Administración compuesta III

Lab Animal Research

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Overview

< clase p = 'jove_content' > fuente: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universidad de Notre Dame, en

hay muchas rutas utilizadas para la administración del compuesto en las ratas y ratones de laboratorio. Sin embargo, ciertos protocolos pueden requerir el uso de las rutas menos comunes, incluyendo inyecciones intradérmicas, intranasales e intracraneales. Formación especializada es esencial para estos procedimientos a realizarse con éxito. Justificación para estas rutas puede necesitar obtener la aprobación institucional cuidado Animal y el Comité uso (IACUC).

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Fundamentos de la investigación de animales de laboratorio. Administración compuesta III. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

Intraderma linjections se entregan en las capas externas de la dermis, debajo de la capa superior de la piel (la epidermis). Esta ruta de inyección es generalmente reservada para la evaluación de la inflamación, diagnóstico del flujo de sangre cutáneo o reacciones alergénicas a un antígeno.

aunque de uso frecuente para la entrega local de vacunas o spray descongestionante, administración intranasal puede utilizarse también para la entrega sistémica y central del sistema nervioso (SNC). La mucosa que recubre la cavidad nasal tiene una fuente rica de los vasos sanguíneos y nervios que permiten la absorción sistémica rápida y dirigen dirigida al CNS. Sustancias conformadas por pequeñas moléculas lipofílicas tienen una tasa de absorción mucho mayor que aquellos que contienen moléculas más grandes. 2

aunque la anestesia no es necesaria para este procedimiento, que puede facilitar la colocación correcta del compuesto en las narinas, asegurando una dosificación exacta. Se ha demostrado que los animales anestesiados tienen entrega cinco veces mayor de un fármaco al cerebro en comparación con un animal consciente. 2 sin anestesiar ratas son muy resistentes a la administración intranasal. Sin embargo, hay un estudio que demostró técnicas eficaces para la administración intranasal de mover libremente las ratas. 3 además, alerta animales pueden intentar morder la punta de pipeta o aguja, dificultando la entrega de la sustancia.

ventajas para administración intranasal son que esta técnica requiere un mínimo de entrenamiento y habilidad, y es no invasivo para el animal. Sin embargo, debido a la posibilidad de aerosolización, se recomienda el uso de un gabinete y ojo la protección de la seguridad de la biotecnología, especialmente cuando se trabaja con un animal consciente. Además, para evitar el ahogamiento de los animales, debe usarse la dosis más pequeña posible. Si en cualquier momento durante esta cianosis procedimiento, respiración por la boca u otros signos de sufrimiento se ven en el animal, el procedimiento debe interrumpirse inmediatamente.

inyecciones intracraneales en ratones adultos y ratas emplean el uso de equipo estereotáctica para asegurar el correcto posicionamiento y la profundidad de la inyección. Sin embargo, en ratones de 3 a 28 días de edad, las ratas y hasta 14 días de edad, el cráneo es lo suficientemente delgado como para inyectar directamente a través de él; es demasiado frágil para soportar el dispositivo estereotáxicas. Las crías de ratón o rata deben dejarse con la madre hasta que el procedimiento y debe ser devuelto a ella tan pronto como sea posible una vez finalizado el procedimiento. Atención ClLi incluye monitoreo continuo sobre una fuente de calor hasta que el movimiento normal y conductas, incluyendo la enfermería, se observan. La razón principal de utilizar esta técnica es proporcionar a agentes farmacológicos para el sistema nervioso central que requieran la barrera blood - brain para ser cruzado, o para evitar los efectos involucrados en la ruta sistémica. 1

Procedure

1. administración intradérmica

  1. intradérmicas más inyecciones son compuestos de base acuosa. Las soluciones deben ser fisiológicamente tamponadas para tener un pH neutro, para evitar necrosis de los tejidos en el sitio de inyección.
  2. Es de la gama de tamaño de aguja calibre 25-30, el más pequeño posible.
  3. La gama de dosis por punto de inyección es 50-100 μl. inyectables excesivos volúmenes pueden resultar en necrosis en el sitio de la inyección o del compuesto en el sitio debido a la presión de la salida.
  4. Para la colocación exacta de la aguja en el espacio intradérmico, es necesario anestesiar a ratones y ratas. Anestesia inhalatoria permite una rápida inducción y recuperación; sin embargo, la anestesia inyectable tiene la ventaja de proporcionar tiempo suficiente para la preparación de la zona y realizar la inyección. 1
  5. quitar el pelo en el sitio de la inyección mediante el uso de una crema depilatoria o depilar la zona.
  6. Eliminar completamente cualquier residuo de pelo o crema depilatoria residual.
  7. Aplicar un antiséptico tópico, como una solución de yodo, clorhexidina o alcohol.
  8. Procedimientos de administración
    1. estira la piel tensa entre los dedos pulgar e índice. Esto proporciona estabilidad a la piel cuando se coloca la aguja.
    2. Colocar el bisel de la aguja hacia arriba en la piel.
    3. Insertar suavemente la aguja en la piel entre la epidermis y la dermis. Avanzar la aguja más allá del cartabón.
    4. Inyectar lentamente la sustancia. Inyección del compuesto va a crear una ampolla o ampolla pequeña, en la piel.
    5. Pausa después de la inyección para permitir que la piel estirar y ajustar antes de retirar la aguja.
  9. Precauciones
    1. tirando hacia atrás del émbolo no es necesario.
    2. Si la aguja se inserta en el espacio subcutáneo, no de la ampolla se forma. Resultados en una inyección subcutánea de inyección demasiado profundamente.
    3. Evitar borrar o limpiar la zona, ya que puede causar el compuesto a perder el sitio de inyección.
    4. Al realizar múltiples inyecciones, los espacio para que las ampollas no se superponen.

