Compuesto de administración IV

Lab Animal Research

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Overview

< clase p = 'jove_content' > fuente: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universidad de Notre Dame, en

hay muchas rutas utilizadas para la administración del compuesto en las ratas y ratones de laboratorio. Protocolos pueden, sin embargo, requieren el uso de las rutas menos comunes: intracardiaca, bandolero y las inyecciones de retro-orbital. Formación especializada es esencial para estos procedimientos a realizarse con éxito. Justificación para estas rutas puede necesitar obtener la aprobación institucional cuidado Animal y el Comité uso (IACUC).

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Fundamentos de la investigación de animales de laboratorio. Compuesto de administración IV. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

Administración intracardiaca se ha utilizado en una variedad de aplicaciones, incluyendo el desarrollo de un modelo animal de metástasis del cáncer de hueso, así como un examen de los efectos de entrega intracardiaca directa sobre el resultado de infarto del miocardio. Este procedimiento se realiza mediante el uso de un ultrasonido para guiar la aguja en el lugar correcto en el corazón. 2 sin embargo, cuando realizado correctamente utilizando las señales adecuadas, este procedimiento puede realizarse sin el uso de la visualización ecográfica.

debido a la naturaleza invasiva del procedimiento, el uso de la inyección intracardiaca debe justificarse científicamente en un protocolo IACUC. Inyección de solo supervivencia debería estar permitida. Este procedimiento requiere el uso de un anestésico general, inhalante o inyectable, según los lineamientos establecidos dentro de una organización. Selección de las agujas debe ser el tamaño más pequeño posible que permita la viscosidad del material inyectado; generalmente, se utiliza una aguja de calibre 27-30. Volúmenes de inyección de la gama de 100 μl a un máximo de 300 μl.

inyecciones intravenosas en la cola de los ratones son difíciles y a menudo fracasada. Una ruta alternativa de la administración intravenosa es a través del plexo retro orbital. Mientras que esta técnica requiere entrenamiento y habilidad para realizar, estudios han demostrado que existe una mayor tasa de éxito con la inyección de retro-orbital que con inyección en la vena lateral de la cola. 3, 4, 5 La anestesia es necesaria para evitar que el ratón se mueva durante el procedimiento. Anestesia general inhalante entregados ya sea a través de una campana o una cámara de inducción conectada a un vaporizador de precisión es eficaz. Sin embargo, si va a usar inhalantes, ten en cuenta que el animal comenzará a recuperarse rápidamente una vez que se retira de la cámara, así que uno debe estar listo para realizar la inyección. Cuando múltiples inyecciones deben realizarse, se recomienda un anestésico oftálmico tópico (tetracaína o proparacaine).

la estructura venosa orbital de rata y el ratón son diferentes. El ratón tiene un seno o la convergencia de varios barcos, incluyendo la vena supraorbitaria, vena nasal dorsal, la vena palpebral inferior y las venas temporales superficiales que llenan el espacio en la órbita del ojo. En el área orbital de la rata, hay una red o plexo de vasos. Como con todas las inyecciones, la aguja seleccionada debe ser el tamaño más pequeño posible; generalmente un 27-30 medidor de aguja. Aunque ha habido informes de mayores volúmenes, el volumen máximo es 150 μL por ojo. 3, 4, 5 Se recomienda una inyección por ojo al día, con un total de dos inyecciones por ojo para los procedimientos de supervivencia. También, debe haber al menos un intervalo de un día entre las inyecciones. Para un procedimiento de la evaluadora, se pueden administrar volúmenes de hasta 500 μl.

a pesar de la controversia, sigue siendo necesario para algunos estudios el uso de la almohadilla de pie como un sitio de la inyección. Se ha demostrado que cuando se inyecta a través de la almohadilla del pie, la respuesta de anticuerpos en algunas cepas de ratón era significativamente más fuerte que cuando se inyecta en el corvejón. 6 Todos los animales deben ser vigilados de cerca para detectar signos de dolor, nivel de consumo de alimentos y para la deambulación normal. Uno mismo-mutilación del pie puede ocurrir en la medida del pie destruido. Esto es un signo de dolor crónico. Cualquier animal que demuestra uno mismo-mutilación debe llamar inmediatamente a la atención del personal veterinario.

mediciones de bandolero deben hacerse diariamente, tan pronto como se ha producido inflamación evidente. Extremos deben estar colocados según las pautas IACUC. Generalmente, el animal debe ser sacrificado cuando la lesión o el tumor interfiere con el animal ' capacidad para andar o alcanzar comida y agua. El volumen máximo que se puede inyectar en un bandolero es 50 μl. La inyección se recomienda una aguja de calibre 29-30.

