干燥。可培养平板计数已经使用枚举自十九世纪以来的有机体。他们继续使用,今天,他们是来执行,需要少的劳动力价格低廉,是快速,和重现性较好。然而,他们罹患了一些错误,对结果进行评价时,必须考虑。其中最重要的这些错误是很多生物不会文化媒体板的事实。

Figure 2
图 2。稀释和电镀技术。在这里,稀释的土壤悬液直接纳入琼脂培养基,而不是表面应用传播电镀是一例。从环境 & 污染科学,2nd 主编,学术出版社,圣地亚哥,加利福尼亚州

Figure 3
图 3。土壤真菌分离表面的土壤生长在培养皿中,并加入玫瑰孟加拉琼脂。照片礼貌 K.L.约瑟夫森。从环境 & 污染科学,2nd 主编,学术出版社,圣地亚哥,加利福尼亚州。

Procedure

1.土壤样品制备

  1. 首先,确定土壤初始含水量由隔夜的已知量的潮湿的土壤中,干燥和硬仗土壤干。方程来确定土壤初始含水量是:
    Equation 1
    (方程 1)
    地点:
    MC = 水分含量
    W = 净重量
    D = 干重
  2. 计算的金额必须添加到 25 克的土壤,增加土壤含水量对干体重的基础上 10%的水。
  3. 接下来,添加大量水 25 克的土壤。
  4. 用塑料包装容器上盖上和穿刺影片用探针允许曝气孵化期间几次。安全膜用橡胶带。
  5. 衡量土壤和包装,然后样品在室温下孵育一周。

2.真菌接种与培养

  1. 完成孵化后,衡量土壤样品的包装与橡皮筋。计算的重量损失水分流失。
  2. 计算新的土壤水分含量。
  3. 接下来,准备 1/10-稀释系列的土壤如图 2所示。这将导致稀释 10-1 (瓶 A)、 10-2 (管 B)、 10-3 (管 C),10-4 (D 管),10-5 (管 E) g 土壤每毫升悬浮液。
  4. 准备不育玫瑰孟加拉-链霉素琼脂平板。孟加拉和链霉素抑制细菌的生长。对于非常肥沃的土壤,土壤微生物数量很高,空房的稀释应更高,10-310-4,,10-5,g 土壤每板。
  5. 每个 10-3在琼脂表面使用乙醇火焰蔓延灭菌玻璃吊具、 板,从稀释管 10-2,添加 0.1 毫升。因为 0.1 毫升数量镀金,这使得有效稀释 10-3。对于所有稀释重复这些步骤。
  6. 板在室温下孵育一周。

3.菌落计数及显微镜检查

  1. 每个土壤稀释,且仅有一个采用使菌落计数。计数板应该有谨慎的可数名词殖民地。杂草丛生的板不应计算在内。同样,不应算板与小于 10 的殖民地。注意到并描述三种不同的殖民地的文化特征。
  2. 在幻灯片上的压胶带 (透明胶带) 坐骑准备详细的显微镜研究使用下面的过程:
    1. 存一滴 lactophenol 安装流体在干净的玻璃幻灯片的中心
    2. 切一条透明的玻璃纸胶带约 3 厘米长从股票卷。为了避免污染表面胶时处理磁带, 使用产钳。夹层的针,将有助于释放钳从磁带。
    3. 胶带粘面应用于表面的培养真菌菌落。要避免过度的压力,在磁带或太黑压压的菌丝和孢子将收集。
    4. 从接触真菌菌落中取出磁带,并应用它粘贴一侧下来,滴在玻片上安装流体。用快递气泡光滑、 平坦文书轻轻摩擦的磁带。
    5. 用油检查镜下油浸物镜的磁带装载。
    6. 确定两个不同的真菌属使用提供的真菌鉴定键 (图 4)。

Figure 4
图 4。真菌鉴定的关键。

丝状真菌是经常发现大量在土壤中,发挥重要的作用,在生态系统中的多细胞、 真核生物。可以隔离、 量化,并在实验室检查真菌。

真菌是丰富的表层土壤和重要角色扮演在养分循环及分解的有机物质和污染物。他们无法合成自己的食物被列为异养和是好氧的因此需要氧气。

对文化真菌,土壤样品是在已知浓度入无菌水稀释,然后镀上琼脂平板和孵化。然后,由此产生的真菌菌落可能计数,并确定。

此视频将说明隔离、 量化和丝状真菌鉴定背后的原则。

土壤通常包含数以百万计的真菌每克;因此,系列稀释,通常用于准备分析土壤样品。给定的土壤被添加到一个分散的解决方案。悬浮的整除的数被转移到系列中的缓冲溶液稀释暂停直到足以使离散的真菌菌落生长。

