Soxhlet-Extraktion von Lipid Biomarker aus Sediment

Earth Science

Your institution must subscribe to JoVE's Environmental Sciences collection to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 1 hour trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Overview

Quelle: Labor von Jeff Salacup - University of Massachusetts Amherst

Jedes Labor braucht Standards, die der Wertentwicklung, Genauigkeit und Präzision ihrer Instrumente im Laufe der Zeit, eine Messung, die heute zu gewährleisten ist das gleiche wie eine Messung gemacht ein Jahr ab jetzt (Abbildung 1). Da Normen die Entwicklung der Instrumente über einen langen Zeitraum hinweg testen müssen, sind oft große Mengen der Standards erforderlich. Viele chemische Standards sind wissenschaftliche Handelsunternehmen wie Sigma-Aldrich und Fisher erhältlich. Jedoch haben einige Verbindungen, die in der Natur vorkommen und für paläoklimatische Untersuchungen relevant sind, noch nicht isoliert und gereinigt erworben wurden. Daher müssen diese Verbindungen natürlichen Proben entnommen werden, und wegen der großen Volumes der geforderten Standards müssen große Mengen an Sediment extrahiert werden. Die beschleunigte Solvent Extraction (Dionex) und Beschallung Extraktionen eignen sich nicht für die Gewinnung von so großen Sediment-Volumen. Unter diesen Umständen wird eine Soxhlet-Extraktion verwendet.

Figure 1
Abbildung 1: Schematische Darstellung, wie chemische standard überwacht die Leistung eines Instruments durch die Zeit. Die gestrichelte Linie stellt eine 1:1 Beziehung zwischen akzeptiert und (auf dem Instrument) gemessenen Wert einer Variablen. Jeder Stern ist eine wöchentliche Messung des chemischen Standards. Grüne Sterne stehen für Standards, die zutreffen. Rote Sterne spiegeln diejenigen, die nicht genau darauf hinweist, dass das Instrument korrektive Wartung erfordert.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Earth Science. Soxhlet-Extraktion von Lipid Biomarker aus Sediment. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

Soxhlet-Extraktion ist wahrscheinlich die älteste Form der Extraktion organischer Substanz. Archäologische Zeugnisse aus Mesopotamien stellt die Verwendung von einem Soxhlet-ähnliches Gerät, die Warmwasser ~ 3.500 BC1,2genutzt. Moderne Soxhlets verwenden ausgefeilte geblasenem Glas Kondensatoren und organischen Lösungsmitteln in diesem "fortlaufend" Extraktionsmethode (Abbildung 2). Lösungsmittel ist aus einem Runde-die Talsohle Kolben nach oben in einen Kondensator mit einer umlaufenden Kaltwasser Spule zurückgeflossen. Wenn das gasförmige Lösungsmittel die Spule Kontakte, kondensiert es in eine Kammer mit einen Glasfaser Fingerhut halten die Probe. Diese Kammer ist mit einer Recirculator gesetzt, und wenn ein bestimmtes Volumen (in der Regel ein Volumen groß genug, um die gesamte Probe Tauchen) erreicht ist, wird die Kammer zurück in die Runde-die Talsohle Kolben über eine integrierte Siphon, wo der Lipid-Extrakt sammelt, während das Lösungsmittel Teil des nächsten Zyklus wird gespült. Daher der Begriff "kontinuierliche" Extraktion. Soxhlet-Extraktion wird häufig verwendet, für die Gewinnung von größeren (> 10 g) Proben.

Figure 2
Abbildung 2. Einem Soxhlet-Apparat.

Soxhlet-Extraktion ist eine Methode der Verbindungen, wie Lipide, aus einer großen Menge an Feststoff mit einem relativ kleinen Volumen des Lösungsmittels zu isolieren.

Viele der Verbindungen für paläoklimatische Untersuchungen relevant sind nicht verfügbar, von wissenschaftlichen Handelsunternehmen zu kaufen. Standards für diese Verbindungen müssen daher aus natürlichen Proben vorbereitet werden.

Große Mengen an Standard sind erforderlich, um die Leistung eines Instruments im Laufe der Zeit zu bewerten. Um eine geeignete Menge eines Biomarkers für standard Vorbereitung zu erhalten, muss eine große Menge an Sediment abgesaugt werden.