Procedure

1. inyección intracardiaca

  1. hitos y posicionamiento: posicionar el ratón o rata en recumbency lateral derecho (con el lado izquierdo hacia arriba) o en recumbency dorsal e identificar los hitos.
    1. Posición aproximadamente nivel con el punto del codo y justo a la izquierda del esternón el corazón.
    2. Insertar la aguja entre las costillas en el punto del codo.
    3. En un animal de recumbency dorsal, inserte la aguja en el pecho paralelo a la mesa.
    4. En un animal de recumbency lateral, inserte la aguja en el tórax perpendicular a la mesa.
  2. Inyección del artículo
    1. asegurar que hay un mínimo movimiento de la aguja una vez que se inserta en el corazón para evitar que el músculo está roto y lo que causa hemorragia en el saco pericárdico, como esto compromete la función cardiaca.
    2. Aspirar la jeringa para determinar la ubicación apropiada. A menudo hay un flash de la sangre en el centro de la jeringa de.
    3. Sostenga la jeringa para que la mano no es reposicionarse en la jeringa para la inyección una vez que la aguja se ha posicionado en el corazón.
    4. Inyectar el artículo de manera lenta y constante.
    5. Retire la aguja lentamente para minimizar el sangrado.
    6. Ratones que sufren dificultad respiratoria, convulsiones, cianosis, ataxia prolongada u otras secuelas relacionadas con el trauma de la inyección deben ser evaluados por el personal veterinario y sacrificados según las recomendaciones de su.

Figure 1
figura 1. Inyección intracardiaca en ratones.

2. inyección intravenosa utilizando el plexo retro-orbital

  1. sitios de inyección y posicionamiento
    1. colocar el animal sobre una superficie plana en lateral recumbency.
    2. Insertar la aguja en el ángulo medial del ojo con un ángulo de 45° para la nariz.
    3. La profundidad de la aguja debe ser suficiente para penetrar los tejidos conjuntivales y avanzar detrás de la órbita ocular y en el plexo ocular. Al colocar la aguja, no debería encontrar el hueso en la parte posterior de la órbita de.
    4. Colocar el dedo índice en la parte superior de la cabeza con el pulgar en la mandíbula.
    5. Tire hacia atrás y hacia abajo para tensar la piel y sobresalen el globo del ojo.
    6. Tenga cuidado de no aplicar presión sobre la tráquea y restringir el flujo de aire.
  2. Inyección
    1. Coloque la aguja detrás del ojo y no intra uso.
    2. Asegúrese de que la aguja tiene un mínimo movimiento una vez insertado en el plexo retro orbital, o los vasos rompen causando sangrado y la pérdida del agente en los tejidos detrás del ojo. Sostenga la jeringa para que la mano no es reposicionada en la jeringa para la inyección una vez que la aguja se ha posicionado en el plexo retro-orbitales.
    3. No aspirar con la jeringa, como se derrumbará los vasos.
    4. Inyectar el artículo de manera lenta y constante.
    5. Retire la aguja y aplicar presión ligera en los ojos para controlar el sangrado y para proporcionar hemostasia.
    6. Ratones que experimentara inflamación, conjuntivitis, otras secuelas relacionadas con el trauma de la inyección deben ser evaluado por el personal veterinario y tratados o eutanasia según su recomendación

Figure 2
figura 2. Retra inyección orbital en los ratones.

3. inyección de bandolero

  1. moderación, coloque el animal en un tubo de seguridad con un pie trasero aislado y extender sujetando la piel por encima de la rodilla.
  2. Limpiar los pies con agua o con alcohol para eliminar los desechos antes de inyectar.
  3. Inyectar por vía subcutánea en el centro de la Cierva del pie formando una pequeña ampolla en el sitio de inyección. Para evitar el vaso sanguíneo que corre a lo largo del pie, inyectar justo al lado de la línea media paralela a la nave.

Figure 3
figura 3. Inyección de bandolero en ratones y ratas.

Intracardiac, retro orbital y el bandolero son algunos de los métodos de inyección especializada que investigadores biomédicos utilizan para experimentos que requiere entrega de compuestos a través de estas rutas anormales.