Figure 1
figura 1. Inyección intradérmica en los ratones.

2. administración intranasal

  1. equipos
    1. utilice una pipeta de unidad de micropipetting que puede ser calibrada para proporcionar un volumen exacto.
    2. Puntas de pipeta desechables de
    3. puede usarse para evitar la contaminación cruzada. TB las jeringas, agujas embotadas y tubería flexible pueden utilizarse también para la dosificación.
    4. Volúmenes de inyección total
    5. para ratas no deben exceder 40-100 μl y deben ser administrados en gotas de 6-10 μl. Para los ratones, el volumen total máximo es 24 μl, en gotas de 3-4 μL.
  2. Administración en animales conscientes
    1. moderación Manual animales conscientes requiere que la cabeza sea relativamente inmóvil para que la punta de la pipeta o aguja embotada puede colocarse lo suficientemente cerca de las narinas para entregar el compuesto, pero no tan cerca en cuanto a meter o lacerar el tejido nasal.
    2. Refrenar el animal y manténgalo en posición vertical.
    3. Colocar una pequeña gota de un líquido compuesto en la nasal apertura. El animal debe inhalar la gota de.
    4. Administrar un volumen adicional, alternando nares hasta que le ha dado todo el volumen.
    5. Al administrar grandes volúmenes, es importante no constrict el pecho durante la contención. Compresión de pecho impide la capacidad del animal para tomar respiraciones suficientemente profundas para extraer el líquido en los bronquios y los pulmones.

Figure 2
figura 2. Administración intranasal en ratones conscientes.

  1. Administración en animales inconscientes
    1. anestésicos de inhalación de uso permite un animal inmovilizado durante la aproximación y la entrega del compuesto. Esto elimina la posibilidad del animal morder el equipo de dosificación, la pérdida del compuesto debido a movimientos bruscos de la cabeza y lesiones en el animal ' s tejido nasal, ojos o piel de la cara. El animal también es menos probable que snort y el compuesto de las narinas a la administración del aerosol.
    2. Colocar el animal en la posición supina. La posición de la cabeza influye en la colocación de la solución en las narinas. Se ha demostrado que la posición ideal para entrega de CNS es con el animal decúbito supino; Esto permite una mejor absorción. 2
    3. administrar la mitad del compuesto directamente en un lado de la abertura nasal, sincronización con la inhalación. Girar el animal.
    4. Que el anterior, administrar la otra mitad del volumen en el otro orificio nasal.

Figure 3
figura 3. Administración intranasal en ratones inconscientes.

3. administración intracraneal en ratones neonatales y ratas

  1. ratones o ratas se deben anestesiar para inyección intracraneal.
ratón rata
edad (días) Aguja calibre (g) edad (días) calibre de la aguja (g)
0-7 29-30 0-5 27-29
7 14 27 10 5 25 27
14-28 25 10-14 25
edad (días) longitud de la aguja (mm) edad (días) longitud de la aguja (mm)
0-7 2 0-4 2-3
7-14 3 4 7 3
14 21 4 7 10 4
28 21 5 10-14 5
edad (días) volumen (μL) edad (días) volumen (μL)
0-5 < 20 1-3 < 20
6-20 < 60 4-10 < 60
20-28 < 100 11-14 < 100

tabla 1. Aguja de calibre, longitud de la aguja y volumen máximo de administración intracraneal según la edad de los ratones y ratas. 4

  1. equipos
    1. determinar el volumen correcto de la aguja calibre y máximo de administración según la tabla 1.
    2. Preparar un protector de la aguja antes de anestesiar al animal.
      Nota: La profundidad de la inyección de la aguja es controlada mediante el uso de un protector que se crea con la tapa de la aguja.
      1. Para crear la guardia, una aguja se mide contra la tapa de la aguja y se coloca una marca en la tapa para indicar dónde cortar. El corte debe hacerse para que 2 a 5 mm de la aguja queden expuestos cuando se reemplaza la tapa de la aguja.
      2. La longitud de la aguja expuesta debe ser lo suficientemente largos para penetrar la piel y el cráneo y llegar a la profundidad deseada en el cerebro.
      3. Las longitudes de aguja para ratones y ratas se enumeran en la tabla 1.
    3. Una fuente de calor es necesaria para prevenir la hipotermia en los cachorros. Hay varios tipos: una almohadilla de calefacción eléctrica establece en baja, una manta de agua circulante o una bolsa de calor de la reacción química reutilizable.
  2. Seguridad
    1. crías de ratón y rata 10 días de edad o menos no requieren anestesia para este procedimiento. Refrenarlos manualmente manteniendo justo detrás de la cabeza y tirando la piel caudalmente para ejercer ligera presión sobre los hombros.
    2. Anesthetize cachorros durante 10 días de edad con inhalación isoflurane. Conecte una cámara de inducción a un vaporizador de precisión o una campana con una bola de algodón empapada con isoflurano. Una vez que el cachorro se inmoviliza, la anestesia es eficaz durante unos 40 segundos, que proporciona tiempo suficiente para la inyección.
  3. Técnica de inyección
    1. dibujar la sustancia en la jeringa y coloque la guía de la tapa de la aguja sobre la aguja.
    2. El volumen de inyección recomendado como el volumen máximo por neonatal ratón o rata es 100 μl, y que para el destete o los ratones mayores hasta 300 μl.
    3. Para inyectar en la corteza cerebral de los recién nacidos, inserte la aguja 5 mm detrás del ojo, aproximadamente 3 mm de la línea media del cráneo.
    4. El sitio de la inyección de ratón destete es aproximadamente mitad de camino entre el ojo y el oído y justo al lado de la línea media.