Die Soxhlet-Extraktor, der 1870 von Franz von Soxhlet erfunden ermöglicht automatisierte, Batch-Extraktion aus einem soliden, erhöhen die Gesamteffizienz und eine kleine Menge des Lösungsmittels.

Dieses Video ist Teil einer Serie über Lipid-Extraktion, Reinigung und Analyse von Sedimenten. Es zeigen Soxhlet-Extraktion von Lipid Biomarker aus Meeresablagerungen für den Einsatz in Paleothermometry und einigen andere Anwendungen von Soxhlet-Extraktion in Earth Science und Chemie führen.

Eine typische Baugruppe verwendet eine Runde Talsohle Kolben, ein kaltes Wasser-Kondensator und der Soxhlet-Apparat selbst. Der Volumenkörper zu extrahierenden befindet sich in einen Fingerhut in der zentralen Kammer des Apparates. Die Extraktion wird unterstützt durch die Zugabe von Energie in Form von Wärme, bekannt als zurückfließt. Der Lösungsmitteldampf steigt durch die Destillation-Pfad in der Soxhlet-Apparatur in den Kondensator. Bei der Verdichtung, sammelt das Lösungsmittel in der Kammer auflösen einige des organischen Materials in den Fingerhut. Wie die Kammer füllt, füllt der Siphon sowie. Wenn der Siphon voll ist, fließt die Lösung in die Flasche zurück. Projektmappenebene übersteigt niemals die Spitze der Fingerhut, also keine festen die Küvette tritt.

Der Lipid-Extrakt sammelt kontinuierlich in den Kolben, während das Lösungsmittel Bestandteil des nächsten Zyklus der Extraktion wird. So kann den Zyklus auf unbestimmte Zeit ohne Verlust des Lösungsmittels zu wiederholen.

Die Erhaltung des Lösungsmittels, die kontinuierliche Natur die Extraktion und die Fähigkeit zur Aufnahme von großen Stichprobengrößen ist Soxhlet-Extraktion ideal für organische Verbindungen aus großen Teilen des unlöslichen Material zu isolieren.

Nun, da Sie die Prinzipien der Soxhlet-Extraktion zu verstehen, gehen Sie wir durch ein Verfahren für die Soxhlet-Extraktion von Lipid Biomarker von Sediment.

Für dieses Experiment wird eine Probe des überschüssigen Meeresablagerungen von einer coring Expedition verwendet. Die Probe wird gefriergetrocknet, zerkleinert und homogenisiert werden. Verweisen Sie für weitere Anweisungen diese Sammlung Video auf Extraktion durch Ultraschallbehandlung.

Zur Vorbereitung auf die Extraktion, stellen Sie zunächst eine 9:1 Lösung von Dichlormethan zu Methanol. Diese Lösung wird als Lösungsmittel Extraktion und waschen Sie die Glaswaren und Labor-Instrumente verwendet werden.

Organische Verunreinigungen, verbrennen die Runde-die Talsohle Flasche Soxhlet-Apparat, Glasfaser Fingerhut und wiegen Dosen für 6 h bei 550 ° c entfernen Eine Runde Talsohle Kolben das DCM-Methanol-Lösung zu waschen. Einmal fertig, um die Extraktion einzurichten, spülen einer Labor-Spachtel und fünf bis zehn kochende Späne mit der DCM-Methanol-Lösung.

Um Bau der Extraktion Montage zu beginnen, richten Sie ein Heizpilz unter einem Abzug. Erhalten Sie einen Kondensator, einem Stativ, Rundboden-Kolben und der Soxhlet-Apparat zu sichern.

Eine Verbrennung mit einem Gewicht von Zinn zu tarieren. Mit dem Lösungsmittel gespült Spatel ca. 50 g der Probe auf der Waage Zinn übertragen und die Masse notieren. Laden Sie das Material in den verbrannt Glasfaser Fingerhut.

Als Nächstes füllen Sie die verbrannt und gespült Runde Talsohle Kolben etwas mehr als halb, der DCM-Methanol-Lösung voll. Fügen Sie die gewaschenen kochendem Chips hinzu und die Runde-die Talsohle Kolben in der Heizpilz.

