Steriles Gewebe Ernte

Lab Animal Research

Your institution must subscribe to JoVE's Basic Biology collection to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Overview

Quelle: Kay Stewart, RVT, RLATG, Anus; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. University of Notre Dame, IN

Im Jahr 1959 wurden die 3 R von W.M.S. Russell und r.l. Burch eingeführt, in ihrem Buch den Grundsätzen der humanen experimentelle Technik. Die 3 Rs sind Ersatz, Reduktion und Verfeinerung des Einsatzes von Tieren in der Forschung. 1 die Verwendung von Zelllinien und Gewebekulturen, die ihren von Versuchstieren Ursprung ist eine Ersatz-Technik, da es für viele Experimente durchgeführt werden kann in-vitro-. Ernte, Gewebe und Organe für den Einsatz in Zell- und Gewebekulturen erfordert aseptischen Technik zur Vermeidung von Kontaminationen des Gewebes. Sterile Ernte ist auch notwendig für Proteine und RNA Analyse und metabolic profiling von Gewebe. Dieses Manuskript wird den Prozess der sterilen Orgel Ernte bei Ratten und Mäusen diskutieren.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Steriles Gewebe Ernte. JoVE, Cambridge, MA, (2018).

Principles

Aseptischer Technik muss befolgt werden, um die Sterilität des Gewebes zu gewährleisten. Die Ernte erfolgt in einer Laminar-Flow-Kapuze, die mit Alkohol desinfiziert wurde. Alle verwendete Materialien müssen sterilisiert werden. Der Techniker, die Durchführung der Ernteguts muss persönliche Schutzausrüstungen, einschließlich einer Maske, bouffant, sterile OP-Kittel und sterile OP-Handschuhe don. Das Kleid muss die Handgelenke um zu verhindern, das Vergießen der Hautzellen in der geöffneten Körperhöhle, Petrischalen oder steriles Medium abdecken. Aufrechterhaltung der Sterilität des Technikers erfordert dieses Verfahren, dass ein zweiter, unsterilen Techniker den sterilen Techniker mit der Euthanasie der Tiere unterstützt.

In Experimenten, die die Stoffwechselprofile von Geweben erfordern, hat die Methode der Gewebe Ernte einen großen Einfluss auf die Qualität der erhobenen Daten. 2 beide der Euthanasie Verfahren und die Länge der Zeit die Ernte findet können Auswirkungen auf die Integrität des Gewebes. Hypoxie, eine Folge der Euthanasie mit Kohlendioxid, hat nachweislich eine tiefgreifende Wirkung auf die Metaboliten in Geweben. Blutungen der Schiffe im Lungengewebe wird auch durch den Einsatz von Kohlendioxid für Euthanasie verursacht. Die Reihenfolge der Gewebeentnahme beim sequentiellen Dissektion der gezielten Gewebe durchgeführt wird kann Stoffwechselveränderungen, verursachen, da das Gewebe, Alter beginnen oder während der Ernte zerfallen.

Während sterilste ernten eine einzelne Organ Ziel, kann es vorkommen, dass mehr als ein Organ benötigt wird. Während sequenzielle Dissektion werden das Gewebe erforderlich die Reihenfolge diktieren, in der sie sollten entfernt werden. 2 Gewebe, die sich rasch verschlechtern müssen so schnell wie möglich folgende Euthanasie geerntet werden. Aufrechterhaltung der Sterilität der Instrumente Organe aus der Bauchhöhle geerntet werden entfernt, in der folgenden Reihenfolge: Milz, Leber, Niere, Nebennieren, Eierstöcke oder Hoden, Zubehör Geschlechtsorgane (Prostata, Samenblasen, Gebärmutter, Eileiter), Bauchspeicheldrüsen-Gewebe, Lymphknoten, Harnblase und Darm-Traktes (Magen, dünn- und Dickdarm). Die Reihenfolge der Orgel Ernte aus der Brusthöhle ist zuerst das Herz und die Lunge, gefolgt von der Sammlung des Thymus, Lymphknoten und Speiseröhre entfernen. 3 neue Handschuhe sind für jede Maus erforderlich.

Einige der sterilen geernteten Organe müssen bewahrt werden. Erhaltung der Gewebe wird durch Blitz Einfrieren mit flüssigem Stickstoff (LN2) oder mit einer Kombination von LN2 und 2-Methylbutane erreicht. Für LN2 allein sind das Gewebe in sterilen Kochsalzlösung gespült, getupft auf einem sterilen saugfähigen Tuch, überschüssige Feuchtigkeit zum Abbau in sterile Aluminium Folie Quadrate gelegt und sofort in der LN2eingetaucht. 2 Bei immunologischen Proben wird 2-Methylbutane hinzugefügt. Das Gewebe ist tatsächlich in der 2-Methylbutane getaucht, die vom LN2abgekühlt ist. Wenn das Gewebe weiß gedreht haben, sind sie aus der 2-Methylbutane entfernt, in sterilen Packungen platziert und dann direkt in den LN2platziert.

Procedure

1. Vorbereitung

  1. Häufig verwendete Materialien umfassen 70 % Alkohol in eine Spritzflasche, sterile 20-25 g-Nadeln, zwei Packungen mit sterilen Instrumenten der Iris-Schere und Daumen Zange (eine für die Haut) und eine für den inneren Geweben, Papierhandtücher, sterile Chirurgen Handschuhe, sterile petri Gericht, steriles Medium und sterile Kochsalzlösung.
  2. Die Haube-Fan sollte für mindestens 15 Minuten vor dem Eingriff ausgeführt werden, und es sollte mit 70 % Alkohol desinfiziert werden.
  3. Wenn die Haube mit einer UV-Lampe Sterilisation ausgestattet ist, kann es verwendet werden, weiter die Arbeitsfläche desinfizieren.
  4. Saubere Handschuhe sind für den Aufbau der Haube getragen. Das Gerät wird in der Haube in der Reihenfolge geladen in dem sie, in der Regel von links nach rechts verwendet werden. Dies ermöglicht die Arbeit in einem unidirektionalen Workflow, verhindern, dass schmutzige Gegenstände verunreinigen saubere Elemente durchgeführt werden. Dieses schützt die geernteten Geweben oder Organen vor unbeabsichtigten Kontamination aus der Tierkadaver.
  5. Die sterilen Instrument-Packs sind geöffnet, unter Beachtung den sterilen Innenraum der Pakete. Um Sterilität zu gewährleisten, wird das Pack in die Mitte des Tisches gelegt, und jede Klappe ohne Kreuzung über den sterilen Bereich oder der Innenseite der Packung geöffnet. Die unsterilen Person eröffnet die erste obere Klappe indem reflektiert es Weg für ihn / sie. Die seitlichen Klappen werden dann mit beide Hände-One auf jede Klappe geöffnet- und ziehen sie aus der Packung. Die letzte Klappe wird dann in Richtung der Person Öffnen der Packs, kümmert sich um zu vermeiden, berühren eines der inneren Oberflächen der Packung gezogen.
  6. Legen Sie die Papiertücher in der Haube, und befeuchten Sie sie mit Alkohol.
  7. Die unsterilen Person werden die Tiere einschläfern.
  8. Die sterile Person trägt zwei Sätze von sterilen OP-Handschuhe.
  9. Die unsterilen Person legt den Kadaver auf die Papiertücher und völlig saugt die Karkasse mit 70 % Alkohol.
  10. Mit einem Satz von sterile Schere und Pinzette, machen Sie einen horizontalen Schnitt in der Haut nur anterior der Vorhaut (bei Männern) oder des Beckenknochens (bei Frauen). Durchtrennung der Bauchmuskulatur zu vermeiden.
  11. Die Instrumente beiseite.