Figure 4
figura 4. Administración intracraneal en una cría de ratón.

a veces, diferentes aproximaciones experimentales requieren el uso de menos comúnmente empleados rutas de administración compuesta en roedores. Intradérmica, intranasales e intracraneales son tres de estas rutas alternativas que hoy utilizan los investigadores biomédicos en laboratorios.

Como su nombre lo indica, intradérmica es entregar compuestos en las capas externas de la dermis. Intranasal está colocando la solución en el animal ' nares s. E intracraneal consiste en la introducción de la aguja directamente en el roedor ' cerebro de s.

Formación especializada es esencial para realizar estos procedimientos con éxito. Aquí, nos ' va primero ilustrar las consideraciones para cada uno de estos métodos y luego demostrarán las técnicas que le ayudará a aprenden los procedimientos garantizando la seguridad de los animales y el éxito del experimento.

que ' s comenzar con la discusión de cuando normalmente se emplean estas rutas y cosas que uno debe tener en cuenta antes de comenzar a realizar estas técnicas de administración especializadas.

Las inyecciones intradérmicas se utilizan para entregar un artículo en el espacio entre la epidermis y la dermis esta ruta generalmente está reservada para la evaluación de la inflamación, diagnóstico del flujo de sangre cutáneo o reacciones alergénicas a un antígeno. Similar a otras rutas, la intradérmica solución también se prepara usando la técnica estéril. Y deben ser fisiológicamente tamponada para tener un pH neutro para evitar necrosis de los tejidos en el sitio de inyección. Un sistema de eje-menos con una aguja de calibre 25-30 se utiliza a menudo para esta inyección. Este sistema ayuda a mantener el volumen de administración, que está en el rango de 50-100 microlitros por sitio de inyección. Inyección de exceso puede resultar en necrosis o indeseable compuesto de fuga debido a la presión.

Ruta intranasal es elegido a menudo para entrega local de vacunas o descongestionante aerosol así como sistémica y la entrega de la CNS. La mucosa que recubre la cavidad nasal tiene una fuente rica de los vasos sanguíneos y nervios que permiten la absorción sistémica rápida y dirigen dirigida al CNS. Se trata de un método no invasivo que requiere un mínimo de entrenamiento y habilidad y equipo simple - una micropipeta calibrada y algunas puntas desechables. Los volúmenes de administración para las ratas no deben exceder 40-100 microlitros en 6-10 gotas de microlitro. Y para los ratones, el volumen total máximo es 24 microlitros en 3-4 gotas de microlitro.

Aunque la anestesia no es necesaria para este procedimiento, tiene algunas ventajas sobre administración intranasal en animales conscientes 1) facilita la colocación correcta del compuesto en las narinas, dosificación precisa asegurar 2) elimina la posibilidad de la animales mordiendo el equipo dosificador 3) aseguran que no hay ninguna lesión al animal ' s tejido nasal, ojos o piel de la cara debido a movimientos bruscos de la cabeza y 4) animal es menos probable que snort y el compuesto de las narinas a la administración del aerosol.

Inyecciones intracraneal en ratones adultos y ratas emplean el uso de equipo estereotáxicas, que se describe en un video en el " esenciales de Neurociencias " colección. El equipo asegura la colocación apropiada y correcta profundidad de la inyección. Aquí, nos centraremos en entrega intracraneal en ratones neonatales y ratas en el cual el cráneo es lo suficientemente delgada como para inyectar directamente a través de él y puede ser demasiado frágil para soportar el dispositivo estereotáxicas. Los objetivos primordiales de esta técnica son para entregar a agentes farmacológicos CNS directamente en el SNC y para evitar los efectos encontrados por cualquier vía sistémica. La aguja de calibre, longitud y volumen de administración son determinados basados en las especies y la edad de los cachorros. Tenga en cuenta que como el animal ' edad de s aumenta, el calibre número disminuye, aumenta la longitud de aguja necesarios, y la máxima recomendada volumen de administración también aumentos.

con esta información en mente, que ' s profundizar en los procedimientos de estos métodos de inyección. Primero es la técnica de administración intradérmica. Este procedimiento deberá llevarse a cabo en animales anestesiados. Otro video de esta colección para entender los procedimientos de inducción de la anestesia y mantenimiento revisión.