Legen Sie dann die Probe Fingerhut geöffnet am Ende in der Kammer der Soxhlet-Apparat. Schließen Sie das Gerät in die Runde-die Talsohle Kolben und Klemmen Sie das Gerät an Ort.

Sichern Sie den Kondensator an die Spitze der Soxhlet-Apparat. Verbinden Sie die Kaltwasserleitung an den unteren Anschluss des Kondensators mit einer Schlauch-Klemme oder Zip-Krawatte. Schließen Sie die Ablaufleitung an den oberen Anschluss des Kondensators und leiten Sie es an den Abfluss.

Schalten Sie das Wasser in den Kondensator und überprüfen Sie den Fließweg zu. Dann schalten Sie den Heizpilz und erhitzen Sie das Lösungsmittel zum Rückfluss.

Als das Lösungsmittel kondensiert beginnt, stellen Sie sicher, dass das Kondensat in die Kammer tropft und der Extrakt in die Runde-die Talsohle Flasche abgezapft wird. Das Lösungsmittel sollte ein Sieden während der Extraktion übernachten.

Monitor der Extraktion und der Kondensator Wasserdurchfluss bis die Extraktion ist abgeschlossen. Dann stoppen Sie die Extraktion durch das Ausschalten der Heizpilz. Sobald der Extrakt abgekühlt ist, entfernen Sie den Kondensator und Soxhlet-Apparat. Abschließend Versiegeln der Runde Talsohle Küvette mit der gesamten Lipid-Extrakt und zur Weiterverarbeitung zu speichern.

Soxhlet-Extraktion wird häufig für die chemische Analyse einer festen Probe verwendet und kann auch für Reagenz Vorbereitung und Reinigung verwendet werden.

Soxhlet-Extraktion kann verwendet werden, um die Anwesenheit von polychlorierten APEO Verbindungen oder PCBs, in der Umgebung. Der Auftragswirkungsgrad von Leiterplatten aus Beutefisch auf Raubfische wurde gemessen, um weitere Informationen über die gesundheitlichen Risiken für den Menschen zu gewinnen und Tierwelt durch den Verzehr von kontaminierten Fisch. Soxhlet-Extraktion von Fisch Gewebe ermöglicht die Vorbereitung von Proben für Gaschromatographie und Massenspektrometrie.

Verbindungen, um die Umwelt in großen Mengen eingeführt werden sind ist ein Nebenprodukt der Pyrolyse von organischen Materie, die beim Hinzufügen des Bodens, kann Verbesserung der Bodenqualität und Schadstoffe aufnehmen auf das Vorhandensein von PCBs. Biochar analysiert. Validierung der Pflanzenkohle Produktionsmethoden für einen breiten Einsatz umfasst Soxhlet-Extraktion, auf das Vorhandensein von PCB durch Gaschromatographie zu testen.

Soxhlet-Extraktion kann auch auf festem Untergrund zu reinigen durch Extraktion von unerwünschten Verbindungen verwendet werden. Langkettige Fettsäuren wurden selektiv durch schrittweisen Extraktion wachsfreien Tomate Kutikula Ausbeute von Tomaten häuten entfernt. Der schrittweise Abbau erfolgte mit mehreren Lösungsmitteln unterschiedlicher Polaritäten in Folge. Dies nicht nur umfassende Wachs Entfernung aus der Haut von Tomaten, sondern erlaubt die Isolation der einzelnen Wachs Moieties basierend auf Löslichkeit Eigenschaften sowie.

Sie habe nur Jupiters Einführung in die Soxhlet-Extraktion von Lipid Biomarker von geologischen Archiv Sedimente beobachtet. Jetzt sollte Sie vertraut mit den Prinzipien, die hinter Soxhlet-Extraktion, das Verfahren für die Soxhlet-Extraktion von einer Sedimentprobe und einige Beispiele wie die Soxhlet-Extraktion für analytische Zwecke verwendet werden kann.

Danke fürs Zuschauen!