(2) Ernte Gewebe

  1. Machen Sie einen kleinen Schnitt nur anterior das Becken bei Frauen und über die Vorhaut bei Männern.
  2. Legen Sie den Daumen unter dem Schnitt und erfassen Sie der kranialen Rand des Schnittes zu. Mit der anderen Hand sicher halten Sie den hinteren Gliedmaßen und Rute und ziehen Sie die Haut in Richtung zum Kopf.
  3. Die Haut wird von den Körper oberhalb der hinteren Gliedmaßen losreißen und kann über den Kopf und Vorderbeine innen nach außen gedreht werden. Dies entfernt effektiv Haar Verunreinigungen während der Orgel Ernte.
  4. Genießen Sie den Körper wieder mit 70 % Alkohol, und entfernen Sie der oberflächlichen Paar Handschuhe, die nicht mehr steril sind.
  5. Öffnen Sie die Bauchhöhle mit sterilen Instrumenten.
    1. Milz
      1. Um die Milz zu ernten, ist der Körper im rechten seitlichen liegen aufgestellt.
      2. Die Milz kann durch die Bauchmuskulatur visualisiert werden.
      3. Ein Scherenschnitt erfolgt direkt über die Milz.
      4. Die Milz ist sanft aus der Körperhöhle eingefahren.
      5. Wenn alle Anlagen zwischen Milz, Magen und Bauchspeicheldrüsen-Gewebe zu schneiden, zu vermeiden Punktierung oder reißen die Orgel.
    2. Leber
      1. Um andere Bauchorgane zu ernten, steht der Körper dorsal liegen.
      2. Die Bauchmuskulatur ist gehoben und wegschneiden, eine ovale Öffnung direkt über die Bauchhöhle verlassen.
      3. Nach Freilegung der Bauchhöhle, spiegeln Sie die Leber kaudal von der Membran.
      4. Trennen Sie sorgfältig jede Befestigung der Leberzellkrebs an der Membran Membranen.
      5. Machen Sie einen Schnitt senkrecht auf die Wirbelsäule durch die Blutgefäße sichtbar zwischen der Leber und des Zwerchfells.
      6. Heben Sie die Leber und reflektieren Sie es gegen das Zwerchfell, die Anlagen unter ihm zu visualisieren.
      7. Es werden dünne Membranen anbringen die kleinere Lappen der Leber, Magen und Dünndarm, die unterbrochen werden müssen.
      8. Fassen Sie die fibrösen Knoten in der Mitte der Leber an seiner Unterseite, und heben Sie die Orgel um die Anlagen zu finden. Trennen Sie die Leber von der zugrunde liegenden Organen und Geweben.
      9. Beachten Sie, dass die Leber empfindlich ist und leicht durchstoßen werden kann, wodurch die Freisetzung von Blut; Daher müssen sie sorgfältig behandelt werden.
    3. Nieren
      1. Schieben Sie nach Freilegung der Bauchhöhle den Darm auf der linken Seite die rechte Niere zu visualisieren, oder nach rechts, um die linke Niere zu visualisieren.
      2. Um die Niere zu entfernen, verwenden Sie Zange Sägeblätter, um unterhalb der Niere, die Orgel aus dem Körper zu isolieren zu erfassen. Schneiden Sie mit einer Schere oder einem Skalpellklinge, die Niere vom Körper weg. Machen Sie den Schnitt unter der Zange zur Vermeidung von Schäden der Niere.
      3. Sobald die Niere entfernt wird, kann Fett aus der Orgel getrimmt werden.
    4. Eierstock
      1. Bewegen Sie nach Freilegung der Bauchhöhle den Darm cranially, die Gebärmutter zu visualisieren.
      2. Folgen Sie links und dann rechts, Hörner der Gebärmutter zu den Eierstöcken.
      3. Die Eierstöcke sind klein. Bei älteren Tieren können sie in Fett eingebettet sein.
      4. Schieben Sie die Zange unter der Fruchtknoten, aus dem Körper zu isolieren, und schneiden Sie es frei von Fett und die Eileiter.
    5. Hoden
      1. Nach der Eröffnung der Bauchhöhle, sanft inguinalen Fettpolster und herausziehen Sie es anterior.
      2. Dies zieht die Hoden aus dem Hodensack.
      3. Sobald die Hoden ausgesetzt ist, schneiden Sie die Anlagen auf dem Hodensack und der Samenleiter aus dem Körper zu befreien.
      4. Dies geschieht für jeden Hoden.
  6. Der Brusthöhle wird geöffnet, um die thorakalen Organe entfernen
    1. Der Körper befindet sich im dorsalen liegen. Es ist unerlässlich, dass die Haut auch über dem Kopf niederschlagen, wenn Organe der Brusthöhle geerntet werden.
    2. Fassen Sie das Xiphoid Prozeß und Aufzug ermöglichen einen Schnitt durch die Bauchmuskulatur nur kaudalen an den Rippen. Erweitern Sie den Schnitt entlang der unteren Kurve des Brustkorbes auf beiden Seiten. Dies ermöglicht die Visualisierung der Membran.
    3. Punktion der Membran durch ein kleines in den Brustkorb an den seitlichen Punkt schneiden Sie auf jeder Seite möglich machen. Schneiden Sie die Membran von den Rippen.
    4. Heben Sie die Rippen am Xiphoid der thorakalen Organe zu visualisieren.
    5. Den seitliche Schnitt an die Spitze des Brustbeins auf beiden Seiten zu erweitern, und öffne die Truhe.
    6. Herz und Lunge werden am leichtesten zusammen entfernt.
      1. Legen Sie die Zange senkrecht zur Trachea, und fassen Sie die Luftröhre fest.
      2. Mit der Schere, machen Sie einen Schnitt senkrecht zur Trachea nur anterior der Zange. Dieser Schnitt sollte die Luftröhre und die Speiseröhre trennen.
      3. Ohne den Griff auf die Luftröhre lösen, heben Sie die Luftröhre bis kaudal.
Schneiden Sie alle Anhänge der Lunge an die Wirbelsäule Oberfläche in den Brustkorb.
  • Die Speiseröhre müssen geschnitten werden, um das Herz und die Lunge frei von der Brusthöhle heben zu können.
  • Herz nur
    1. Heben Sie das Herz, und schneiden Sie vorsichtig durch den Herzbeutel Sac.
    2. Die Aorta ist an der kranialen Aspekt des Herzens auf das Tier links.
    3. Machen Sie Sie die Aorta mit der Zange halten, einen Schnitt distal an der Zange, einen Einfluß auf die Aorta und Herzen behalten.
    4. Die Aorta zu erfassen, wie Sie die vorderen Vena Cava und pulmonalen Arterien und Venen zu trennen.
    5. Heben Sie das Herz frei von der Brusthöhle durch die Aorta Arterie.
  • Andere thorakale Organe
    1. Organe werden geerntet, in der folgenden Reihenfolge zu Sterilität der Instrumente: Thymus, Lymphknoten und Speiseröhre.
  • Gehirn
    1. Unter besonderen Umständen müssen das Gehirn für die sterile Kultur geerntet werden.
    2. Das Gehirn wird zuletzt geerntet, nachdem jedes andere Organ ernten.
    3. In Fällen, wo das Gehirn ist das einzige Organ gesammelt werden, die Haut wird nicht aus dem Körper entfernt, aber stattdessen ein Einschnitt erfolgt in den Nacken und erstreckte sich entlang der Mittellinie von der dorsalen zervikalen Bereich bis zur Spitze der Nase ist.
    4. Nach dem Ziehen der Haut Weg den Schädel seitlich, die freiliegende Knochen ist mit 70 % Alkohol getränkt und die verschmutzte Top Handschuhe werden entfernt.
    5. Mit einem engagierten sterile Gehirn Ernte Schere, machen Sie einen Schnitt durch die Wirbelsäule an der Basis des Schädels.
    6. Den Schädel zu öffnen, indem man den Punkt der Schere in das Foramen Magnum und schneiden entlang der Mittellinie.
    7. Verwenden Sie das flache Ende der Schere Klinge, um das Scheitelbein vom Gehirn Hebel.
    8. Die Nerv-Anhänge am Hirnstamm und die Optik Chiasmus unterhalb des Gehirns mit der geschlossenen Spitze der Daumen Zange vorsichtig zu stören.
    9. Schieben Sie in ähnlicher Weise die geschlossene Zange anterior unterhalb des Gehirns und brechen Sie die Anlagen an die olfaktorischen Birnen.
    10. Das Gehirn kann dann vom Schädel in steriles Medium gelöscht werden.
    11. Bei der Ernte von Gehirn einerseits unsterilen gelten als es die Haut vor den Schädel unter dem Kinn greift auf den Kopf zu stabilisieren, während der Schädel geschnitten wird reflektiert und das Gehirn entfernt.
  • Haut
    1. Milch-Gewebe
      1. Milch-Gewebe wird von der Spitze des Brustbeins an das Manubrium festgestellt, dass die Geschlechtsöffnung auf der ventralen Oberfläche und erstreckt sich seitlich auf beiden Seiten beinahe auf der dorsalen Oberfläche an den Hüften und Schultern berührt.
      2. Untersuchen Sie das Milch-Gewebe zu Massen, Verfärbung oder Auffälligkeiten suchen. Schwangere oder stillende Frauen Milch-Gewebe Volumen erhöht haben, und Milch vorhanden sein.
      3. Exzision der Milchdrüsen erfordert greifen den Rand der Drüse mit Daumen-Zange und mit stumpfe Dissektion, um Anhänge auf der Haut zu lösen. Sobald die Drüse von der Haut getrennt wurde, kann Iris-Schere, schneiden Sie die restlichen Anhänge verwendet werden.
      4. Genießen Sie die Oberflächen mit 70 % Alkohol und beginnt die Ernte der Gewebe mit einem neuen Satz von sterilen Instrumenten.
      5. Die geerntete Gewebe wird mit steriler Kochsalzlösung vor dem einsetzen es in Kulturmedium gespült.
    2. Subkutane Tumoren
      1. Oftmals Tumorzellen sind Tiere immer wieder eingepflanzt, und dann die daraus resultierenden Tumor geerntet wird, um die Tumor-Zell-Linie zu erhalten.
      2. Es ist unerlässlich, dass sterile Gewebe Ernte von subkutanen Tumoren vor der Verletzung der Integrität der Haut durchgeführt werden.
      3. Wenn die Masse abgeschliffen wurde oder nekrotische, das Gewebe gesammelt werden nicht von guter Qualität und kann nicht steril sein.
      4. Körper ist positioniert, um den gewünschten Bereich zu setzen. Schneiden Sie die Haut ist an einer Seite des Tumors.
      5. Darüber nachdenken Sie die Haut um den Tumor zu entlarven. Legen Sie die Haut-Instrumente zur Seite und genießen Sie die exponierten Geweben mit 70 % Alkohol.
      6. Mit neuen sterilen Instrumenten die Masse aus der zugrunde liegenden Anlagen zu sezieren und Blutgefäße Fütterung der Mass zu trennen.
      7. Der Tumor wird dann in Kulturmedium gelegt.
  • Viele Experimente fordern Ansammlung von Zellen aus dem ausgeschnittenen Gewebe. In solchen Fällen ist es unerlässlich, dass das Gewebe Ernte Verfahren auf sterile Weise durchgeführt werden. Der Einsatz von Zelllinien und Gewebekulturen, die ihren Ursprung in Versuchstieren ermöglicht viele Experimente durchgeführt in Vitro, Whichin wiederum reduziert den tierischen Einsatz in der Forschung.

