Nach der Glykolyse in Eukaryonten gelangen die geladenen Pyruvatmoleküle über aktiven Transport in die Mitochondrien und durchlaufen drei enzymatische Reaktionen. Der Prozess wird durch einen Komplex katalysiert, den Pyruvat-Dehydrogenase-Komplex, in dem drei Enzyme eine Rolle spielen. Im ersten Schritt wird die Carboxylgruppe aus dem Pyruvat entfernt und als Kohlendioxid freigesetzt. Das gestrippte Molekül wird dann zu einer Acetylgruppe oxidiert und die freigesetzten Elektronen werden von NAD+ aufgenommen, um NADH zu bilden. Dann wird die Acetylgruppe auf das Coenzym A übertragen, wo es sich an das Schwefelatom bindet, um Acetylcoenzym A oder Acetyl-CoA zu erzeugen, das sich zur weiteren Oxidierung in den Zitronensäurezyklus hineinbewegt.