Procedure

<>

1. Setup und Vorbereitung der Materialien

  1. Sammeln Sie eine Probe des gefrorenen, gefriergetrocknete, zerkleinert und homogenisiert Meeresablagerungen. Eine Probe davon enthält viele der Verbindungen für Standards erforderlich.
    1. Normen bestehen oft aus Sedimenten, die nach einem coring Expedition oder Analyse übrig sind. Zum Beispiel wird in diesem Experiment, Sediment, das aus dem "Schlamm-Pflaster" liegt südlich von Cape Cod abgerufen wurde extrahiert. Dieses Sediment wurde als Teil einer coring Expedition genommen aber wird nicht verwendet werden, um wissenschaftliche Fragen zu beantworten. Wir können es daher, um einen Standard zu machen.
    2. Legen Sie ein ~ 100 g Stück des Sediments in der Tiefkühltruhe über Nacht, so dass es durch friert.
    3. Sobald das Sediment vollständig gefroren ist, schalten Sie das Einfrieren Trockner (erhältlich von vielen wissenschaftlichen Geräten Einzelhändler wie Fisher) und warten Sie, bis der Kondensator Sollwert erreicht (oft ~-30 ° C).
    4. Laden Sie die Sedimentprobe in den Gefriertrockner und schließen Sie die Säuberung zu beginnen, zieht ein Vakuum auf die Probe.
    5. Je nach der Menge des Wassers im Sediment, und die Größe der Stichprobe dauert es mehrere Tage Probe zu trocknen.
    6. Sobald die Probe trocken ist, schalten Sie den Trockner, Einfrieren-Vent es, und entfernen Sie die Probe.
    7. Legen Sie die Probe in einem Lösungsmittel gespült Mörser mahlen zu einem Pulver mit einem Stößel. Tun Sie dies auf die gesamte Stichprobe und Shop in einem Glas in der Tiefkühltruhe bis bereit zu extrahieren.
  2. Abhängig von der Größe der Probe mit einem Volumen von 4-60 mL Fläschchen verwendet werden. Verwenden Sie für dieses Experiment Borosilikat Glasvials (40 mL) und Lösungsmittel sicher Kappen. Verbrennen die Vials, Borosilikatglas Pipetten und mit einem Gewicht von Dosen bei 550 ° C 6 h vor dem Entfernen der möglichen organischen Verunreinigungen zu gewährleisten.
  3. Zu erhalten, Dichlormethan und Methanol (beide sind gemeinsam in den meisten organischen Geochemie Laboratorien), dann benutzen sie individuell Lab Tools und Glaswaren vor Gebrauch abspülen. Eine Mischung von Dichlormethan (DCM) in Methanol (MeOH; 9:1) ist in vielen Labors verwendet, um effizient Biomarker mit einer breiten Palette von Polaritäten zu extrahieren. Lösungsmittel sollte frei von organischen Verunreinigungen sein.
  4. Erwerben einer Soxhlet-Apparatur zu verwenden in diesem Experiment (diese können von Fisher Scientific oder Wissenschaft Einzelhändler gekauft werden), dann waschen und verbrennen es bei 550 ° C für 6 h vor der Verwendung.
  5. Glas-Faser-Fingerhüte (kann von Whatman erworben werden) und verbrennen erhalten Sie bei 550 ° C für 6 h vor der Verwendung.

2. Vorbereitung der Probe

  1. Legen Sie ein mit einem Gewicht von Zinn auf den Labormaßstab und dann Tara verbrannt.
  2. Spülen Sie die Labor-Spachtel mit Lösungsmittel, dann verwenden Sie, um eine entsprechende Masse der Probe in das mit einem Gewicht von Zinn zu übertragen, und zeichnen Sie die Masse.
    1. Die Masse der Probe variiert je nach seinen Gehalt an organischer Substanz. Schlanke Material relativ organischer Substanz (marine Schlamm) erfordern mehrere Gramm, während organische Substanz Reiches Material (Blattgewebe) viel weniger erfordern.
  3. Übertragen Sie das gesamte Material in der Waage Dose in einen verbrannt Glasfaser Fingerhut.