Una inyección intracardiaca proporciona el compuesto en el ventrículo izquierdo permitiendo que la sustancia entrar directamente en la circulación arterial. La ruta orbital retra es una alternativa a la inyección en la vena de la cola y se utiliza para entregar el compuesto en la circulación venosa. Y consiste en una inyección de almohadilla subcutánea del artículo en el animal ' s patas traseras. Este video muestran las consideraciones, procedimientos y aplicaciones de estas técnicas de inyección especiales.

que ' s comenzar con algunos antecedentes y cosas que uno debe considerar antes de iniciar estos procedimientos administración.

Administración intracardiaca se realiza mediante el uso de un ultrasonido para guiar la aguja en el lugar correcto en el corazón. Sin embargo, si se realiza correctamente, utilizando los lugares adecuados, la administración puede realizarse sin el uso de la ecografía. Nota que el procedimiento requiere el uso de anestesia general y sólo una inyección por animal está permitido para procedimientos de supervivencia. Generalmente se utiliza una aguja de calibre 27-30 para esta inyección y volumen máximo de administración es 100 a 300 microlitros para ratones y ratas, respectivamente.

Para inyección intravenosa vía retro orbital, uno debe tener una justa comprensión de la estructura venosa orbital. Un ratón tiene un seno donde varias venas-a saber, la supraorbitaria, dorsal nasal, inferior palpebral y superficial temporal-convergen. Mientras que en las ratas, hay una red o plexo de varias venas. La inyección se realiza directamente en el seno o en el plexo. Como intracardiaco, que este procedimiento también requiere el uso de anestesia general y sólo una inyección por ojo al día se recomienda un total de dos inyecciones por ojo para los procedimientos de supervivencia. Como con todas las inyecciones, la aguja de tamaño más pequeño debe ser seleccionado-generalmente calibre 27-30- y el volumen máximo recomendado es de 150 μL por ojo.

a pesar de la controversia, el uso de la inyección de bandolero es todavía requerida para algunos estudios, generalmente relacionadas con inflamación y tumor crecimiento. Tenga en cuenta que las inyecciones sólo podrá realizarse en un solo pie, nunca bi-lateralmente. Y las mediciones de bandolero deben hacerse diariamente, tan pronto como se ha producido inflamación evidente. Una aguja de calibre 29-30 se recomienda para la inyección y el volumen máximo recomendado es de 50 μL. Después de cualquier inyección, todos los animales deben ser vigilados estrechamente para detectar signos de dolor, nivel de consumo de alimentos y para la deambulación normal. Generalmente el animal debe ser sacrificado cuando la lesión o el tumor interfiere con el animal ' capacidad para andar o llegar a la comida y el agua.

pues ' s aprender los procedimientos de inyección, a partir de la inyección intracardiaca. Le mostraremos el procedimiento en un ratón, pero los puntos de referencia y el protocolo para una rata son similares.

El primer paso es preparar la jeringa. Recordar un 29 medidor de aguja y jeringa de 1 cc es apropiado para los ratones. Y el volumen máximo de inyección intracardiaca 100 microlitros. Elaboración de la solución, dejar una pequeña cantidad de aire entre el émbolo y el material de inyección. Esto es para permitir sangre entrar en la jeringa, se coloca en el corazón.

Para empezar, anestesiar el animal utilizando anestésicos inhalantes o inyectables. Revisión de las consideraciones para el mantenimiento de anestesia general en otro video de esta colección. A continuación, posición del animal recumbency dorsal en una plataforma aislada. Luego, los miembros anteriores a la plataforma de la cinta y coloque un trozo de cinta horizontalmente en el abdomen por encima de las caderas. Esto es aún más constante del animal y evitar cualquier movimiento una vez que se ha insertado la aguja. A continuación, usando un hisopo mojado el animal ' pecho s con alcohol al 70%.

Para identificar el sitio de la inyección, primero Localice el xifoides y el esternón manubrio. A continuación, encontrar el punto medio entre las dos señales. 1-2 mm izquierda de este punto, es la señal de inserción de la aguja. Utilizando un aplicador con punta de algodón, aplicar povidona yodada para marcar el sitio de inserción de la aguja.