    In diesem Video diskutieren wir die aseptische Methode zur Ernte allgemein entnommenen Organe von Labortieren. Und danach wird durch eine kurze Übersicht über ein paar Beispiel-Experimente beschäftigen diese sterilen Technik, unterschiedliche Forschungsziele zu erreichen.

    Beginnen wir mit der prepping Schritte erforderlich, um die Sterilität der Raum, Instrumente und Personal in tierischem Gewebe Ernte zu gewährleisten.

    Dieser Vorgang erfolgt in einem Laminar-Flow-Haube. Vor dem Prozess der Haube Lüfter sollte für mindestens 15 Minuten laufen und das Gebiet sollte mit 70 % Alkohol desinfiziert werden. Als nächstes legen Sie einige Papiertücher in der Haube und mit 70 % igem Ethanol nass. Danach laden Sie die sterile Ausrüstung und durch die Reihenfolge, in der jedes Instrument soll, in der Regel von links nach rechts verwendet werden, zu organisieren. Dies ermöglicht den Workflow in einer unidirektionalen Weise verhindert versehentliche Kontamination von Schlachtkörpers auftreten.

    Es wird empfohlen, ein unsterilen Techniker anwesend, um den sterilen Techniker unterstützt werden. Beide Operatoren müssen eine Maske und ein bouffant tragen. Der sterile Techniker muss eine sterile Kleid und zwei Paare von sterilen OP-Handschuhen don. Beachten Sie, dass das Kleid und Handschuhe die Handgelenke um zu verhindern, das Vergießen der Hautzellen in der geöffneten Körperhöhle, Petrischalen oder sterilen Medien abdecken müssen.

    Die unsterilen Person öffnet sterilen Instrument Paket ohne Berührung der inneren Oberfläche, so dass die sterile Person das Tool aseptisch entfernen kann. Zu guter Letzt der unsterilen Techniker euthanizes das Tier, legt den Kadaver auf die Papiertücher und saugt es komplett mit 70 % Alkohol, so dass die sterile Person mit die Ernte beginnen kann.

    Zunächst prüfen wir die Gewinnung von Abdominal-Organe, wie Milz, Leber, Nieren, Eierstöcke und Hoden.

    Unter Verwendung eines Satzes von sterile Schere und Zange machen eine horizontale in der Haut nur anterior der Vorhaut bei Männern und die Beckenknochen bei Frauen Schnitt. Durchtrennung der Bauchmuskulatur zu vermeiden. Als nächstes legen Sie Ihren Daumen unter dem Schnitt und erfassen Sie der kranialen Rand des Schnittes zu. Mit der anderen Hand, gegenhalten der hinteren Gliedmaßen und Schweif, und ziehen Sie die Haut in Richtung zum Kopf.