3. Gewinnung

  1. ~ 400 mL der DCM:MeOH (9:1) Mischung in die Runde-die Talsohle Kolben übertragen (Kolben mehr als halb voll sein sollte) und legte in der Heizungstechnik Mantel. Fügen Sie mehrere (5-10) Lösungsmittel gespült kochendem Chips.
  2. Legen Sie die Probe Fingerhut, Open-End, in das Herzstück der Soxhlet-Apparat.
  3. Legen Sie das Herzstück auf der Runde Talsohle Kolben und sichern mit einer Glas-Klammer.
  4. Installieren Sie den Kondensator auf das Herzstück-die Soxhlet und sichern Sie mit einer Klammer Glaswaren.
  5. Anhängen eines kalten Wasserleitungen aus dem Kondensator an die Kaltwasserleitung in die Haube mit einer Schlauchklemme. Verlegen Sie den anderen in den Abfluss.
  6. Schalten Sie das Wasser um richtige Zirkulation und Entwässerung zu gewährleisten.
  7. Schalten Sie den Heizpilz und stellen Sie die Temperatur, bis das Lösungsmittel in die Runde-die Talsohle Kolben leicht kocht.
  8. Überwachen Sie die Extraktion ein paar Mal im Laufe der nächsten Stunde.
    1. Überprüfen Sie, ob die Temperatur ist richtig eingestellt, um ein Sieden, das Lösungsmittel wird im Kondensator kondensiert und tropft in das Herzstück, das Herzstück ist, befüllen und entleeren richtig und das Wasser ist richtig in die Haube Abfluss entleeren.
  9. Überwachen Sie die Extraktion über die nächsten 36 h.
    1. Sorgen für die Temperatur ist richtig eingestellt, um ein Sieden, das Lösungsmittel wird im Kondensator kondensiert und tropft in das Herzstück, das Mittelstück füllt und ordnungsgemäß entleeren, das Wasser ist richtig in die Haube Abfluss entleeren und das Lösungsmittel in die Runde-die Talsohle Kolben ist noch ca. halb voll.
  10. Stoppen Sie nach 36 h die Extraktion durch das Ausschalten der Heizpilz.
  11. Beschriften Sie die Flasche "TLE".

Results

Am Ende der Extraktion entsteht ein total Lipid-Extrakt (TLE) für das Beispiel. Die Runde-die Talsohle Flasche enthält die extrahierbare organische Stoffe aus der Sedimentprobe. Diese TLE nun analysiert werden kann, und seine chemischen Bestandteile identifiziert und quantifiziert.

Applications and Summary

Der Extrakt aus dem marine Schlamm enthält Verbindungen genannt Alkenone, die in Kreislaufs verwendet werden. Alkenone sind langkettige Alkyl-Ketone produziert durch bestimmte Klassen von Haptophyte Algen, die Leben in der sonnigen Oberfläche Ozean3 (Abbildung 3). Die zwei häufigsten Alkenone sind 37 Kohlenstoffatome lang und haben zwei oder drei Doppelbindungen in ihnen. Die Kalkalgen passen Sie das Verhältnis zwischen diesen beiden Alkenone in ihren Zellen abhängig von der Temperatur des Wassers, in der sie leben. Das Verhältnis der beiden Alkenone definiert die Uk'37 -Verhältnis:

Gleichung 1) Uk'37 = (C37:2) / (C37:2 + C-37:3) 4,5

6,7 und Kern-Top Sediment8 Kalibrierung Kulturwissenschaften führte zur Entwicklung des Uk'37 Index als quantitative SST Proxy. In dieser Arbeit verwenden wir:

Gleichung 2) Uk'37 = 0.034(SST) + 0,039; ±1.4 ° C von 0 bis 28 ° C [kulturbasierte7]

Alkenone sind in Sedimenten aus dem bereits in der frühen Eozän (vor 56 Millionen Jahren)9erhalten. Zu wissen, die Verteilung der Alkenone in einem Sedimentkern Zeitreise betrifft Informationen über die Entwicklung der Meeresoberflächentemperatur an dieser Stelle. Allerdings ist es notwendig, stellen Sie zunächst sicher, dass das Instrument genau und präzise misst das Verhältnis der beiden Alkenone, und genau deshalb Normen erforderlich sind.