Inyectar, dirigir la aguja perpendicular a la tabla y insertar a la profundidad de unos 2 mm. Luego, aplicar una muy pequeña contrapresión al émbolo. Un brillante rojo sangre oxigenada deberá entrar en el centro de la jeringa, que confirma la colocación correcta. Sostenga la jeringa en el mismo lugar e inyectar el material lentamente y constantemente en el transcurso de 30 a 60 segundos. Inyección rápida puede causar aglutinación de las células y la obstrucción de las arterias, un choque al sistema debido a la temperatura de la sustancia siendo significativamente menor que la temperatura del cuerpo, o una expansión del ventrículo y la interrupción del ritmo cardíaco.

Una vez el material haya desaparecido la jeringa, lentamente y con cuidado retire la aguja sin ningún movimiento lateral ya puede dañar los músculos del corazón. Luego suelte la cinta de la patas delanteras y el abdomen y colocar el animal en posición prona en una jaula limpia con ropa de cama lo suficientemente profunda para actuar como una capa aislante. Nota que la mitad de esta jaula de recuperación está en el animal anestesiado y una fuente de calor está situado en el lado caliente de la jaula. Esto evita la hipotermia, y mientras el animal se recupera de la anestesia será capaz de moverse del lado caliente como se desee.

a continuación, deje que ' s aprender el método de la inyección intravenosa utilizando el plexo retro orbital en ratas. Una vez más, demostramos el procedimiento en un ratón, pero los hitos y el protocolo para las ratas son similares.

Conecte la aguja adecuada en la jeringa seleccionada y llenar en el material de inyección. Recuerde que generalmente se utilizaría una aguja de calibre 27-30 con el posible más pequeño de la jeringa y un volumen máximo de 150 microlitros.

Para iniciar el procedimiento, primero anestesiar al animal. Luego, colóquela sobre una superficie plana en posición lateral recumbency. Ahora coloque el dedo índice en la parte superior de la cabeza y el pulgar en la mandíbula y suavemente tire hacia atrás y abajo. Esto es para tensar la piel y sobresalen del globo ocular. Tenga cuidado de no aplicar presión sobre la tráquea y restringir el flujo de aire. Si múltiples inyecciones, aplicar anestésico oftálmico tópico, como la tetracaína o proparacaine.

Insertar la aguja en el ángulo medial del ojo con un ángulo de 45° para la nariz. La profundidad debe ser suficiente para penetrar los tejidos conjuntivales y avanzar en la órbita ocular y en el seno. No debería encontrar el hueso en la parte posterior de la órbita. Para evitar la ruptura de los vasos sanguíneos, asegúrese de que la aguja tiene un mínimo movimiento una vez insertado. No aspirar, ya colapsan los vasos. Inyectar el artículo de manera lenta y constante. Luego, retire suavemente la aguja y aplicar presión ligera en los ojos para controlar el sangrado y para proporcionar hemostasia.

por último, dejó ' método de inyección de bandolero s revisión en ratones y ratas. Para comenzar, coloque la aguja apropiada y llenar la jeringa con el volumen correcto. Este procedimiento puede hacerse en animales conscientes.

Poner el animal en un tubo de seguridad con un pie trasero aislado y extendido sujetando la piel por encima de la rodilla. Limpiar los pies con agua o con alcohol para eliminar los desechos antes de inyectar. Para evitar el vaso sanguíneo que corre a lo largo del pie, la señal de inyección es en el centro, pero justo fuera de la línea media, más cerca a los dedos del pie.

Colocar el bisel de la aguja hacia arriba en el sitio de inyección, dirigiéndolo hacia el talón. Inyectar el artículo lenta y constantemente para evitar la rápida distensión de los tejidos del pie. Esto hará que el bandolero a hincharse a medida que el material de inyección llena ese espacio subcutáneo. En un pequeño animal ' pie s la inflamación de la inyección puede extender al talón, mientras que en un animal mayor será ser más localizada.

Después de la inyección, observar los animales diariamente y si hay inflamación persistente o si hay lesiones o tumores como resultado el protocolo experimental, entonces, utilizando una pinza, realizar la medición de bandolero. Este instrumento mide el espesor del pie en milímetros y ayuda en la cuantificación de la inflamación.

ahora ' s discutir algunos experimentos de ejemplo utilizando inyecciones intracardiacas, retras orbital y bandolero.