Una vez que el animal está anestesiado, afeitar el sitio de la inyección utilizando una máquina de afeitar eléctrica o una crema depilatoria. Con una gasa humedecida en agua, eliminar completamente el cabello persistente desde el sitio. Luego, con otra gasa, aplicar una solución antiséptica tópica en la zona depilada. Para la administración, primero estabilizar tla piel en el sitio de inyección por el estiramiento entre el pulgar y el dedo índice.

Ahora Coloque el bisel de la aguja hacia arriba en la piel e inserte suavemente más allá del bisel para que la abertura se encuentra entre la epidermis y las capas de la dermis. Luego inyecte lentamente y observe que se crea una ampolla en la piel. Si la aguja se inserta demasiado profundamente no se formará ninguna ampolla. Después de la inyección, una pausa para permitir que la piel estirar y ajustar y luego retire la aguja lentamente. No tire hacia atrás del émbolo en cualquier momento, como sería elaborar el tejido y causar trauma en el sitio de inyección. También, no limpie o seque el sitio de la inyección, ya que puede causar la sustancia inyectada para escaparse. Al realizar inyecciones múltiples, asegúrese de les espacio aparte suficientemente ancha como para que las ampollas no se solapen uno con el otro.

, que ' s aprender el procedimiento de administración intranasal en animales conscientes y anestesiados.

Para animales despiertos, ellos refrenan por scruffing la piel en la nuca del cuello y luego mantener el animal en posición vertical con la cabeza inmovilizada. Tenga cuidado de no restringir el pecho como que podría impedir que el animal ' capacidad para tomar respiraciones profundas lo suficientemente para dibujar el líquido en los pulmones. Usando una micropipeta, administrar parte de la solución colocando una pequeña gota de líquido en la abertura nasal. El animal inhalará la gota. Repita este proceso, alternando entre las dos aberturas nasales hasta que le ha dado todo el volumen a ser administrado. Recordar - el volumen total de la administración no debe exceder 24 μl y 100 μl en ratones y ratas, respectivamente.

Para las ratas y ratones anestesiados, coloque el animal en posición dorsal recumbency. Esta posición es ideal para la entrega del CNS como permite para una mejor absorción del compuesto. Gire el animal ' s cabeza y administrar la mitad del compuesto directamente en un lado de la abertura nasal, sincronización con la inhalación. Luego, gire el animal ' cabeza en la posición para la próxima administración. Después de 2 respiraciones, administrar el volumen restante en la segunda abertura nasal. Después de la administración completa, volver la espalda animal a su jaula.

a continuación, deje que ' s revisar el procedimiento de administración intracraneal neonatales ratones y ratas . Antes de comenzar el procedimiento, coloque la jaula con las crías y la presa en un eléctrico conjunto de pad para baja la calefacción. Asegúrese de que una parte de la jaula es de la almohada. Esto es para prevenir la hipotermia y, al mismo tiempo, permitir la presa a moverse lejos del calor si desea. A continuación, seleccione una aguja de calibre adecuado para la edad del animal. Memoria, el calibre de la aguja; longitud de la aguja, que se utiliza para controlar la profundidad de la aguja durante la inyección intracraneal; y el volumen de administración... todo varía según el animal ' especies y edad de s.

La longitud se ajusta usando un protector. Para preparar este protector, medir la aguja correcta contra la tapa y haga una marca. A continuación, coloque una segunda marca en la tapa para indicar donde se cortará. La distancia entre las dos marcas es la longitud deseada de la aguja. Luego, corte la tapa con una hoja de afeitar. No utilice tijeras ya que puede aplastar la tapa y no va a producir un corte limpio nivel. Este es el " protector de aguja " deseche la aguja utilizada para la creación de la guardia, como ya no es estéril y en su lugar Inserte una aguja nueva en la guardia y asegurarse de que esté expuesta la longitud correcta. A continuación, utilizando una aguja diferente conectada a la jeringuilla conveniente, dibujar la sustancia inyectable. Se utiliza una aguja diferente para hacer esto, porque la colocación en el tapón opacarán significativamente estas agujas de fino calibre, que no es ideal para la administración intracraneal. Luego, coloque la jeringa llena en la aguja con el protector. Ahora el sistema está listo para una inyección.

Para cachorros durante 10 días de edad, administrar anestesia inhalatoria. Cachorros menores de 10 días de edad no necesitan ser anestesiados. Para realizar la inyección, primero Localice el sitio, que es 5 mm detrás del ojo y de aproximadamente 3 mm de la línea media del cráneo. A continuación, inserte la aguja a la profundidad permitida para por el protector de la aguja. A continuación, inyecte de manera constante lenta para evitar el trauma al cerebro. Retire la aguja inmediatamente y con mucho cuidado para evitar lesiones en el tejido cerebral. Por último, colocar la espalda animal con la presa para permitir la adecuada recuperación.

ahora ' s revisar algunos experimentos en los laboratorios de hoy en día que utilizan estas rutas poco comunes de la administración.

Una inyección intradérmica se utiliza a menudo para estudiar la reacción inflamatoria de la piel. En este experimento, los investigadores utilizaron este método para inyectar un alérgeno en un oído y una sustancia neutra en la oreja opuesta de un ratón previamente sensibilizado. A continuación, entregaron un colorante azul en el animal ' s circulatorio para examinar los cambios en la permeabilidad vascular debido a la inyección del alérgeno.