    Die Haut wird von den Körper oberhalb der hinteren Gliedmaßen losreißen und kann über den Kopf und Vorderbeine innen nach außen gedreht werden. Dies entfernt effektiv Haar Verunreinigungen, die mit der sterilen Orgel Ernte stören könnten. Dann tränken Sie den Körper wieder mit 70 % Alkohol und entfernen Sie der oberflächlichen Paar Handschuhe, die nicht mehr steril sind. Entsorgen Sie auch alle Instrumente, die auf der Haut verwendet wurden.

    Um die Milz zu ernten, positionieren Sie den Körper in rechts seitlich liegen. Die Milz sollte durch die Bauchmuskulatur sichtbar sein. Mit einer Schere um einen Schnitt direkt über der Milz zu machen, und einfahren Sie die Orgel aus der Körperhöhle sanft. Schneiden Sie die Anlagen zwischen Milz und Magen und Bauchspeicheldrüsen-Gewebe, aber vermeiden Sie Punktierung oder reißen die Orgel.

    Um alle anderen Bauchorgane zu ernten, legen Sie den Körper in dorsal liegen. Dann heben Sie und schneiden Sie die Bauchmuskulatur eine ovale Öffnung direkt über die Bauchhöhle verlassen. Um die Leber zu ernten, reflektieren Sie die Orgel kaudal von der Membran. Jetzt mit einer Schere um sorgfältig alle Membranen zwischen den beiden Strukturen zu trennen. Als nächstes machen Sie einen Schnitt senkrecht auf die Wirbelsäule durch die Blutgefäße. Heben Sie die Leber und reflektieren Sie es gegen das Zwerchfell, die Anlagen unter ihm zu visualisieren. Es werden dünne Membranen im Magen und Dünndarm die kleineren Leber Lappen zuweisen. Fassen Sie die fibrösen Knoten in der Mitte der Leber an der Unterseite und heben Sie die Orgel um die Anlagen zu finden. Nun trennen Sie die Orgel aus dem darunter liegenden Gewebe. Beachten Sie, dass die Leber empfindlich ist und kann leicht was zu übermäßige Freisetzung von Blut punktiert werden. Daher müssen sie sorgfältig behandelt werden.

    Um die Nieren zu ernten, drücke den Darm nach links, um die rechte Niere aussetzen oder nach rechts, um die linke Niere aussetzen. Jetzt mithilfe der Zange Messer um unterhalb der Niere und mit einer Schere geschnitten unter die Zange, die Orgel aus dem Körper entfernen zu erfassen.

    Um die Eierstöcke zu ernten, bewegen Sie den Darm cranially, die Gebärmutter zu visualisieren. Folgen Sie links und rechts uterine Hörner zu den Eierstöcken. Dies sind kleine Organe und bei älteren Tieren können sie in Fett eingebettet werden. Schieben Sie die Zange unter dem Eierstock aus dem Körper zu isolieren und schneiden Sie es frei von Fett und die Eileiter.

    Bei Männern um Hoden entfernen, sanft inguinalen Fettpolster und herausziehen Sie Körpertiefe. Dies zieht die Hoden aus dem Hodensack. Sobald sie sichtbar werden, schneiden Sie die Anlagen auf dem Hodensack und der Samenleiter, diese Strukturen aus dem Körper zu befreien.

    Als nächstes wollen wir lernen, wie man thorakalen Organe, wie Herz und Lunge zu ernten. Herz und Lunge werden am leichtesten zusammen entfernt. Um der Brusthöhle zu öffnen, indem man das Tier in dorsal liegen beginnen. Zunächst fassen Sie und heben Sie das Xiphoid Prozeß. Dann machen Sie einen Schnitt durch die Bauchmuskulatur nur kaudalen an den Rippen. Erweitern Sie den Schnitt entlang der unteren Kurve des Brustkorbes auf beiden Seiten, Freilegung der Membran.

    Als nächstes stechen Sie das Zwerchfell indem man ein kleines in den Brustkorb an den seitlichen Punkt auf jeder Seite möglich geschnitten. Dann schneiden Sie die Membran von den Rippen. Heben Sie nun die Rippen an der Xiphoid der thorakalen Organe zu visualisieren. Erweitern Sie den seitlichen Schnitt an die Spitze des Brustbeins auf beiden Seiten um die Truhe zu öffnen. Legen Sie die Zange senkrecht zur Trachea und erfassen Sie die Luftröhre fest. Nun, mit einer Schere, machen Sie einen senkrechten Schnitt nur anterior der Zange. Dies sollte die Luftröhre und die Speiseröhre trennen. Ohne lösen den Griff auf die Luftröhre, kaudal heben Sie an und schnippeln Sie Anhänge der Lunge an die Wirbelsäule Oberfläche in den Brustkorb. Weiter, bis Sie in der Lage, das Herz und die Lunge frei von der Brusthöhle zu heben.

    Nur das Herz zu entfernen, heben die Orgel und schneiden Sie vorsichtig durch den Herzbeutel Sac. Als nächstes halten Sie die Aorta mit der Zange und machen Sie einen Schnitt distal in die Zange. Trennen Sie dann die vordere Hohlvene, pulmonalen Arterien und Venen. Danach sollten Sie das Herz frei von der Brusthöhle heben können.

    Nun, betrachten wir das Verfahren der Ernte des Gehirns mit aseptischen Technik. In Fällen, wo das Gehirn ist das einzige Organ erhoben werden, sind die prepping Schritte identisch.

    Um die Ernte zu beginnen, sättigen Sie den Körper mit Alkohol zu und Streifen Sie die Haut vom Körper als vor - und über den Schädel. Dies ermöglicht alles von diesem Punkt vorwärts steril. Dann, sättigen Sie, ist das Tier wieder mit Alkohol, entfernen Sie die äußeren Handschuhe und entsorgen Sie der Instrumente auf der Haut verwendet. Jetzt machen Sie einen Schnitt in den Nacken und reichen Sie es entlang der Mittellinie von der dorsalen zervikalen Bereich bis zur Spitze der Nase.

    Jetzt, mit einem engagierten sterile Gehirn Ernte Schere, machen Sie einen Schnitt durch die Wirbelsäule an der Basis des Schädels. Um den Schädel zu öffnen, geben Sie den Punkt der Schere in das Foramen Magnum und schneiden Sie entlang der Mittellinie. Beachten Sie, dass während dieses Gehirn Ernte Verfahren, einerseits, nicht steril gilt, wie es die Haut vom Schädel greift wider unter dem Kinn auf den Kopf zu stabilisieren, während die sterile Hand verwendet wird, um den Schädel zu schneiden. Verwenden Sie anschließend die flache Kante des Blatts Schere das Scheitelbein vom Gehirn Hebel. Und mit dem Spatel vorsichtig die Nerv-Anhänge am Hirnstamm und die Optik Chiasmus unterhalb des Gehirns stören. Schließlich schieben Sie die geschlossene Zange anterior und brechen Sie die Anlagen an die olfaktorischen Birnen. Und das Gehirn kann dann vom Schädel direkt in den sterilen Medien gelöscht werden.

    Jetzt, wo wir die Grundlagen in sterilen Gewebe Ernte überprüft haben, sprechen wir über einige der vielen Anwendungen dieses Verfahrens in der biomedizinischen Forschung.