Administración de

una de las muchas aplicaciones de intracardiaca es desarrollo de un modelo animal de metástasis del cáncer. Aquí, los investigadores utilizaron esta ruta para inyectar las células tumorales que tienen propensión a la colonización de hueso. En los días siguientes, estudió el crecimiento del tumor en los huesos mediante rayos x y fluorescencia, técnicas de imagen. En otro estudio, se utilizó la ruta orbital retra para inyectar los anticuerpos específicos que etiqueta de neutrófilos. Luego, con ayuda de la proyección de imagen intravital, los científicos fueron capaces de rastrear el patrón de migración de las células etiquetados.

Por último, los investigadores utilizan inyección de bandolero para analizar la respuesta inflamatoria. En este experimento, los investigadores aislaron células mononucleares de sangre periférica de muestras de sangre humana, mezclado con diferentes antígenos e inyectar las soluciones en el animal ' bandolero de s. Finalmente, se realizaban mediciones de pie para cuantificar la respuesta de inflamación debido a diversos antígenos.

te ' ve a Miró JoVE ' entrega final de s en las técnicas de administración compuestos habituales y especializados.

Sólo

en Resumen, en la primera parte repasamos la ruta parenteral más común. En el segundo capítulo, hablamos de los procedimientos de enterales y tópicos. La tercera entrega con el primer conjunto de procedimientos anormales como intranasal, intradérmica y intracranial en los recién nacidos. Por último, aquí discutimos tres rutas adicionales que investigadores biomédicos en los laboratorios para fines específicos.

Después de ver esta serie tienes una mucho mejor comprensión de las técnicas de administración diferente y también debe saber las consideraciones generales y específicas relacionadas con estos protocolos de administración compuesto como siempre, gracias por Ver!

Summary

la administración de compuestos en animales puede tener un efecto significativo tanto el bienestar de los animales y el resultado de los datos experimentales y valor científico. El método apropiado de suministro es esencial para el éxito del experimento. Muchos factores deben ser considerados para determinar la mejor ruta, incluyendo el objetivo científico del estudio, el pH de la sustancia, el volumen de la dosificación requerida, la viscosidad de la sustancia y el bienestar de los animales. Conocimientos técnicos también es un requisito para todos los métodos de inyección.

References

  1. Morton, D.A., Jennings, M., Buckwell, A., Ewbank, R., Godfrey, C., Holgate, B., Inglis, I., James, R., Page, C., Sharman, I., Verschoyle, R., Westall, L., and Wilson, A.B. 2001. Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Members of the Joint Working Group on Refinement. Laboratory Animals. 35. 1-41
  2. Prendiville , T.W., Qing, M., Lin, Z., Zhou, P., He, A., and Pu, W.T. 2014. Ultrasound-guided Transthoracic Intramyocardial Injection in Mice. Journal of Visualized Experiments. 90 | e51566.
  3. Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H.D., Huizing, M., and Hoogstraten-Miller, S. 2001. Retro-orbital injection in mice. Lab Animal. 40:5. 155-171.
  4. Steel, C., Stephens, A., Hahto, S., Singletary, S., Ciavarra, R. 2008. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital sinus as routes of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Anim. 37. 26-31.
  5. Timm, K.I. 1989. Orbital venous anatomy of the Mongolian gerbil, with comparison to the mouse, hamster, and rat. Laboratory Animal Science. 39:3. 262-265.
  6. Kamala, T. 2007. Hock immunization: a humane alternative to mouse footpad injections. Journal of Immunological Methods. 328. 204-214.

1. inyección intracardiaca

  1. hitos y posicionamiento: posicionar el ratón o rata en recumbency lateral derecho (con el lado izquierdo hacia arriba) o en recumbency dorsal e identificar los hitos.
    1. Posición aproximadamente nivel con el punto del codo y justo a la izquierda del esternón el corazón.
    2. Insertar la aguja entre las costillas en el punto del codo.
    3. En un animal de recumbency dorsal, inserte la aguja en el pecho paralelo a la mesa.
    4. En un animal de recumbency lateral, inserte la aguja en el tórax perpendicular a la mesa.
  2. Inyección del artículo
    1. asegurar que hay un mínimo movimiento de la aguja una vez que se inserta en el corazón para evitar que el músculo está roto y lo que causa hemorragia en el saco pericárdico, como esto compromete la función cardiaca.
    2. Aspirar la jeringa para determinar la ubicación apropiada. A menudo hay un flash de la sangre en el centro de la jeringa de.
    3. Sostenga la jeringa para que la mano no es reposicionarse en la jeringa para la inyección una vez que la aguja se ha posicionado en el corazón.
    4. Inyectar el artículo de manera lenta y constante.
    5. Retire la aguja lentamente para minimizar el sangrado.
    6. Ratones que sufren dificultad respiratoria, convulsiones, cianosis, ataxia prolongada u otras secuelas relacionadas con el trauma de la inyección deben ser evaluados por el personal veterinario y sacrificados según las recomendaciones de su.