Como se mencionó anteriormente, una de las aplicaciones de administración intranasal es de administrar las vacunas. Aquí, los científicos utilizan esta ruta para administrar una vacuna de la gripe atenuados genéticamente modificados, vivo en el tipo salvaje y ratones transgénicos y estudiado inmunidad mucosa mediante la producción de un tipo específico de células T.

Por último, estas investigaciones biomédicas utilizan administración intracraneal para implantar las células cancerígenas en ratones inmunocomprometidos, con el fin de crear un modelo de tumor de cerebro humano. La eficacia de la inyección luego se analizó utilizando un sistema de proyección de imagen en vivo.

tiene jus VI JoVE ' s video sobre algunos de los métodos especiales de administración del compuesto en las ratas y ratones de laboratorio. Ahora debe entender cuando estos procedimientos son útiles, las consideraciones se deben tener en cuenta antes y mientras se realizan estas técnicas y los pasos procesales esenciales para que la administración tiene un impacto mínimo en el animal ' s salud y en los datos experimentales a recogerse. Como siempre, gracias por ver!

Summary

la administración de compuestos en animales puede tener un efecto significativo tanto el bienestar de los animales y el resultado de los datos experimentales y valor científico. El método apropiado de suministro es esencial para el éxito del experimento. Muchos factores deben ser considerados para determinar la mejor ruta, incluyendo el objetivo científico del estudio, el pH de la sustancia, el volumen de la dosificación requerida, la viscosidad de la sustancia y el bienestar de los animales. Conocimientos técnicos también es un requisito para todos los métodos de inyección.

References

  1. Turner, P.V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., and Brabb, T. 2011. Administration of substances to laboratory animals: equipment and considerations, vehicle selection, and solution preparation. JAALAS. 50: 614-627.
  2. Dhuria, S.V., Hanson, L.R., and Frey II, W.H. 2010. Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. Journal of Pharmaceutical Sciences. 99: 1654-1673.
  3. Stevens, J., Suidgeest, E, Van der Graaf, P.H., Danhof, M., and De Lange, E.C. 2008. Development and evaluation of a new, minimal-stress animal model for intranasal administration in freely moving rats. Poster presentation at American Association of Pharmaceutical Scientists Annual Meeting, Atlanta, Georgia.
  4. Morton, D.A., Jennings, M., Buckwell, A., Ewbank, R., Godfrey, C., Holgate, B., Inglis, I., James, R., Page, C., Sharman, I., Verschoyle, R., Westall, L., and Wilson, A.B. 2001. Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Members of the Joint Working Group on Refinement. Laboratory Animals. 35: 1-41.

1. administración intradérmica

  1. intradérmicas más inyecciones son compuestos de base acuosa. Las soluciones deben ser fisiológicamente tamponadas para tener un pH neutro, para evitar necrosis de los tejidos en el sitio de inyección.
  2. Es de la gama de tamaño de aguja calibre 25-30, el más pequeño posible.
  3. La gama de dosis por punto de inyección es 50-100 μl. inyectables excesivos volúmenes pueden resultar en necrosis en el sitio de la inyección o del compuesto en el sitio debido a la presión de la salida.
  4. Para la colocación exacta de la aguja en el espacio intradérmico, es necesario anestesiar a ratones y ratas. Anestesia inhalatoria permite una rápida inducción y recuperación; sin embargo, la anestesia inyectable tiene la ventaja de proporcionar tiempo suficiente para la preparación de la zona y realizar la inyección. 1
  5. quitar el pelo en el sitio de la inyección mediante el uso de una crema depilatoria o depilar la zona.
  6. Eliminar completamente cualquier residuo de pelo o crema depilatoria residual.
  7. Aplicar un antiséptico tópico, como una solución de yodo, clorhexidina o alcohol.
  8. Procedimientos de administración
    1. estira la piel tensa entre los dedos pulgar e índice. Esto proporciona estabilidad a la piel cuando se coloca la aguja.
    2. Colocar el bisel de la aguja hacia arriba en la piel.
    3. Insertar suavemente la aguja en la piel entre la epidermis y la dermis. Avanzar la aguja más allá del cartabón.
    4. Inyectar lentamente la sustancia. Inyección del compuesto va a crear una ampolla o ampolla pequeña, en la piel.
    5. Pausa después de la inyección para permitir que la piel estirar y ajustar antes de retirar la aguja.
  9. Precauciones
    1. tirando hacia atrás del émbolo no es necesario.
    2. Si la aguja se inserta en el espacio subcutáneo, no de la ampolla se forma. Resultados en una inyección subcutánea de inyección demasiado profundamente.
    3. Evitar borrar o limpiar la zona, ya que puede causar el compuesto a perder el sitio de inyección.
    4. Al realizar múltiples inyecciones, los espacio para que las ampollas no se superponen.

Figure 1
figura 1. Inyección intradérmica en los ratones.