    Neuronale Stammzellen Forscher verwenden sterile Erntetechnik, um Gewebe aus neonatalen Gehirn der Maus, um diese Zellen in Vitrowachsen zu extrahieren. Dies ermöglicht ihnen, die Untersuchung der Rolle von neuronalen Stammzellen in Entwicklung und Tumorprogression.

    Ein weiteres aktives Gebiet der Forschung, die Gewebe Ernte beinhaltet ist metabolic profiling, die beinhaltet, Studium der Physiologie der Gewebe durch die Analyse der verschiedenen Stoffwechselprodukte in einer Probe. In diesem Beispiel Wissenschaftler, aseptische Technik, Wildtyp und keimfreie Mäuse Leberbiopsien abgeholt und magnetischen Kernresonanz-Spektroskopie oder NMR, verwendet, um den Unterschied in der Leber metabolischen Profils von zwei Tierpopulationen zu erhellen.

    Zu guter Letzt führen Immunologen oft sterilen Gewebe Ernte um die Ausbreitung der Infektion zu untersuchen. In diesem besonderen Experiment führten Forscher intratracheale Injektion von Bakterien Pseudomonas Aeruginosa , chronische Lungenentzündung zu induzieren.

    Im Anschluss daran Tiere wurden eingeschläfert und Lunge wurden extrahiert mit aseptischen Technik die bakterielle Belastung bei 3, 7, 14 und 28 Tage nach der Infektion zu bestimmen.

    Sie haben nur Jupiters Video auf Ernte Gewebe von Labortieren mit aseptischen Technik angesehen. Sie haben nun ein besseres Gefühl für die Schritte, die Sie ergreifen müssen, um sicherzustellen, dass Sterilität während der Ernte erhalten bleibt. Und Sie sollten in der Lage, die thorakalen und abdominalen Organe und Gehirn von diesen Tieren zu extrahieren, ohne Schaden anzurichten, um das Gewebe sein. Wie immer vielen Dank für das ansehen!

    Summary

    Obwohl viele der Verfahren für sterile Orgel Ernte ein standard Autopsie ähneln, ist der Einsatz von steriler Technik unabdingbar für Gewebe mit Wert für experimentelle Verfahren, darunter Ernte Zellen aus dem ausgeschnittenen Gewebe. Profilerstellung oder das Sammeln von RNA aus Gewebe kann beeinträchtigt werden, wenn Sterilität nicht gepflegt ist.

    References

    1. Russel, W.M.S. and Burch, R.L. 1959. The Principles of Humane Experimental Technique. Methuen: London.
    2. Petucci, C., Rojas-Betancourt, S., and Gardell, S.J. 2012. Comparison of tissue harvest protocols for the quantitation of acylcarnitines in mouse heart and liver by mass spectrometry. Metabolomics. 8.784-792.
    3. Parkinson, C.M., O'Brien, A., Albers, T.M., Simon, M.A., Clifford, C.B., and Pritchett-Corning, K.R. 2011. Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice. 54. e2966. 1-7.

    1. Vorbereitung

    1. Häufig verwendete Materialien umfassen 70 % Alkohol in eine Spritzflasche, sterile 20-25 g-Nadeln, zwei Packungen mit sterilen Instrumenten der Iris-Schere und Daumen Zange (eine für die Haut) und eine für den inneren Geweben, Papierhandtücher, sterile Chirurgen Handschuhe, sterile petri Gericht, steriles Medium und sterile Kochsalzlösung.
    2. Die Haube-Fan sollte für mindestens 15 Minuten vor dem Eingriff ausgeführt werden, und es sollte mit 70 % Alkohol desinfiziert werden.
    3. Wenn die Haube mit einer UV-Lampe Sterilisation ausgestattet ist, kann es verwendet werden, weiter die Arbeitsfläche desinfizieren.
    4. Saubere Handschuhe sind für den Aufbau der Haube getragen. Das Gerät wird in der Haube in der Reihenfolge geladen in dem sie, in der Regel von links nach rechts verwendet werden. Dies ermöglicht die Arbeit in einem unidirektionalen Workflow, verhindern, dass schmutzige Gegenstände verunreinigen saubere Elemente durchgeführt werden. Dieses schützt die geernteten Geweben oder Organen vor unbeabsichtigten Kontamination aus der Tierkadaver.
    5. Die sterilen Instrument-Packs sind geöffnet, unter Beachtung den sterilen Innenraum der Pakete. Um Sterilität zu gewährleisten, wird das Pack in die Mitte des Tisches gelegt, und jede Klappe ohne Kreuzung über den sterilen Bereich oder der Innenseite der Packung geöffnet. Die unsterilen Person eröffnet die erste obere Klappe indem reflektiert es Weg für ihn / sie. Die seitlichen Klappen werden dann mit beide Hände-One auf jede Klappe geöffnet- und ziehen sie aus der Packung. Die letzte Klappe wird dann in Richtung der Person Öffnen der Packs, kümmert sich um zu vermeiden, berühren eines der inneren Oberflächen der Packung gezogen.
    6. Legen Sie die Papiertücher in der Haube, und befeuchten Sie sie mit Alkohol.
    7. Die unsterilen Person werden die Tiere einschläfern.
    8. Die sterile Person trägt zwei Sätze von sterilen OP-Handschuhe.
    9. Die unsterilen Person legt den Kadaver auf die Papiertücher und völlig saugt die Karkasse mit 70 % Alkohol.
    10. Mit einem Satz von sterile Schere und Pinzette, machen Sie einen horizontalen Schnitt in der Haut nur anterior der Vorhaut (bei Männern) oder des Beckenknochens (bei Frauen). Durchtrennung der Bauchmuskulatur zu vermeiden.
    11. Die Instrumente beiseite.