Figure 1
figura 1. Inyección intracardiaca en ratones.

2. inyección intravenosa utilizando el plexo retro-orbital

  1. sitios de inyección y posicionamiento
    1. colocar el animal sobre una superficie plana en lateral recumbency.
    2. Insertar la aguja en el ángulo medial del ojo con un ángulo de 45° para la nariz.
    3. La profundidad de la aguja debe ser suficiente para penetrar los tejidos conjuntivales y avanzar detrás de la órbita ocular y en el plexo ocular. Al colocar la aguja, no debería encontrar el hueso en la parte posterior de la órbita de.
    4. Colocar el dedo índice en la parte superior de la cabeza con el pulgar en la mandíbula.
    5. Tire hacia atrás y hacia abajo para tensar la piel y sobresalen el globo del ojo.
    6. Tenga cuidado de no aplicar presión sobre la tráquea y restringir el flujo de aire.
  2. Inyección
    1. Coloque la aguja detrás del ojo y no intra uso.
    2. Asegúrese de que la aguja tiene un mínimo movimiento una vez insertado en el plexo retro orbital, o los vasos rompen causando sangrado y la pérdida del agente en los tejidos detrás del ojo. Sostenga la jeringa para que la mano no es reposicionada en la jeringa para la inyección una vez que la aguja se ha posicionado en el plexo retro-orbitales.
    3. No aspirar con la jeringa, como se derrumbará los vasos.
    4. Inyectar el artículo de manera lenta y constante.
    5. Retire la aguja y aplicar presión ligera en los ojos para controlar el sangrado y para proporcionar hemostasia.
    6. Ratones que experimentara inflamación, conjuntivitis, otras secuelas relacionadas con el trauma de la inyección deben ser evaluado por el personal veterinario y tratados o eutanasia según su recomendación

Figure 2
figura 2. Retra inyección orbital en los ratones.

3. inyección de bandolero

  1. moderación, coloque el animal en un tubo de seguridad con un pie trasero aislado y extender sujetando la piel por encima de la rodilla.
  2. Limpiar los pies con agua o con alcohol para eliminar los desechos antes de inyectar.
  3. Inyectar por vía subcutánea en el centro de la Cierva del pie formando una pequeña ampolla en el sitio de inyección. Para evitar el vaso sanguíneo que corre a lo largo del pie, inyectar justo al lado de la línea media paralela a la nave.

Figure 3
figura 3. Inyección de bandolero en ratones y ratas.

Intracardiac, retro orbital y el bandolero son algunos de los métodos de inyección especializada que investigadores biomédicos utilizan para experimentos que requiere entrega de compuestos a través de estas rutas anormales.

Una inyección intracardiaca proporciona el compuesto en el ventrículo izquierdo permitiendo que la sustancia entrar directamente en la circulación arterial. La ruta orbital retra es una alternativa a la inyección en la vena de la cola y se utiliza para entregar el compuesto en la circulación venosa. Y consiste en una inyección de almohadilla subcutánea del artículo en el animal ' s patas traseras. Este video muestran las consideraciones, procedimientos y aplicaciones de estas técnicas de inyección especiales.

que ' s comenzar con algunos antecedentes y cosas que uno debe considerar antes de iniciar estos procedimientos administración.

Administración intracardiaca se realiza mediante el uso de un ultrasonido para guiar la aguja en el lugar correcto en el corazón. Sin embargo, si se realiza correctamente, utilizando los lugares adecuados, la administración puede realizarse sin el uso de la ecografía. Nota que el procedimiento requiere el uso de anestesia general y sólo una inyección por animal está permitido para procedimientos de supervivencia. Generalmente se utiliza una aguja de calibre 27-30 para esta inyección y volumen máximo de administración es 100 a 300 microlitros para ratones y ratas, respectivamente.