Figure 3

Abbildung 3. Alkenone mit 2 (C37:2) und 3 (C37:3) Doppelbindungen (links) entstehen durch bestimmte Haptophyte Algen, die in der sonnendurchfluteten Oberflächenschicht der Ozeane (rechts) Leben. (Foto mit freundlicher Genehmigung von Tim I. Eglinton, Woods Hole Oceanographic Institution)

References

  1. Jensen, W. B. The Origin of the Soxhlet Extractor J Chem Ed. 84, 1913-1914, (2007).
  2. Levey, M. Chemistry and Technology in Ancient Mesopotamia, Elsevier. 33-34, (1959).
  3. Conte, M. H., Thompson, A., Eglinton, G. Primary production of lipid biomarker compounds by Emiliania huxleyi: results from an experimental mesocosm study in fjords of southern Norway, Sarsia79, 319-332 (1994).
  4. Brassell, S. C., Eglinton, G., Marlowe, I. T., Pflaumann, U., Sarnthein, M. Molecular Stratigraphy - a New Tool for Climatic Assessment, Nature320 (6058), 129-133 (1986).
  5. Herbert, T. D. Alkenone paleotemperature determinations, in Treatise in Marine Geochemistry, edited by H. Elderfield, Elsevier 391-432 (2003).
  6. Prahl, F. G., Wakeham S. G., Calibration of Unsaturation Patterns in Long-Chain Ketone Compositions for Paleotemperature Assessment, Nature330(6146), 367-369 (1987).
  7. Prahl, F. G., Muehlhausen, L. A., Zahnle, D. L. Further evaluation of long-chain alkenones as indicators of paleoceanographic conditions, Geochimica et Cosmochimica Acta52(9), 2303-2310 (1988).
  8. Müller, P. J. et al. Calibration of the alkenone paleotemperature index U37K′ based on core-tops from the eastern South Atlantic and the global ocean (60°N-60°S), Geochimica et Cosmochimica Acta62(10), 1757-1772 (1998).
  9. Marlowe, I. T. et al. Long-chain Alkenones and Alkyl Alkenoates and the Fossil Coccolith Record of Marine-sediments, Chem Geol88(3-4), 349-375 (1990).
<>

1. Setup und Vorbereitung der Materialien

  1. Sammeln Sie eine Probe des gefrorenen, gefriergetrocknete, zerkleinert und homogenisiert Meeresablagerungen. Eine Probe davon enthält viele der Verbindungen für Standards erforderlich.
    1. Normen bestehen oft aus Sedimenten, die nach einem coring Expedition oder Analyse übrig sind. Zum Beispiel wird in diesem Experiment, Sediment, das aus dem "Schlamm-Pflaster" liegt südlich von Cape Cod abgerufen wurde extrahiert. Dieses Sediment wurde als Teil einer coring Expedition genommen aber wird nicht verwendet werden, um wissenschaftliche Fragen zu beantworten. Wir können es daher, um einen Standard zu machen.
    2. Legen Sie ein ~ 100 g Stück des Sediments in der Tiefkühltruhe über Nacht, so dass es durch friert.
    3. Sobald das Sediment vollständig gefroren ist, schalten Sie das Einfrieren Trockner (erhältlich von vielen wissenschaftlichen Geräten Einzelhändler wie Fisher) und warten Sie, bis der Kondensator Sollwert erreicht (oft ~-30 ° C).
    4. Laden Sie die Sedimentprobe in den Gefriertrockner und schließen Sie die Säuberung zu beginnen, zieht ein Vakuum auf die Probe.
    5. Je nach der Menge des Wassers im Sediment, und die Größe der Stichprobe dauert es mehrere Tage Probe zu trocknen.
    6. Sobald die Probe trocken ist, schalten Sie den Trockner, Einfrieren-Vent es, und entfernen Sie die Probe.
    7. Legen Sie die Probe in einem Lösungsmittel gespült Mörser mahlen zu einem Pulver mit einem Stößel. Tun Sie dies auf die gesamte Stichprobe und Shop in einem Glas in der Tiefkühltruhe bis bereit zu extrahieren.
  2. Abhängig von der Größe der Probe mit einem Volumen von 4-60 mL Fläschchen verwendet werden. Verwenden Sie für dieses Experiment Borosilikat Glasvials (40 mL) und Lösungsmittel sicher Kappen. Verbrennen die Vials, Borosilikatglas Pipetten und mit einem Gewicht von Dosen bei 550 ° C 6 h vor dem Entfernen der möglichen organischen Verunreinigungen zu gewährleisten.
  3. Zu erhalten, Dichlormethan und Methanol (beide sind gemeinsam in den meisten organischen Geochemie Laboratorien), dann benutzen sie individuell Lab Tools und Glaswaren vor Gebrauch abspülen. Eine Mischung von Dichlormethan (DCM) in Methanol (MeOH; 9:1) ist in vielen Labors verwendet, um effizient Biomarker mit einer breiten Palette von Polaritäten zu extrahieren. Lösungsmittel sollte frei von organischen Verunreinigungen sein.
  4. Erwerben einer Soxhlet-Apparatur zu verwenden in diesem Experiment (diese können von Fisher Scientific oder Wissenschaft Einzelhändler gekauft werden), dann waschen und verbrennen es bei 550 ° C für 6 h vor der Verwendung.
  5. Glas-Faser-Fingerhüte (kann von Whatman erworben werden) und verbrennen erhalten Sie bei 550 ° C für 6 h vor der Verwendung.

