En este artículo se describe una técnica de alta resolución temporal y espacial de la imagen ópticamente movimiento de acción potencial en la superficie de los corazones de rata Langendorff perfundidos con un tinte potenciométrica (di-8-ANEPPS).
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Artículo de método
Mapeo óptico de corazones de ratas Langendorff perfundidos
En este artículo
Resumen
Resumen
Mapeo óptico de la superficie cardíaca con sensibles al voltaje tintes fluorescentes se ha convertido en una herramienta importante para investigar la excitación eléctrica en modelos experimentales que van en escala de cultivos de células de órganos de todo el
Protocolo
Parte 1: Preparar las soluciones y el sistema de corazón aislado perfundido
- En la mañana del experimento, 4,0 L de Krebs-Henseleit solución se prepara como se describió previamente [5, 6].
- 11 mmol / l 2,3-butanodiona monoxima (BDM) se disuelve en 1.0 L de Krebs-Henseleit solución decantada de la perfusión preparada en la etapa 1.1.
- Un adicional de 150 ml de Krebs-Henseleit se retira de la perfusión preparada en el paso 1.1 y se mezcla con 5 mol / l di-8-ANEPPS (diluido en un 10 mmol / L de valores disuelto en dimetilsulfóxido (DMSO)).
- Estas tres soluciones se transfiere al agua con camisa de vidrio embalses (Radnoti....
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Discusión
La extracción del corazón de ratas anestesiadas debe realizarse rápidamente para evitar la isquemia miocárdica. Si la perfusión de la isquemia o insuficiencia coronaria se produce, el corazón es probable que desarrollar arritmias y puede llegar a ser del infarto. Además, estos corazones se muestran insuficientes emisión de fluorescencia de las grabaciones de información y los análisis posteriores. Antes de cargar el medio de contraste, las células del miocardio deben ser adecuadamente preservados con solución de Krebs-H.......
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Divulgaciones
Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por el Cuidado de Animales institucional y el empleo en el Hospital de Niños de Boston.
Agradecimientos
Este trabajo es apoyado por becas de investigación de los Institutos Nacionales de Salud (HL068915; HL088206) y las contribuciones al Fondo de conducción cardiaca en el Hospital de Niños de Boston.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| CardioCMOS-SM128f | Equipo | RedShirtImaging, LLC | ||
| Software CardioPlex | Equipo | RedShirtImaging, LLC | ||
| Fuente de luz LED LUXEON 460-490 nm | Equipo | Lumileds Lighting, US, LLC, San Jose, CA 95131 USA | LXHL-PB02 | |
| Amplificador de ECG Tipo 689 Hugo Sachs Elektronik | Equipo | Harvard Apparatus | 730149 | |
| Espejo dicróico 505 nm | Equipo | Semrock | FF505-SDi01-25x36 | |
| Filtro de emisión paso alto 605 nm | Equipo | SciMedia | ||
| THT Sideways | Equipo | SciMedia | 25 BM-8 | |
| Soporte de bola miniatura | Equipo | Harvard Apparatus | BS4 73-0177 | |
| Juego de electrodos de estimulación pequeño | Equipo | Harvard Apparatus | BS4 73-0160 | |
| Plataforma de aislamiento de vibraciones BM-6 de banco | Equipo | Technology Inc., Inglewood, CA 90301 | 25 BM-6 | |
| Electrodo de ECG monopolares | Equipo | Harvard Apparatus | BS4 73-0200 | |
| Bomba peristáltica SCI 400 | Equipo | Watson-Marlow Pumps Group | 401U/D1 | |
| Bomba peristáltica MasterFlex Easy Load II | Equipo | Cole-Parmer | Modelo 77201-60 | |
| Tubo Marprene #14 | Equipo | Watson-Marlow Pumps Group | 902.0016.016 | |
| Tubo MasterFlex | Equipo | PharMed, Westlake, OH 44145 USA | 06485-25 | |
| Estimulador de pulso cuadrado S48 | Equipo | Grass Technologies | Modelo S48 | |
| Unidad de aislamiento con transformador RF SIU5 | Equipo | Grass Technologies | Modelo SIU5 | |
| Reservorio con camisa de agua de 5 litros | Equipo | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-5 | |
| Reservorio con camisa de agua de 2 litros | Equipo | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-2 | |
| Reservorio con camisa de agua de 0,5 litros | Equipo | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-0 | |
| Reservorio con camisa de agua de 0,25 litros | Equipo | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-025 | |
| Bobina de calentamiento de 10 ml | Equipo | Radnoti Glass Technology Inc. | 158822 | |
| Trampa de burbujas de conformidad | Equipo | Radnoti Glass Technology Inc. | 130149 | |
| Cánula con desconexión Luer | Equipo | Harvard Apparatus | 72-1444 | |
| Llave de paso de 3 vías, FLL a MLT, sin tapas de puerto | Equipo | Harvard Apparatus | BS4 72-2630 | |
| Termómetro con termopar | Equipo | Cole-Parmer | WU-91100-40 | |
| Microsonda flexible ultrafina serie IT | Equipo | PhysiTemp Instruments Inc., Clifton, NJ 07013 USA | IT-24P | |
| Osciloscopio Tektronix TDS 1002 | Equipo | Tektronix, Inc. | TDS 1002B | |
| Monoxima de 2,3-butano | Reactivo | Sigma-Aldrich | B0753 | |
| Clorhidrato de ketamina | Reactivo | Hospira Inc. | RL-0065 | |
| Xilacina | Reactivo | Lloyd, Inc. | LB15705A | |
| E-TOXA-CLEAN® | Reactivo | Sigma-Aldrich | E9029 | |
| Di-8-ANEPPS | Reactivo | Invitrogen | D-3167 |
Referencias
- Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. Optical imaging of the heart. Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).
- Hucker, W. J. Images in cardiovascular medicine. Optical mapping of the human atrioventricular junction. Circulation. 117 (11), 1474-147 (2008).
- Entcheva, E., Bi....
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Reimpresiones y permisos