Para inyección intravenosa vía retro orbital, uno debe tener una justa comprensión de la estructura venosa orbital. Un ratón tiene un seno donde varias venas-a saber, la supraorbitaria, dorsal nasal, inferior palpebral y superficial temporal-convergen. Mientras que en las ratas, hay una red o plexo de varias venas. La inyección se realiza directamente en el seno o en el plexo. Como intracardiaco, que este procedimiento también requiere el uso de anestesia general y sólo una inyección por ojo al día se recomienda un total de dos inyecciones por ojo para los procedimientos de supervivencia. Como con todas las inyecciones, la aguja de tamaño más pequeño debe ser seleccionado-generalmente calibre 27-30- y el volumen máximo recomendado es de 150 μL por ojo.

a pesar de la controversia, el uso de la inyección de bandolero es todavía requerida para algunos estudios, generalmente relacionadas con inflamación y tumor crecimiento. Tenga en cuenta que las inyecciones sólo podrá realizarse en un solo pie, nunca bi-lateralmente. Y las mediciones de bandolero deben hacerse diariamente, tan pronto como se ha producido inflamación evidente. Una aguja de calibre 29-30 se recomienda para la inyección y el volumen máximo recomendado es de 50 μL. Después de cualquier inyección, todos los animales deben ser vigilados estrechamente para detectar signos de dolor, nivel de consumo de alimentos y para la deambulación normal. Generalmente el animal debe ser sacrificado cuando la lesión o el tumor interfiere con el animal ' capacidad para andar o llegar a la comida y el agua.

pues ' s aprender los procedimientos de inyección, a partir de la inyección intracardiaca. Le mostraremos el procedimiento en un ratón, pero los puntos de referencia y el protocolo para una rata son similares.

El primer paso es preparar la jeringa. Recordar un 29 medidor de aguja y jeringa de 1 cc es apropiado para los ratones. Y el volumen máximo de inyección intracardiaca 100 microlitros. Elaboración de la solución, dejar una pequeña cantidad de aire entre el émbolo y el material de inyección. Esto es para permitir sangre entrar en la jeringa, se coloca en el corazón.

Para empezar, anestesiar el animal utilizando anestésicos inhalantes o inyectables. Revisión de las consideraciones para el mantenimiento de anestesia general en otro video de esta colección. A continuación, posición del animal recumbency dorsal en una plataforma aislada. Luego, los miembros anteriores a la plataforma de la cinta y coloque un trozo de cinta horizontalmente en el abdomen por encima de las caderas. Esto es aún más constante del animal y evitar cualquier movimiento una vez que se ha insertado la aguja. A continuación, usando un hisopo mojado el animal ' pecho s con alcohol al 70%.

Para identificar el sitio de la inyección, primero Localice el xifoides y el esternón manubrio. A continuación, encontrar el punto medio entre las dos señales. 1-2 mm izquierda de este punto, es la señal de inserción de la aguja. Utilizando un aplicador con punta de algodón, aplicar povidona yodada para marcar el sitio de inserción de la aguja.

Inyectar, dirigir la aguja perpendicular a la tabla y insertar a la profundidad de unos 2 mm. Luego, aplicar una muy pequeña contrapresión al émbolo. Un brillante rojo sangre oxigenada deberá entrar en el centro de la jeringa, que confirma la colocación correcta. Sostenga la jeringa en el mismo lugar e inyectar el material lentamente y constantemente en el transcurso de 30 a 60 segundos. Inyección rápida puede causar aglutinación de las células y la obstrucción de las arterias, un choque al sistema debido a la temperatura de la sustancia siendo significativamente menor que la temperatura del cuerpo, o una expansión del ventrículo y la interrupción del ritmo cardíaco.

Una vez el material haya desaparecido la jeringa, lentamente y con cuidado retire la aguja sin ningún movimiento lateral ya puede dañar los músculos del corazón. Luego suelte la cinta de la patas delanteras y el abdomen y colocar el animal en posición prona en una jaula limpia con ropa de cama lo suficientemente profunda para actuar como una capa aislante. Nota que la mitad de esta jaula de recuperación está en el animal anestesiado y una fuente de calor está situado en el lado caliente de la jaula. Esto evita la hipotermia, y mientras el animal se recupera de la anestesia será capaz de moverse del lado caliente como se desee.

a continuación, deje que ' s aprender el método de la inyección intravenosa utilizando el plexo retro orbital en ratas. Una vez más, demostramos el procedimiento en un ratón, pero los hitos y el protocolo para las ratas son similares.

Conecte la aguja adecuada en la jeringa seleccionada y llenar en el material de inyección. Recuerde que generalmente se utilizaría una aguja de calibre 27-30 con el posible más pequeño de la jeringa y un volumen máximo de 150 microlitros.