2. administración intranasal

  1. equipos
    1. utilice una pipeta de unidad de micropipetting que puede ser calibrada para proporcionar un volumen exacto.
    2. Puntas de pipeta desechables de
    3. puede usarse para evitar la contaminación cruzada. TB las jeringas, agujas embotadas y tubería flexible pueden utilizarse también para la dosificación.
    4. Volúmenes de inyección total
    5. para ratas no deben exceder 40-100 μl y deben ser administrados en gotas de 6-10 μl. Para los ratones, el volumen total máximo es 24 μl, en gotas de 3-4 μL.
  2. Administración en animales conscientes
    1. moderación Manual animales conscientes requiere que la cabeza sea relativamente inmóvil para que la punta de la pipeta o aguja embotada puede colocarse lo suficientemente cerca de las narinas para entregar el compuesto, pero no tan cerca en cuanto a meter o lacerar el tejido nasal.
    2. Refrenar el animal y manténgalo en posición vertical.
    3. Colocar una pequeña gota de un líquido compuesto en la nasal apertura. El animal debe inhalar la gota de.
    4. Administrar un volumen adicional, alternando nares hasta que le ha dado todo el volumen.
    5. Al administrar grandes volúmenes, es importante no constrict el pecho durante la contención. Compresión de pecho impide la capacidad del animal para tomar respiraciones suficientemente profundas para extraer el líquido en los bronquios y los pulmones.

Figure 2
figura 2. Administración intranasal en ratones conscientes.

  1. Administración en animales inconscientes
    1. anestésicos de inhalación de uso permite un animal inmovilizado durante la aproximación y la entrega del compuesto. Esto elimina la posibilidad del animal morder el equipo de dosificación, la pérdida del compuesto debido a movimientos bruscos de la cabeza y lesiones en el animal ' s tejido nasal, ojos o piel de la cara. El animal también es menos probable que snort y el compuesto de las narinas a la administración del aerosol.
    2. Colocar el animal en la posición supina. La posición de la cabeza influye en la colocación de la solución en las narinas. Se ha demostrado que la posición ideal para entrega de CNS es con el animal decúbito supino; Esto permite una mejor absorción. 2
    3. administrar la mitad del compuesto directamente en un lado de la abertura nasal, sincronización con la inhalación. Girar el animal.
    4. Que el anterior, administrar la otra mitad del volumen en el otro orificio nasal.

Figure 3
figura 3. Administración intranasal en ratones inconscientes.

3. administración intracraneal en ratones neonatales y ratas

  1. ratones o ratas se deben anestesiar para inyección intracraneal.
ratón rata
edad (días) Aguja calibre (g) edad (días) calibre de la aguja (g)
0-7 29-30 0-5 27-29
7 14 27 10 5 25 27
14-28 25 10-14 25
edad (días) longitud de la aguja (mm) edad (días) longitud de la aguja (mm)
0-7 2 0-4 2-3
7-14 3 4 7 3
14 21 4 7 10 4
28 21 5 10-14 5
edad (días) volumen (μL) edad (días) volumen (μL)
0-5 < 20 1-3 < 20
6-20 < 60 4-10 < 60
20-28 < 100 11-14 < 100

tabla 1. Aguja de calibre, longitud de la aguja y volumen máximo de administración intracraneal según la edad de los ratones y ratas. 4

  1. equipos
    1. determinar el volumen correcto de la aguja calibre y máximo de administración según la tabla 1.
    2. Preparar un protector de la aguja antes de anestesiar al animal.
      Nota: La profundidad de la inyección de la aguja es controlada mediante el uso de un protector que se crea con la tapa de la aguja.
      1. Para crear la guardia, una aguja se mide contra la tapa de la aguja y se coloca una marca en la tapa para indicar dónde cortar. El corte debe hacerse para que 2 a 5 mm de la aguja queden expuestos cuando se reemplaza la tapa de la aguja.
      2. La longitud de la aguja expuesta debe ser lo suficientemente largos para penetrar la piel y el cráneo y llegar a la profundidad deseada en el cerebro.
      3. Las longitudes de aguja para ratones y ratas se enumeran en la tabla 1.
    3. Una fuente de calor es necesaria para prevenir la hipotermia en los cachorros. Hay varios tipos: una almohadilla de calefacción eléctrica establece en baja, una manta de agua circulante o una bolsa de calor de la reacción química reutilizable.
  2. Seguridad
    1. crías de ratón y rata 10 días de edad o menos no requieren anestesia para este procedimiento. Refrenarlos manualmente manteniendo justo detrás de la cabeza y tirando la piel caudalmente para ejercer ligera presión sobre los hombros.
    2. Anesthetize cachorros durante 10 días de edad con inhalación isoflurane. Conecte una cámara de inducción a un vaporizador de precisión o una campana con una bola de algodón empapada con isoflurano. Una vez que el cachorro se inmoviliza, la anestesia es eficaz durante unos 40 segundos, que proporciona tiempo suficiente para la inyección.
  3. Técnica de inyección
    1. dibujar la sustancia en la jeringa y coloque la guía de la tapa de la aguja sobre la aguja.
    2. El volumen de inyección recomendado como el volumen máximo por neonatal ratón o rata es 100 μl, y que para el destete o los ratones mayores hasta 300 μl.
    3. Para inyectar en la corteza cerebral de los recién nacidos, inserte la aguja 5 mm detrás del ojo, aproximadamente 3 mm de la línea media del cráneo.
    4. El sitio de la inyección de ratón destete es aproximadamente mitad de camino entre el ojo y el oído y justo al lado de la línea media.

