בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד לפברק tetrodes תנאי לשימוש עם מערך מיקרו הכונן, אשר תוכנן עבור הקלטות אלקטרו כרונית בחולדות. בנוסף, אנו ממחישים בשלבים הסופיים של הבנייה מיקרו הכונן מערך, הכולל חוטים הקרקע התקנה חרוט מגן.
Abstract
Tetrode, חבילה של ארבע אלקטרודות, הוכיחה להיות כלי רב ערך עבור הקלטה בו זמנית של מספר רב של נוירונים ב-vivo. ההפרש משרעת פוטנציאל הפעולה של חתימות על ערוצי tetrode מאפשר בידוד של פעילות יחידה אחת מיחידת רב אותות. היכולת לשלוט במדויק את המיקום ואת עומק stereotaxic של tetrode הוא קריטי לחקר פעילות עצבית מתואמת על פני אזורים במוח. בשילוב עם מערך מיקרו הכונן, ניתן להשיג את המיקום המדויק ושליטה יציבה של tetrodes רבים במשך ימים עד שבועות. בפרוטוקול זה, אנו מדגימים כיצד לפברק tetrodes תנאי שימוש בכלים בסיסיים וחומרים, להתקין את tetrodes לתוך מערך רב כונן tetrode עבור כרוני ב-vivo הקלטה בחולדה, להפוך חוט קשרים הקרקע למערך כונן מיקרו, ואת לצרף חרוט מגן על מערך הכונן מיקרו על מנת להגן על tetrodes מכל מגע פיזי עם הסביבה.
Protocol
1. המצאה של tetrodes בגין בניית tetrode אחד על ידי קבלת 50 ס"מ, polyimide מבודדים, Ni-chrome תיל עם ליבה בקוטר 12.5 מיקרון. מקפלים את החוט לשניים. הפעל את האצבעות לאורך צמד כדי לגרום להם להישאר ביחד. ודא זוג חוטים יש מגע טוב לאורך כל אורכו ?…
Discussion
פרוטוקול זה הוא הפרק השני של פרוטוקול חלק שני: "Micro-כונן מערך עבור כרוני ב-vivo ההקלטה." השילוב של מערך הכונן מיקרו tetrode הוא כלי רב עוצמה להשגת הקלטות סימולטני של נוירונים רבים ער, מתנהג הכנה של בעלי חיים. יש לקוות, סיפקנו לכם את כל המידע הדרוש תצטרך להתחיל או לשפר את ה…
Acknowledgements
ברצוננו להודות יוני ימאמוטו לעיצוב שלו ובנייה של מכשיר אוטומטי, ממונע מסלף tetrode המתואר בסרט. בנוסף, ברצוננו להודות לכל חברי בעבר ובהווה וילסון מעבדה על תרומתם כונן מיקרו והטכנולוגיה tetrode הפיתוח במעבדה.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Panavise
Tool
Panavise
Model 301
Holds either micro-drive array or serrated scissors
Modified Xcelite 378M Pliers
Tool
Newark
96F8903
For inserting connector board pins. To make, remove 2mm from one tip of the pliers.
Slow Cure Glue
Material
Great Planes (Champaign, IL)
GPMR6015
To glue the tetrode to the micro-drive
Gold Plating Solution
Material
Neuralynx
Sifco Selectron Gold NC
Contains gold particles for electroplating
Current Generator
Tool
World Precision Instruments
A365D-B
A.K.A. Stimulus Isolator. Used to electroplate gold solution onto electrode tips.
Impedance Meter
Tool
BAK Electronics
IMP-1 / 6662 / 2788
To check impedance of electrodes
Hot Air Gun
Tool
Steinel (Germany)
HG 3002 LCD
To fuse electrodes together to make tetrode
Accu-Tek Carbofib Tip Tweezers
Tool
Aven (Ann Arbor, MI)
18768 (Pattern 304)
For handling tetrodes
Alligator Clip
Tool
Fine Science Tools
18050-35
A.K.A. Bulldog serrefine. To clip the tetrodes together during twisting
Micro Dissecting Scissors
Tool
Biomedical Research Instruments
25-1000
For general cutting of tetrode/electrode wire
Iris Toughcut Serrated Scissors
Tool
Fine Science Tools
14058-09
For final cut of tetrodes
Teflon Coated Stainless Steel Wire
Material
A-M Systems (Carlsborg, WA)
790500
Ground wire
12.5 micron nichrome wire
Material
Kanthal Palm Coast
Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING
Polyimide coated micro-wire for making tetrodes.
Tetrode Twister
Tool
Neuralynx
Tetrode Assembly Station
Increases the speed and consistency of tetrode fabrication.
Silver Paint
Material
GC Electronics
22-023
For connecting the micro-electrode wires of the tetrode to the connector pins (see Discussion)
Nguyen, D. P., Layton, S. P., Hale, G., Gomperts, S. N., Davidson, T. J., Kloosterman, F., Wilson, M. A. Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly. J. Vis. Exp. (26), e1098, doi:10.3791/1098 (2009).