    (2) Ernte Gewebe

    1. Machen Sie einen kleinen Schnitt nur anterior das Becken bei Frauen und über die Vorhaut bei Männern.
    2. Legen Sie den Daumen unter dem Schnitt und erfassen Sie der kranialen Rand des Schnittes zu. Mit der anderen Hand sicher halten Sie den hinteren Gliedmaßen und Rute und ziehen Sie die Haut in Richtung zum Kopf.
    3. Die Haut wird von den Körper oberhalb der hinteren Gliedmaßen losreißen und kann über den Kopf und Vorderbeine innen nach außen gedreht werden. Dies entfernt effektiv Haar Verunreinigungen während der Orgel Ernte.
    4. Genießen Sie den Körper wieder mit 70 % Alkohol, und entfernen Sie der oberflächlichen Paar Handschuhe, die nicht mehr steril sind.
    5. Öffnen Sie die Bauchhöhle mit sterilen Instrumenten.
      1. Milz
        1. Um die Milz zu ernten, ist der Körper im rechten seitlichen liegen aufgestellt.
        2. Die Milz kann durch die Bauchmuskulatur visualisiert werden.
        3. Ein Scherenschnitt erfolgt direkt über die Milz.
        4. Die Milz ist sanft aus der Körperhöhle eingefahren.
        5. Wenn alle Anlagen zwischen Milz, Magen und Bauchspeicheldrüsen-Gewebe zu schneiden, zu vermeiden Punktierung oder reißen die Orgel.
      2. Leber
        1. Um andere Bauchorgane zu ernten, steht der Körper dorsal liegen.
        2. Die Bauchmuskulatur ist gehoben und wegschneiden, eine ovale Öffnung direkt über die Bauchhöhle verlassen.
        3. Nach Freilegung der Bauchhöhle, spiegeln Sie die Leber kaudal von der Membran.
        4. Trennen Sie sorgfältig jede Befestigung der Leberzellkrebs an der Membran Membranen.
        5. Machen Sie einen Schnitt senkrecht auf die Wirbelsäule durch die Blutgefäße sichtbar zwischen der Leber und des Zwerchfells.
        6. Heben Sie die Leber und reflektieren Sie es gegen das Zwerchfell, die Anlagen unter ihm zu visualisieren.
        7. Es werden dünne Membranen anbringen die kleinere Lappen der Leber, Magen und Dünndarm, die unterbrochen werden müssen.
        8. Fassen Sie die fibrösen Knoten in der Mitte der Leber an seiner Unterseite, und heben Sie die Orgel um die Anlagen zu finden. Trennen Sie die Leber von der zugrunde liegenden Organen und Geweben.
        9. Beachten Sie, dass die Leber empfindlich ist und leicht durchstoßen werden kann, wodurch die Freisetzung von Blut; Daher müssen sie sorgfältig behandelt werden.
      3. Nieren
        1. Schieben Sie nach Freilegung der Bauchhöhle den Darm auf der linken Seite die rechte Niere zu visualisieren, oder nach rechts, um die linke Niere zu visualisieren.
        2. Um die Niere zu entfernen, verwenden Sie Zange Sägeblätter, um unterhalb der Niere, die Orgel aus dem Körper zu isolieren zu erfassen. Schneiden Sie mit einer Schere oder einem Skalpellklinge, die Niere vom Körper weg. Machen Sie den Schnitt unter der Zange zur Vermeidung von Schäden der Niere.
        3. Sobald die Niere entfernt wird, kann Fett aus der Orgel getrimmt werden.
      4. Eierstock
        1. Bewegen Sie nach Freilegung der Bauchhöhle den Darm cranially, die Gebärmutter zu visualisieren.
        2. Folgen Sie links und dann rechts, Hörner der Gebärmutter zu den Eierstöcken.
        3. Die Eierstöcke sind klein. Bei älteren Tieren können sie in Fett eingebettet sein.
        4. Schieben Sie die Zange unter der Fruchtknoten, aus dem Körper zu isolieren, und schneiden Sie es frei von Fett und die Eileiter.
      5. Hoden
        1. Nach der Eröffnung der Bauchhöhle, sanft inguinalen Fettpolster und herausziehen Sie es anterior.
        2. Dies zieht die Hoden aus dem Hodensack.
        3. Sobald die Hoden ausgesetzt ist, schneiden Sie die Anlagen auf dem Hodensack und der Samenleiter aus dem Körper zu befreien.
        4. Dies geschieht für jeden Hoden.
    6. Der Brusthöhle wird geöffnet, um die thorakalen Organe entfernen
      1. Der Körper befindet sich im dorsalen liegen. Es ist unerlässlich, dass die Haut auch über dem Kopf niederschlagen, wenn Organe der Brusthöhle geerntet werden.
      2. Fassen Sie das Xiphoid Prozeß und Aufzug ermöglichen einen Schnitt durch die Bauchmuskulatur nur kaudalen an den Rippen. Erweitern Sie den Schnitt entlang der unteren Kurve des Brustkorbes auf beiden Seiten. Dies ermöglicht die Visualisierung der Membran.
      3. Punktion der Membran durch ein kleines in den Brustkorb an den seitlichen Punkt schneiden Sie auf jeder Seite möglich machen. Schneiden Sie die Membran von den Rippen.
      4. Heben Sie die Rippen am Xiphoid der thorakalen Organe zu visualisieren.
      5. Den seitliche Schnitt an die Spitze des Brustbeins auf beiden Seiten zu erweitern, und öffne die Truhe.
      6. Herz und Lunge werden am leichtesten zusammen entfernt.
        1. Legen Sie die Zange senkrecht zur Trachea, und fassen Sie die Luftröhre fest.
        2. Mit der Schere, machen Sie einen Schnitt senkrecht zur Trachea nur anterior der Zange. Dieser Schnitt sollte die Luftröhre und die Speiseröhre trennen.
        3. Ohne den Griff auf die Luftröhre lösen, heben Sie die Luftröhre bis kaudal.
    Schneiden Sie alle Anhänge der Lunge an die Wirbelsäule Oberfläche in den Brustkorb.
  • Die Speiseröhre müssen geschnitten werden, um das Herz und die Lunge frei von der Brusthöhle heben zu können.
  • Herz nur
    1. Heben Sie das Herz, und schneiden Sie vorsichtig durch den Herzbeutel Sac.
    2. Die Aorta ist an der kranialen Aspekt des Herzens auf das Tier links.
    3. Machen Sie Sie die Aorta mit der Zange halten, einen Schnitt distal an der Zange, einen Einfluß auf die Aorta und Herzen behalten.
    4. Die Aorta zu erfassen, wie Sie die vorderen Vena Cava und pulmonalen Arterien und Venen zu trennen.
    5. Heben Sie das Herz frei von der Brusthöhle durch die Aorta Arterie.
  • Andere thorakale Organe
    1. Organe werden geerntet, in der folgenden Reihenfolge zu Sterilität der Instrumente: Thymus, Lymphknoten und Speiseröhre.
  • Gehirn
    1. Unter besonderen Umständen müssen das Gehirn für die sterile Kultur geerntet werden.
    2. Das Gehirn wird zuletzt geerntet, nachdem jedes andere Organ ernten.
    3. In Fällen, wo das Gehirn ist das einzige Organ gesammelt werden, die Haut wird nicht aus dem Körper entfernt, aber stattdessen ein Einschnitt erfolgt in den Nacken und erstreckte sich entlang der Mittellinie von der dorsalen zervikalen Bereich bis zur Spitze der Nase ist.
    4. Nach dem Ziehen der Haut Weg den Schädel seitlich, die freiliegende Knochen ist mit 70 % Alkohol getränkt und die verschmutzte Top Handschuhe werden entfernt.
    5. Mit einem engagierten sterile Gehirn Ernte Schere, machen Sie einen Schnitt durch die Wirbelsäule an der Basis des Schädels.
    6. Den Schädel zu öffnen, indem man den Punkt der Schere in das Foramen Magnum und schneiden entlang der Mittellinie.
    7. Verwenden Sie das flache Ende der Schere Klinge, um das Scheitelbein vom Gehirn Hebel.
    8. Die Nerv-Anhänge am Hirnstamm und die Optik Chiasmus unterhalb des Gehirns mit der geschlossenen Spitze der Daumen Zange vorsichtig zu stören.
    9. Schieben Sie in ähnlicher Weise die geschlossene Zange anterior unterhalb des Gehirns und brechen Sie die Anlagen an die olfaktorischen Birnen.
    10. Das Gehirn kann dann vom Schädel in steriles Medium gelöscht werden.
    11. Bei der Ernte von Gehirn einerseits unsterilen gelten als es die Haut vor den Schädel unter dem Kinn greift auf den Kopf zu stabilisieren, während der Schädel geschnitten wird reflektiert und das Gehirn entfernt.
  • Haut
    1. Milch-Gewebe
      1. Milch-Gewebe wird von der Spitze des Brustbeins an das Manubrium festgestellt, dass die Geschlechtsöffnung auf der ventralen Oberfläche und erstreckt sich seitlich auf beiden Seiten beinahe auf der dorsalen Oberfläche an den Hüften und Schultern berührt.
      2. Untersuchen Sie das Milch-Gewebe zu Massen, Verfärbung oder Auffälligkeiten suchen. Schwangere oder stillende Frauen Milch-Gewebe Volumen erhöht haben, und Milch vorhanden sein.
      3. Exzision der Milchdrüsen erfordert greifen den Rand der Drüse mit Daumen-Zange und mit stumpfe Dissektion, um Anhänge auf der Haut zu lösen. Sobald die Drüse von der Haut getrennt wurde, kann Iris-Schere, schneiden Sie die restlichen Anhänge verwendet werden.
      4. Genießen Sie die Oberflächen mit 70 % Alkohol und beginnt die Ernte der Gewebe mit einem neuen Satz von sterilen Instrumenten.
      5. Die geerntete Gewebe wird mit steriler Kochsalzlösung vor dem einsetzen es in Kulturmedium gespült.
    2. Subkutane Tumoren
      1. Oftmals Tumorzellen sind Tiere immer wieder eingepflanzt, und dann die daraus resultierenden Tumor geerntet wird, um die Tumor-Zell-Linie zu erhalten.
      2. Es ist unerlässlich, dass sterile Gewebe Ernte von subkutanen Tumoren vor der Verletzung der Integrität der Haut durchgeführt werden.
      3. Wenn die Masse abgeschliffen wurde oder nekrotische, das Gewebe gesammelt werden nicht von guter Qualität und kann nicht steril sein.
      4. Körper ist positioniert, um den gewünschten Bereich zu setzen. Schneiden Sie die Haut ist an einer Seite des Tumors.
      5. Darüber nachdenken Sie die Haut um den Tumor zu entlarven. Legen Sie die Haut-Instrumente zur Seite und genießen Sie die exponierten Geweben mit 70 % Alkohol.
      6. Mit neuen sterilen Instrumenten die Masse aus der zugrunde liegenden Anlagen zu sezieren und Blutgefäße Fütterung der Mass zu trennen.
      7. Der Tumor wird dann in Kulturmedium gelegt.
  • Viele Experimente fordern Ansammlung von Zellen aus dem ausgeschnittenen Gewebe. In solchen Fällen ist es unerlässlich, dass das Gewebe Ernte Verfahren auf sterile Weise durchgeführt werden. Der Einsatz von Zelllinien und Gewebekulturen, die ihren Ursprung in Versuchstieren ermöglicht viele Experimente durchgeführt in Vitro, Whichin wiederum reduziert den tierischen Einsatz in der Forschung.