Figure 4
figura 4. Administración intracraneal en una cría de ratón.

a veces, diferentes aproximaciones experimentales requieren el uso de menos comúnmente empleados rutas de administración compuesta en roedores. Intradérmica, intranasales e intracraneales son tres de estas rutas alternativas que hoy utilizan los investigadores biomédicos en laboratorios.

Como su nombre lo indica, intradérmica es entregar compuestos en las capas externas de la dermis. Intranasal está colocando la solución en el animal ' nares s. E intracraneal consiste en la introducción de la aguja directamente en el roedor ' cerebro de s.

Formación especializada es esencial para realizar estos procedimientos con éxito. Aquí, nos ' va primero ilustrar las consideraciones para cada uno de estos métodos y luego demostrarán las técnicas que le ayudará a aprenden los procedimientos garantizando la seguridad de los animales y el éxito del experimento.

que ' s comenzar con la discusión de cuando normalmente se emplean estas rutas y cosas que uno debe tener en cuenta antes de comenzar a realizar estas técnicas de administración especializadas.

Las inyecciones intradérmicas se utilizan para entregar un artículo en el espacio entre la epidermis y la dermis esta ruta generalmente está reservada para la evaluación de la inflamación, diagnóstico del flujo de sangre cutáneo o reacciones alergénicas a un antígeno. Similar a otras rutas, la intradérmica solución también se prepara usando la técnica estéril. Y deben ser fisiológicamente tamponada para tener un pH neutro para evitar necrosis de los tejidos en el sitio de inyección. Un sistema de eje-menos con una aguja de calibre 25-30 se utiliza a menudo para esta inyección. Este sistema ayuda a mantener el volumen de administración, que está en el rango de 50-100 microlitros por sitio de inyección. Inyección de exceso puede resultar en necrosis o indeseable compuesto de fuga debido a la presión.

Ruta intranasal es elegido a menudo para entrega local de vacunas o descongestionante aerosol así como sistémica y la entrega de la CNS. La mucosa que recubre la cavidad nasal tiene una fuente rica de los vasos sanguíneos y nervios que permiten la absorción sistémica rápida y dirigen dirigida al CNS. Se trata de un método no invasivo que requiere un mínimo de entrenamiento y habilidad y equipo simple - una micropipeta calibrada y algunas puntas desechables. Los volúmenes de administración para las ratas no deben exceder 40-100 microlitros en 6-10 gotas de microlitro. Y para los ratones, el volumen total máximo es 24 microlitros en 3-4 gotas de microlitro.

Aunque la anestesia no es necesaria para este procedimiento, tiene algunas ventajas sobre administración intranasal en animales conscientes 1) facilita la colocación correcta del compuesto en las narinas, dosificación precisa asegurar 2) elimina la posibilidad de la animales mordiendo el equipo dosificador 3) aseguran que no hay ninguna lesión al animal ' s tejido nasal, ojos o piel de la cara debido a movimientos bruscos de la cabeza y 4) animal es menos probable que snort y el compuesto de las narinas a la administración del aerosol.

Inyecciones intracraneal en ratones adultos y ratas emplean el uso de equipo estereotáxicas, que se describe en un video en el " esenciales de Neurociencias " colección. El equipo asegura la colocación apropiada y correcta profundidad de la inyección. Aquí, nos centraremos en entrega intracraneal en ratones neonatales y ratas en el cual el cráneo es lo suficientemente delgada como para inyectar directamente a través de él y puede ser demasiado frágil para soportar el dispositivo estereotáxicas. Los objetivos primordiales de esta técnica son para entregar a agentes farmacológicos CNS directamente en el SNC y para evitar los efectos encontrados por cualquier vía sistémica. La aguja de calibre, longitud y volumen de administración son determinados basados en las especies y la edad de los cachorros. Tenga en cuenta que como el animal ' edad de s aumenta, el calibre número disminuye, aumenta la longitud de aguja necesarios, y la máxima recomendada volumen de administración también aumentos.

con esta información en mente, que ' s profundizar en los procedimientos de estos métodos de inyección. Primero es la técnica de administración intradérmica. Este procedimiento deberá llevarse a cabo en animales anestesiados. Otro video de esta colección para entender los procedimientos de inducción de la anestesia y mantenimiento revisión.

Una vez que el animal está anestesiado, afeitar el sitio de la inyección utilizando una máquina de afeitar eléctrica o una crema depilatoria. Con una gasa humedecida en agua, eliminar completamente el cabello persistente desde el sitio. Luego, con otra gasa, aplicar una solución antiséptica tópica en la zona depilada. Para la administración, primero estabilizar tla piel en el sitio de inyección por el estiramiento entre el pulgar y el dedo índice.

Ahora Coloque el bisel de la aguja hacia arriba en la piel e inserte suavemente más allá del bisel para que la abertura se encuentra entre la epidermis y las capas de la dermis. Luego inyecte lentamente y observe que se crea una ampolla en la piel. Si la aguja se inserta demasiado profundamente no se formará ninguna ampolla. Después de la inyección, una pausa para permitir que la piel estirar y ajustar y luego retire la aguja lentamente. No tire hacia atrás del émbolo en cualquier momento, como sería elaborar el tejido y causar trauma en el sitio de inyección. También, no limpie o seque el sitio de la inyección, ya que puede causar la sustancia inyectada para escaparse. Al realizar inyecciones múltiples, asegúrese de les espacio aparte suficientemente ancha como para que las ampollas no se solapen uno con el otro.