这些稀释然后是镀上培养基和培养。一旦形成可见真菌菌落,他们是可以计数的。认为每个真菌菌落从一个单一的有机体,菌落形成单位或 CFU,一词用来表达计算每克干土壤有机体的数量。

大多数真菌成长为菌丝,长,分支结构,营养生长的主要模式。聚合的菌丝称为菌丝体。真菌也可能存在作为单细胞生物体,酵母是一个知名的例子。

真菌的繁殖可以发生在几种方式之一。菌丝产真菌可以无性生殖,通过肢解菌丝,或从茎上有种子状孢子。一种单细胞真菌可无性繁殖的萌芽。

真菌也有性繁殖。这是比无性繁殖,不太常见,通常发生在不利环境条件下的响应。在菌丝产生真菌,从不同的真菌菌株的两个生殖菌丝可以融合,创建一个受精卵。在单一的单细胞真菌中,两个单元格的相反株将保险丝。

肥沃的土壤通常包含在范围内 106真菌"繁殖体"每克干重。繁殖体是真菌孢子、 菌丝或菌丝片段。使用可培养平板计数是一种快速、 价格低廉,和重现性好的技术澄清真菌的内容。然而,结果可以扭曲事实,并非所有的有机体将文化媒体板上。

孟加拉红琼脂平板用抗生素,如链霉素,通常用于真菌文化。因为细菌是远远多于大多数土壤中的真菌,理想的真菌媒体将选择对细菌的生长,同时允许真菌生存。玫瑰孟加拉染料抑制大多数细菌的生长,减少真菌菌落的大小。这是理想的并防止真菌板以及控制细菌过度生长。

现在,我们都熟悉背后培养丝状真菌的原则,让我们看看如何这在实验室中进行。

一旦已采集土壤样本,送到实验室进行分析。首先,计算土壤的水分含量。添加去离子的水,水分含量为 15%。

把用塑料包装容器盖和安全的橡胶带,以防止蒸发。几次穿刺影片允许曝气。

权衡的土壤样品和容器和记录。在室温下一周,让自然发生真菌生长孵化。

重新权衡的土壤样品和容器和记录重量。一周计算重量损失水分流失。水加到土壤中,把体重回原始值。

添加 95 毫升的蒸馏水 10 g 的潮湿的土壤,调匀。这是 10-1稀释,因为 10 g 土的体积约 5 毫升。执行四个串行稀释度的 1 毫升到 9 毫升空白使用水从这个股票的解决方案。

接下来,收集八不育玫瑰-孟加拉-链霉素琼脂平板。两大板块,从稀释管 10-2,添加 0.1 毫升和琼脂表面使用乙醇火焰灭菌玻璃吊具蔓延。因为 0.1 毫升数量镀金,这使得有效稀释 10-3

这些板块在室温下的暗柜中孵育一周。

一周后,计数每个印版上的离散聚居。应计数板的 10 到 20 真菌菌落。请注意,描述特点的板或殖民地。

采取清洁玻璃显微镜幻灯片和存款 lactophenol 入中心安装液一滴。使用镊子,避免污染,切断一条透明的玻璃纸磁带长约 3 厘米。如果必要,请使用解剖针免费从钳磁带。

适用于培养真菌殖民地,并注意避免过度压力的表面粘贴一侧的磁带。接下来,适用于安装流体在载玻片的孢子样本带胶面。与光滑、 平坦的仪器,排除气泡轻轻擦洗磁带。

检查磁带装载下一个高性能的目标。

真菌可显微镜下通过审查的子实体和孢子。真菌鉴定关键可以协助这一进程。常见的真菌类型观察包括青霉曲霉

使用板,真菌都可以列举加上,随着细菌的枚举使用相同的技术。

鉴定和培养真菌是用于各种科学的应用。

纸浆和造纸生产设备等行业可能使用丝状真菌降解木在其制浆过程中,在一种称为生物制浆。如白腐真菌可能会降低木片有效,导致减少需要利用化学或机械制浆。

真菌也可以用来打破其他材料,包括某些类型的可生物降解塑料。这可用于农业或园艺的应用程序,可生物降解地膜可用于创建临时壁垒有害的植物的生长。

真菌也是生产者的抗生素,了医学革命在 20 世纪,并继续被感染今天的前线防御的化合物。青霉素,一种广泛使用的抗生素,是孤立的常见的丝状真菌青霉鲁本斯。为了这一天,丝状真菌仍分离和研究,寻求新的抗生素。

你刚看了丝状真菌的朱庇特的简介。现在,您应该了解如何文化土壤中的丝状真菌、 如何量化它们,以及如何识别类型的土壤中常见的真菌。谢谢观赏 !