2. Vorbereitung der Probe

  1. Legen Sie ein mit einem Gewicht von Zinn auf den Labormaßstab und dann Tara verbrannt.
  2. Spülen Sie die Labor-Spachtel mit Lösungsmittel, dann verwenden Sie, um eine entsprechende Masse der Probe in das mit einem Gewicht von Zinn zu übertragen, und zeichnen Sie die Masse.
    1. Die Masse der Probe variiert je nach seinen Gehalt an organischer Substanz. Schlanke Material relativ organischer Substanz (marine Schlamm) erfordern mehrere Gramm, während organische Substanz Reiches Material (Blattgewebe) viel weniger erfordern.
  3. Übertragen Sie das gesamte Material in der Waage Dose in einen verbrannt Glasfaser Fingerhut.

3. Gewinnung

  1. ~ 400 mL der DCM:MeOH (9:1) Mischung in die Runde-die Talsohle Kolben übertragen (Kolben mehr als halb voll sein sollte) und legte in der Heizungstechnik Mantel. Fügen Sie mehrere (5-10) Lösungsmittel gespült kochendem Chips.
  2. Legen Sie die Probe Fingerhut, Open-End, in das Herzstück der Soxhlet-Apparat.
  3. Legen Sie das Herzstück auf der Runde Talsohle Kolben und sichern mit einer Glas-Klammer.
  4. Installieren Sie den Kondensator auf das Herzstück-die Soxhlet und sichern Sie mit einer Klammer Glaswaren.
  5. Anhängen eines kalten Wasserleitungen aus dem Kondensator an die Kaltwasserleitung in die Haube mit einer Schlauchklemme. Verlegen Sie den anderen in den Abfluss.
  6. Schalten Sie das Wasser um richtige Zirkulation und Entwässerung zu gewährleisten.
  7. Schalten Sie den Heizpilz und stellen Sie die Temperatur, bis das Lösungsmittel in die Runde-die Talsohle Kolben leicht kocht.
  8. Überwachen Sie die Extraktion ein paar Mal im Laufe der nächsten Stunde.
    1. Überprüfen Sie, ob die Temperatur ist richtig eingestellt, um ein Sieden, das Lösungsmittel wird im Kondensator kondensiert und tropft in das Herzstück, das Herzstück ist, befüllen und entleeren richtig und das Wasser ist richtig in die Haube Abfluss entleeren.
  9. Überwachen Sie die Extraktion über die nächsten 36 h.
    1. Sorgen für die Temperatur ist richtig eingestellt, um ein Sieden, das Lösungsmittel wird im Kondensator kondensiert und tropft in das Herzstück, das Mittelstück füllt und ordnungsgemäß entleeren, das Wasser ist richtig in die Haube Abfluss entleeren und das Lösungsmittel in die Runde-die Talsohle Kolben ist noch ca. halb voll.
  10. Stoppen Sie nach 36 h die Extraktion durch das Ausschalten der Heizpilz.
  11. Beschriften Sie die Flasche "TLE".

A subscription to JoVE is required to view this article.
You will only be able to see the first 20 seconds.

RECOMMEND JoVE