    In diesem Video diskutieren wir die aseptische Methode zur Ernte allgemein entnommenen Organe von Labortieren. Und danach wird durch eine kurze Übersicht über ein paar Beispiel-Experimente beschäftigen diese sterilen Technik, unterschiedliche Forschungsziele zu erreichen.

    Beginnen wir mit der prepping Schritte erforderlich, um die Sterilität der Raum, Instrumente und Personal in tierischem Gewebe Ernte zu gewährleisten.

    Dieser Vorgang erfolgt in einem Laminar-Flow-Haube. Vor dem Prozess der Haube Lüfter sollte für mindestens 15 Minuten laufen und das Gebiet sollte mit 70 % Alkohol desinfiziert werden. Als nächstes legen Sie einige Papiertücher in der Haube und mit 70 % igem Ethanol nass. Danach laden Sie die sterile Ausrüstung und durch die Reihenfolge, in der jedes Instrument soll, in der Regel von links nach rechts verwendet werden, zu organisieren. Dies ermöglicht den Workflow in einer unidirektionalen Weise verhindert versehentliche Kontamination von Schlachtkörpers auftreten.

    Es wird empfohlen, ein unsterilen Techniker anwesend, um den sterilen Techniker unterstützt werden. Beide Operatoren müssen eine Maske und ein bouffant tragen. Der sterile Techniker muss eine sterile Kleid und zwei Paare von sterilen OP-Handschuhen don. Beachten Sie, dass das Kleid und Handschuhe die Handgelenke um zu verhindern, das Vergießen der Hautzellen in der geöffneten Körperhöhle, Petrischalen oder sterilen Medien abdecken müssen.

    Die unsterilen Person öffnet sterilen Instrument Paket ohne Berührung der inneren Oberfläche, so dass die sterile Person das Tool aseptisch entfernen kann. Zu guter Letzt der unsterilen Techniker euthanizes das Tier, legt den Kadaver auf die Papiertücher und saugt es komplett mit 70 % Alkohol, so dass die sterile Person mit die Ernte beginnen kann.

    Zunächst prüfen wir die Gewinnung von Abdominal-Organe, wie Milz, Leber, Nieren, Eierstöcke und Hoden.

    Unter Verwendung eines Satzes von sterile Schere und Zange machen eine horizontale in der Haut nur anterior der Vorhaut bei Männern und die Beckenknochen bei Frauen Schnitt. Durchtrennung der Bauchmuskulatur zu vermeiden. Als nächstes legen Sie Ihren Daumen unter dem Schnitt und erfassen Sie der kranialen Rand des Schnittes zu. Mit der anderen Hand, gegenhalten der hinteren Gliedmaßen und Schweif, und ziehen Sie die Haut in Richtung zum Kopf.

    Die Haut wird von den Körper oberhalb der hinteren Gliedmaßen losreißen und kann über den Kopf und Vorderbeine innen nach außen gedreht werden. Dies entfernt effektiv Haar Verunreinigungen, die mit der sterilen Orgel Ernte stören könnten. Dann tränken Sie den Körper wieder mit 70 % Alkohol und entfernen Sie der oberflächlichen Paar Handschuhe, die nicht mehr steril sind. Entsorgen Sie auch alle Instrumente, die auf der Haut verwendet wurden.

    Um die Milz zu ernten, positionieren Sie den Körper in rechts seitlich liegen. Die Milz sollte durch die Bauchmuskulatur sichtbar sein. Mit einer Schere um einen Schnitt direkt über der Milz zu machen, und einfahren Sie die Orgel aus der Körperhöhle sanft. Schneiden Sie die Anlagen zwischen Milz und Magen und Bauchspeicheldrüsen-Gewebe, aber vermeiden Sie Punktierung oder reißen die Orgel.

    Um alle anderen Bauchorgane zu ernten, legen Sie den Körper in dorsal liegen. Dann heben Sie und schneiden Sie die Bauchmuskulatur eine ovale Öffnung direkt über die Bauchhöhle verlassen. Um die Leber zu ernten, reflektieren Sie die Orgel kaudal von der Membran. Jetzt mit einer Schere um sorgfältig alle Membranen zwischen den beiden Strukturen zu trennen. Als nächstes machen Sie einen Schnitt senkrecht auf die Wirbelsäule durch die Blutgefäße. Heben Sie die Leber und reflektieren Sie es gegen das Zwerchfell, die Anlagen unter ihm zu visualisieren. Es werden dünne Membranen im Magen und Dünndarm die kleineren Leber Lappen zuweisen. Fassen Sie die fibrösen Knoten in der Mitte der Leber an der Unterseite und heben Sie die Orgel um die Anlagen zu finden. Nun trennen Sie die Orgel aus dem darunter liegenden Gewebe. Beachten Sie, dass die Leber empfindlich ist und kann leicht was zu übermäßige Freisetzung von Blut punktiert werden. Daher müssen sie sorgfältig behandelt werden.