Results

菌落计数

每克土壤真菌菌落数量等于菌落计数板镀稀释的倒数乘以数量。例如,如果 46 殖民地计算稀释 10-5,然后每克土壤 CFU 是 46 x 105或 4.6 x 106

三个不同的真菌属的鉴定

真菌可显微镜下通过审查的子实体和孢子。真菌鉴定关键可以协助这一进程。(图 4)常见的真菌类型观察包括青霉曲霉

Applications and Summary

稀释和电镀的土壤真菌可以用作相对值的健康的土壤。"健康"的肥沃土壤,通常会有 105至 106真菌每克土壤。它也可以用于分离纯培养的特定真菌,随后评估特定的属性,如降解有机物的能力。这些可以是白腐真菌,是一例有害或有益时有毒有机物降解通过生物降解。纯培养真菌的其它用途包括真菌抗生素的隔离。例如,第一种抗生素曾经青霉素,由土源性真菌青霉菌。这是首次发现的先生。亚历山大 · 弗莱明在 1929 年。

References

  1. Pepper, I.L., Gerba, C.P., Brusseau, M. Environmental & Pollution Science, 2nd Ed. Academic Press, San Diego, CA. (2006).
  2. Pepper, I.L., Gerba, C.P. Environmental Microbiology, A Laboratory Manual, 2nd Ed. Academic Press, Boston, MA. (2005).

1.土壤样品制备

  1. 首先,确定土壤初始含水量由隔夜的已知量的潮湿的土壤中,干燥和硬仗土壤干。方程来确定土壤初始含水量是:
    Equation 1
    (方程 1)
    地点:
    MC = 水分含量
    W = 净重量
    D = 干重
  2. 计算的金额必须添加到 25 克的土壤,增加土壤含水量对干体重的基础上 10%的水。
  3. 接下来,添加大量水 25 克的土壤。
  4. 用塑料包装容器上盖上和穿刺影片用探针允许曝气孵化期间几次。安全膜用橡胶带。
  5. 衡量土壤和包装,然后样品在室温下孵育一周。

2.真菌接种与培养

  1. 完成孵化后,衡量土壤样品的包装与橡皮筋。计算的重量损失水分流失。
  2. 计算新的土壤水分含量。
  3. 接下来,准备 1/10-稀释系列的土壤如图 2所示。这将导致稀释 10-1 (瓶 A)、 10-2 (管 B)、 10-3 (管 C),10-4 (D 管),10-5 (管 E) g 土壤每毫升悬浮液。
  4. 准备不育玫瑰孟加拉-链霉素琼脂平板。孟加拉和链霉素抑制细菌的生长。对于非常肥沃的土壤,土壤微生物数量很高,空房的稀释应更高,10-310-4,,10-5,g 土壤每板。
  5. 每个 10-3在琼脂表面使用乙醇火焰蔓延灭菌玻璃吊具、 板,从稀释管 10-2,添加 0.1 毫升。因为 0.1 毫升数量镀金,这使得有效稀释 10-3。对于所有稀释重复这些步骤。
  6. 板在室温下孵育一周。

3.菌落计数及显微镜检查

  1. 每个土壤稀释,且仅有一个采用使菌落计数。计数板应该有谨慎的可数名词殖民地。杂草丛生的板不应计算在内。同样,不应算板与小于 10 的殖民地。注意到并描述三种不同的殖民地的文化特征。
  2. 在幻灯片上的压胶带 (透明胶带) 坐骑准备详细的显微镜研究使用下面的过程:
    1. 存一滴 lactophenol 安装流体在干净的玻璃幻灯片的中心
    2. 切一条透明的玻璃纸胶带约 3 厘米长从股票卷。为了避免污染表面胶时处理磁带, 使用产钳。夹层的针,将有助于释放钳从磁带。
    3. 胶带粘面应用于表面的培养真菌菌落。要避免过度的压力,在磁带或太黑压压的菌丝和孢子将收集。
    4. 从接触真菌菌落中取出磁带,并应用它粘贴一侧下来,滴在玻片上安装流体。用快递气泡光滑、 平坦文书轻轻摩擦的磁带。
    5. 用油检查镜下油浸物镜的磁带装载。
    6. 确定两个不同的真菌属使用提供的真菌鉴定键 (图 4)。

Figure 4
图 4。真菌鉴定的关键。

丝状真菌是经常发现大量在土壤中,发挥重要的作用,在生态系统中的多细胞、 真核生物。可以隔离、 量化,并在实验室检查真菌。

真菌是丰富的表层土壤和重要角色扮演在养分循环及分解的有机物质和污染物。他们无法合成自己的食物被列为异养和是好氧的因此需要氧气。

对文化真菌,土壤样品是在已知浓度入无菌水稀释,然后镀上琼脂平板和孵化。然后,由此产生的真菌菌落可能计数,并确定。

此视频将说明隔离、 量化和丝状真菌鉴定背后的原则。

土壤通常包含数以百万计的真菌每克;因此,系列稀释,通常用于准备分析土壤样品。给定的土壤被添加到一个分散的解决方案。悬浮的整除的数被转移到系列中的缓冲溶液稀释暂停直到足以使离散的真菌菌落生长。