Para iniciar el procedimiento, primero anestesiar al animal. Luego, colóquela sobre una superficie plana en posición lateral recumbency. Ahora coloque el dedo índice en la parte superior de la cabeza y el pulgar en la mandíbula y suavemente tire hacia atrás y abajo. Esto es para tensar la piel y sobresalen del globo ocular. Tenga cuidado de no aplicar presión sobre la tráquea y restringir el flujo de aire. Si múltiples inyecciones, aplicar anestésico oftálmico tópico, como la tetracaína o proparacaine.

Insertar la aguja en el ángulo medial del ojo con un ángulo de 45° para la nariz. La profundidad debe ser suficiente para penetrar los tejidos conjuntivales y avanzar en la órbita ocular y en el seno. No debería encontrar el hueso en la parte posterior de la órbita. Para evitar la ruptura de los vasos sanguíneos, asegúrese de que la aguja tiene un mínimo movimiento una vez insertado. No aspirar, ya colapsan los vasos. Inyectar el artículo de manera lenta y constante. Luego, retire suavemente la aguja y aplicar presión ligera en los ojos para controlar el sangrado y para proporcionar hemostasia.

por último, dejó ' método de inyección de bandolero s revisión en ratones y ratas. Para comenzar, coloque la aguja apropiada y llenar la jeringa con el volumen correcto. Este procedimiento puede hacerse en animales conscientes.

Poner el animal en un tubo de seguridad con un pie trasero aislado y extendido sujetando la piel por encima de la rodilla. Limpiar los pies con agua o con alcohol para eliminar los desechos antes de inyectar. Para evitar el vaso sanguíneo que corre a lo largo del pie, la señal de inyección es en el centro, pero justo fuera de la línea media, más cerca a los dedos del pie.

Colocar el bisel de la aguja hacia arriba en el sitio de inyección, dirigiéndolo hacia el talón. Inyectar el artículo lenta y constantemente para evitar la rápida distensión de los tejidos del pie. Esto hará que el bandolero a hincharse a medida que el material de inyección llena ese espacio subcutáneo. En un pequeño animal ' pie s la inflamación de la inyección puede extender al talón, mientras que en un animal mayor será ser más localizada.

Después de la inyección, observar los animales diariamente y si hay inflamación persistente o si hay lesiones o tumores como resultado el protocolo experimental, entonces, utilizando una pinza, realizar la medición de bandolero. Este instrumento mide el espesor del pie en milímetros y ayuda en la cuantificación de la inflamación.

ahora ' s discutir algunos experimentos de ejemplo utilizando inyecciones intracardiacas, retras orbital y bandolero.

Administración de

una de las muchas aplicaciones de intracardiaca es desarrollo de un modelo animal de metástasis del cáncer. Aquí, los investigadores utilizaron esta ruta para inyectar las células tumorales que tienen propensión a la colonización de hueso. En los días siguientes, estudió el crecimiento del tumor en los huesos mediante rayos x y fluorescencia, técnicas de imagen. En otro estudio, se utilizó la ruta orbital retra para inyectar los anticuerpos específicos que etiqueta de neutrófilos. Luego, con ayuda de la proyección de imagen intravital, los científicos fueron capaces de rastrear el patrón de migración de las células etiquetados.

Por último, los investigadores utilizan inyección de bandolero para analizar la respuesta inflamatoria. En este experimento, los investigadores aislaron células mononucleares de sangre periférica de muestras de sangre humana, mezclado con diferentes antígenos e inyectar las soluciones en el animal ' bandolero de s. Finalmente, se realizaban mediciones de pie para cuantificar la respuesta de inflamación debido a diversos antígenos.

te ' ve a Miró JoVE ' entrega final de s en las técnicas de administración compuestos habituales y especializados.

Sólo

en Resumen, en la primera parte repasamos la ruta parenteral más común. En el segundo capítulo, hablamos de los procedimientos de enterales y tópicos. La tercera entrega con el primer conjunto de procedimientos anormales como intranasal, intradérmica y intracranial en los recién nacidos. Por último, aquí discutimos tres rutas adicionales que investigadores biomédicos en los laboratorios para fines específicos.

Después de ver esta serie tienes una mucho mejor comprensión de las técnicas de administración diferente y también debe saber las consideraciones generales y específicas relacionadas con estos protocolos de administración compuesto como siempre, gracias por Ver!

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