    Um die Nieren zu ernten, drücke den Darm nach links, um die rechte Niere aussetzen oder nach rechts, um die linke Niere aussetzen. Jetzt mithilfe der Zange Messer um unterhalb der Niere und mit einer Schere geschnitten unter die Zange, die Orgel aus dem Körper entfernen zu erfassen.

    Um die Eierstöcke zu ernten, bewegen Sie den Darm cranially, die Gebärmutter zu visualisieren. Folgen Sie links und rechts uterine Hörner zu den Eierstöcken. Dies sind kleine Organe und bei älteren Tieren können sie in Fett eingebettet werden. Schieben Sie die Zange unter dem Eierstock aus dem Körper zu isolieren und schneiden Sie es frei von Fett und die Eileiter.

    Bei Männern um Hoden entfernen, sanft inguinalen Fettpolster und herausziehen Sie Körpertiefe. Dies zieht die Hoden aus dem Hodensack. Sobald sie sichtbar werden, schneiden Sie die Anlagen auf dem Hodensack und der Samenleiter, diese Strukturen aus dem Körper zu befreien.

    Als nächstes wollen wir lernen, wie man thorakalen Organe, wie Herz und Lunge zu ernten. Herz und Lunge werden am leichtesten zusammen entfernt. Um der Brusthöhle zu öffnen, indem man das Tier in dorsal liegen beginnen. Zunächst fassen Sie und heben Sie das Xiphoid Prozeß. Dann machen Sie einen Schnitt durch die Bauchmuskulatur nur kaudalen an den Rippen. Erweitern Sie den Schnitt entlang der unteren Kurve des Brustkorbes auf beiden Seiten, Freilegung der Membran.

    Als nächstes stechen Sie das Zwerchfell indem man ein kleines in den Brustkorb an den seitlichen Punkt auf jeder Seite möglich geschnitten. Dann schneiden Sie die Membran von den Rippen. Heben Sie nun die Rippen an der Xiphoid der thorakalen Organe zu visualisieren. Erweitern Sie den seitlichen Schnitt an die Spitze des Brustbeins auf beiden Seiten um die Truhe zu öffnen. Legen Sie die Zange senkrecht zur Trachea und erfassen Sie die Luftröhre fest. Nun, mit einer Schere, machen Sie einen senkrechten Schnitt nur anterior der Zange. Dies sollte die Luftröhre und die Speiseröhre trennen. Ohne lösen den Griff auf die Luftröhre, kaudal heben Sie an und schnippeln Sie Anhänge der Lunge an die Wirbelsäule Oberfläche in den Brustkorb. Weiter, bis Sie in der Lage, das Herz und die Lunge frei von der Brusthöhle zu heben.

    Nur das Herz zu entfernen, heben die Orgel und schneiden Sie vorsichtig durch den Herzbeutel Sac. Als nächstes halten Sie die Aorta mit der Zange und machen Sie einen Schnitt distal in die Zange. Trennen Sie dann die vordere Hohlvene, pulmonalen Arterien und Venen. Danach sollten Sie das Herz frei von der Brusthöhle heben können.

    Nun, betrachten wir das Verfahren der Ernte des Gehirns mit aseptischen Technik. In Fällen, wo das Gehirn ist das einzige Organ erhoben werden, sind die prepping Schritte identisch.

    Um die Ernte zu beginnen, sättigen Sie den Körper mit Alkohol zu und Streifen Sie die Haut vom Körper als vor - und über den Schädel. Dies ermöglicht alles von diesem Punkt vorwärts steril. Dann, sättigen Sie, ist das Tier wieder mit Alkohol, entfernen Sie die äußeren Handschuhe und entsorgen Sie der Instrumente auf der Haut verwendet. Jetzt machen Sie einen Schnitt in den Nacken und reichen Sie es entlang der Mittellinie von der dorsalen zervikalen Bereich bis zur Spitze der Nase.

    Jetzt, mit einem engagierten sterile Gehirn Ernte Schere, machen Sie einen Schnitt durch die Wirbelsäule an der Basis des Schädels. Um den Schädel zu öffnen, geben Sie den Punkt der Schere in das Foramen Magnum und schneiden Sie entlang der Mittellinie. Beachten Sie, dass während dieses Gehirn Ernte Verfahren, einerseits, nicht steril gilt, wie es die Haut vom Schädel greift wider unter dem Kinn auf den Kopf zu stabilisieren, während die sterile Hand verwendet wird, um den Schädel zu schneiden. Verwenden Sie anschließend die flache Kante des Blatts Schere das Scheitelbein vom Gehirn Hebel. Und mit dem Spatel vorsichtig die Nerv-Anhänge am Hirnstamm und die Optik Chiasmus unterhalb des Gehirns stören. Schließlich schieben Sie die geschlossene Zange anterior und brechen Sie die Anlagen an die olfaktorischen Birnen. Und das Gehirn kann dann vom Schädel direkt in den sterilen Medien gelöscht werden.

    Jetzt, wo wir die Grundlagen in sterilen Gewebe Ernte überprüft haben, sprechen wir über einige der vielen Anwendungen dieses Verfahrens in der biomedizinischen Forschung.

    Neuronale Stammzellen Forscher verwenden sterile Erntetechnik, um Gewebe aus neonatalen Gehirn der Maus, um diese Zellen in Vitrowachsen zu extrahieren. Dies ermöglicht ihnen, die Untersuchung der Rolle von neuronalen Stammzellen in Entwicklung und Tumorprogression.

    Ein weiteres aktives Gebiet der Forschung, die Gewebe Ernte beinhaltet ist metabolic profiling, die beinhaltet, Studium der Physiologie der Gewebe durch die Analyse der verschiedenen Stoffwechselprodukte in einer Probe. In diesem Beispiel Wissenschaftler, aseptische Technik, Wildtyp und keimfreie Mäuse Leberbiopsien abgeholt und magnetischen Kernresonanz-Spektroskopie oder NMR, verwendet, um den Unterschied in der Leber metabolischen Profils von zwei Tierpopulationen zu erhellen.

    Zu guter Letzt führen Immunologen oft sterilen Gewebe Ernte um die Ausbreitung der Infektion zu untersuchen. In diesem besonderen Experiment führten Forscher intratracheale Injektion von Bakterien Pseudomonas Aeruginosa , chronische Lungenentzündung zu induzieren.

    Im Anschluss daran Tiere wurden eingeschläfert und Lunge wurden extrahiert mit aseptischen Technik die bakterielle Belastung bei 3, 7, 14 und 28 Tage nach der Infektion zu bestimmen.

    Sie haben nur Jupiters Video auf Ernte Gewebe von Labortieren mit aseptischen Technik angesehen. Sie haben nun ein besseres Gefühl für die Schritte, die Sie ergreifen müssen, um sicherzustellen, dass Sterilität während der Ernte erhalten bleibt. Und Sie sollten in der Lage, die thorakalen und abdominalen Organe und Gehirn von diesen Tieren zu extrahieren, ohne Schaden anzurichten, um das Gewebe sein. Wie immer vielen Dank für das ansehen!

    A subscription to JoVE is required to view this article.
    You will only be able to see the first 20 seconds.

    RECOMMEND JoVE