这些稀释然后是镀上培养基和培养。一旦形成可见真菌菌落,他们是可以计数的。认为每个真菌菌落从一个单一的有机体,菌落形成单位或 CFU,一词用来表达计算每克干土壤有机体的数量。

大多数真菌成长为菌丝,长,分支结构,营养生长的主要模式。聚合的菌丝称为菌丝体。真菌也可能存在作为单细胞生物体,酵母是一个知名的例子。

真菌的繁殖可以发生在几种方式之一。菌丝产真菌可以无性生殖,通过肢解菌丝,或从茎上有种子状孢子。一种单细胞真菌可无性繁殖的萌芽。

真菌也有性繁殖。这是比无性繁殖,不太常见,通常发生在不利环境条件下的响应。在菌丝产生真菌,从不同的真菌菌株的两个生殖菌丝可以融合,创建一个受精卵。在单一的单细胞真菌中,两个单元格的相反株将保险丝。

肥沃的土壤通常包含在范围内 106真菌"繁殖体"每克干重。繁殖体是真菌孢子、 菌丝或菌丝片段。使用可培养平板计数是一种快速、 价格低廉,和重现性好的技术澄清真菌的内容。然而,结果可以扭曲事实,并非所有的有机体将文化媒体板上。

孟加拉红琼脂平板用抗生素,如链霉素,通常用于真菌文化。因为细菌是远远多于大多数土壤中的真菌,理想的真菌媒体将选择对细菌的生长,同时允许真菌生存。玫瑰孟加拉染料抑制大多数细菌的生长,减少真菌菌落的大小。这是理想的并防止真菌板以及控制细菌过度生长。

现在,我们都熟悉背后培养丝状真菌的原则,让我们看看如何这在实验室中进行。

一旦已采集土壤样本,送到实验室进行分析。首先,计算土壤的水分含量。添加去离子的水,水分含量为 15%。

把用塑料包装容器盖和安全的橡胶带,以防止蒸发。几次穿刺影片允许曝气。

权衡的土壤样品和容器和记录。在室温下一周,让自然发生真菌生长孵化。

重新权衡的土壤样品和容器和记录重量。一周计算重量损失水分流失。水加到土壤中,把体重回原始值。

添加 95 毫升的蒸馏水 10 g 的潮湿的土壤,调匀。这是 10-1稀释,因为 10 g 土的体积约 5 毫升。执行四个串行稀释度的 1 毫升到 9 毫升空白使用水从这个股票的解决方案。

接下来,收集八不育玫瑰-孟加拉-链霉素琼脂平板。两大板块,从稀释管 10-2,添加 0.1 毫升和琼脂表面使用乙醇火焰灭菌玻璃吊具蔓延。因为 0.1 毫升数量镀金,这使得有效稀释 10-3

这些板块在室温下的暗柜中孵育一周。

一周后,计数每个印版上的离散聚居。应计数板的 10 到 20 真菌菌落。请注意,描述特点的板或殖民地。

采取清洁玻璃显微镜幻灯片和存款 lactophenol 入中心安装液一滴。使用镊子,避免污染,切断一条透明的玻璃纸磁带长约 3 厘米。如果必要,请使用解剖针免费从钳磁带。

适用于培养真菌殖民地,并注意避免过度压力的表面粘贴一侧的磁带。接下来,适用于安装流体在载玻片的孢子样本带胶面。与光滑、 平坦的仪器,排除气泡轻轻擦洗磁带。

检查磁带装载下一个高性能的目标。

真菌可显微镜下通过审查的子实体和孢子。真菌鉴定关键可以协助这一进程。常见的真菌类型观察包括青霉曲霉

使用板,真菌都可以列举加上,随着细菌的枚举使用相同的技术。

鉴定和培养真菌是用于各种科学的应用。

纸浆和造纸生产设备等行业可能使用丝状真菌降解木在其制浆过程中,在一种称为生物制浆。如白腐真菌可能会降低木片有效,导致减少需要利用化学或机械制浆。

真菌也可以用来打破其他材料,包括某些类型的可生物降解塑料。这可用于农业或园艺的应用程序,可生物降解地膜可用于创建临时壁垒有害的植物的生长。

真菌也是生产者的抗生素,了医学革命在 20 世纪,并继续被感染今天的前线防御的化合物。青霉素,一种广泛使用的抗生素,是孤立的常见的丝状真菌青霉鲁本斯。为了这一天,丝状真菌仍分离和研究,寻求新的抗生素。

你刚看了丝状真菌的朱庇特的简介。现在,您应该了解如何文化土壤中的丝状真菌、 如何量化它们,以及如何识别类型的土壤中常见的真菌。谢谢观赏 !

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