, que ' s aprender el procedimiento de administración intranasal en animales conscientes y anestesiados.

Para animales despiertos, ellos refrenan por scruffing la piel en la nuca del cuello y luego mantener el animal en posición vertical con la cabeza inmovilizada. Tenga cuidado de no restringir el pecho como que podría impedir que el animal ' capacidad para tomar respiraciones profundas lo suficientemente para dibujar el líquido en los pulmones. Usando una micropipeta, administrar parte de la solución colocando una pequeña gota de líquido en la abertura nasal. El animal inhalará la gota. Repita este proceso, alternando entre las dos aberturas nasales hasta que le ha dado todo el volumen a ser administrado. Recordar - el volumen total de la administración no debe exceder 24 μl y 100 μl en ratones y ratas, respectivamente.

Para las ratas y ratones anestesiados, coloque el animal en posición dorsal recumbency. Esta posición es ideal para la entrega del CNS como permite para una mejor absorción del compuesto. Gire el animal ' s cabeza y administrar la mitad del compuesto directamente en un lado de la abertura nasal, sincronización con la inhalación. Luego, gire el animal ' cabeza en la posición para la próxima administración. Después de 2 respiraciones, administrar el volumen restante en la segunda abertura nasal. Después de la administración completa, volver la espalda animal a su jaula.

a continuación, deje que ' s revisar el procedimiento de administración intracraneal neonatales ratones y ratas . Antes de comenzar el procedimiento, coloque la jaula con las crías y la presa en un eléctrico conjunto de pad para baja la calefacción. Asegúrese de que una parte de la jaula es de la almohada. Esto es para prevenir la hipotermia y, al mismo tiempo, permitir la presa a moverse lejos del calor si desea. A continuación, seleccione una aguja de calibre adecuado para la edad del animal. Memoria, el calibre de la aguja; longitud de la aguja, que se utiliza para controlar la profundidad de la aguja durante la inyección intracraneal; y el volumen de administración... todo varía según el animal ' especies y edad de s.

La longitud se ajusta usando un protector. Para preparar este protector, medir la aguja correcta contra la tapa y haga una marca. A continuación, coloque una segunda marca en la tapa para indicar donde se cortará. La distancia entre las dos marcas es la longitud deseada de la aguja. Luego, corte la tapa con una hoja de afeitar. No utilice tijeras ya que puede aplastar la tapa y no va a producir un corte limpio nivel. Este es el " protector de aguja " deseche la aguja utilizada para la creación de la guardia, como ya no es estéril y en su lugar Inserte una aguja nueva en la guardia y asegurarse de que esté expuesta la longitud correcta. A continuación, utilizando una aguja diferente conectada a la jeringuilla conveniente, dibujar la sustancia inyectable. Se utiliza una aguja diferente para hacer esto, porque la colocación en el tapón opacarán significativamente estas agujas de fino calibre, que no es ideal para la administración intracraneal. Luego, coloque la jeringa llena en la aguja con el protector. Ahora el sistema está listo para una inyección.

Para cachorros durante 10 días de edad, administrar anestesia inhalatoria. Cachorros menores de 10 días de edad no necesitan ser anestesiados. Para realizar la inyección, primero Localice el sitio, que es 5 mm detrás del ojo y de aproximadamente 3 mm de la línea media del cráneo. A continuación, inserte la aguja a la profundidad permitida para por el protector de la aguja. A continuación, inyecte de manera constante lenta para evitar el trauma al cerebro. Retire la aguja inmediatamente y con mucho cuidado para evitar lesiones en el tejido cerebral. Por último, colocar la espalda animal con la presa para permitir la adecuada recuperación.

ahora ' s revisar algunos experimentos en los laboratorios de hoy en día que utilizan estas rutas poco comunes de la administración.

Una inyección intradérmica se utiliza a menudo para estudiar la reacción inflamatoria de la piel. En este experimento, los investigadores utilizaron este método para inyectar un alérgeno en un oído y una sustancia neutra en la oreja opuesta de un ratón previamente sensibilizado. A continuación, entregaron un colorante azul en el animal ' s circulatorio para examinar los cambios en la permeabilidad vascular debido a la inyección del alérgeno.

Como se mencionó anteriormente, una de las aplicaciones de administración intranasal es de administrar las vacunas. Aquí, los científicos utilizan esta ruta para administrar una vacuna de la gripe atenuados genéticamente modificados, vivo en el tipo salvaje y ratones transgénicos y estudiado inmunidad mucosa mediante la producción de un tipo específico de células T.

Por último, estas investigaciones biomédicas utilizan administración intracraneal para implantar las células cancerígenas en ratones inmunocomprometidos, con el fin de crear un modelo de tumor de cerebro humano. La eficacia de la inyección luego se analizó utilizando un sistema de proyección de imagen en vivo.

tiene jus VI JoVE ' s video sobre algunos de los métodos especiales de administración del compuesto en las ratas y ratones de laboratorio. Ahora debe entender cuando estos procedimientos son útiles, las consideraciones se deben tener en cuenta antes y mientras se realizan estas técnicas y los pasos procesales esenciales para que la administración tiene un impacto mínimo en el animal ' s salud y en los datos experimentales a recogerse. Como siempre, gracias por ver!

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