Summary
이 동영상은 문서 해안 해양 물 샘플을 수집 및 바이오 매스 농도, 핵산 정화, 세포 풍부, 영양 및 추적 가스 분석 등 다양한 어플 리케이션을위한 스트림을 처리하는 방법을.
Abstract
이 동영상은 문서 해안 해양 물 샘플을 수집 및 바이오 매스 농도, 핵산 정화, 세포 풍부, 영양 및 추적 가스 분석 등 다양한 어플 리케이션을위한 스트림을 처리하는 방법을. 오늘의 데모 샘플 사니치 후미에 HMS 존 스트 리클 랜드 운영의 갑판에서 수집되었다. 다목적 윈치 및 케이블 시스템 데릭 A - 프레임, Niskin와 함께 사용하거나 이동 - 플로 물 샘플링 병입니다. 전도도, 온도 및 깊이 (CTD) 센서도 기본 물의 질량을 샘플하는 데 사용됩니다. outgassing 최소화하려면, 추적 가스 샘플 먼저 수집하고 있습니다. 그런 다음, 영양분, 물 화학, 세포 카운트가 결정됩니다. 마지막으로, 바닷물은 바이오 매스 여과를 위해 수집됩니다. 단일 캐스트에 대한 설정 및 수집 시간은 215m 최대 깊이에 ~ 1.5 시간입니다. 따라서 6 시간 총 일반적으로 여기에서 설명한 컬렉션 시리즈를 완료하는 데 필요합니다.
Protocol
1 부 : 워터 콜렉션
- 깊이는 각 주조에 할당됩니다.
- 깊이는 샘플 수와 현재 캐스팅을 위해 수집하는 전체 볼륨이 결정됩니다.
- 이것은 이동 - 플로와 Niskin 병이 열려 있으며, 그들의 밸브 및 spigots이 폐쇄되는 것을 보장합니다.
- CTD는 라인의 맨 아래에 읽어와 물로 낮습니다.
- 캐스팅에서 채취한 깊은 깊이에 대한 병 먼저 CTD 후 라인에로드되며 이것은 라인이 제대로 브라켓에 장착되어 보장되고 나사가 강화됩니다.
- 메신저가 저하되기 전에 (가장 깊은 제외한) 각 병에 첨부되어 있습니다.
- 라인은 첫 번째 깊이와 다음 사이의 거리를 저하되며 한병 그런 다음로드됩니다. 그것은 20L가 여과에 대한 수집 아르 깊이에 대해, 2 12L 병 총이 떨어져 0.75 m에 대해 연속적으로로드되는 것을인지해야합니다.
- 모든 병이 달린되면, 라인은 원하는 깊이에 넣어 져서 2 분 통과 허용됩니다.
- 메신저가 아래로 전송되고 몇 분 모든 병 가까이를 보장하기 위해 전달 사용할 수 있습니다.
- 라인에 reeled하고 그들이 랙에에 와서 같이 병이 언로 드됩니다.
- DNA와 RNA에 대한 20L 샘플을 필요로 깊이 들어, 두 Niskin 병을 수집합니다. 다른이 상자 속에 든 대형 유리병에 탈진하는 동안 한 병은, 화학 매개 변수 (아래 참조) 샘플하는 데 사용됩니다. RNA는 두 번째 Niskin에서 즉시 수집됩니다. 최초의 나머지 부분도 ~ 20L 최종 볼륨을 줄 수있는 상자 속에 든 대형 유리병에 새겨 졌던 것입니다. 저해상도 샘플 물만이 1L는 무균 Nalgene 병의 여과를 위해 별도로 설정됩니다.
2 부 : 가스 샘플 모음
- 산소 샘플이 필요한 경우, 먼저 수집하고 있습니다.
- 얇은 튜브의 조각은 Niskin에 첨부된 / 이동 - 플로 삽입 및 튜브의 다른 쪽 끝을은 유리 혈청 병으로 자리를 배치됩니다.
- 혈청 병은 샘플 물로 3 번 씻어서하고, 기포가 존재하지 않는 등으로 가득차있다.
- 50μl 수은 염화물 (HgCl 2) 샘플로 공기 방울을 소개하지 않는 방식으로 혈청 병에 추가됩니다.
- 병은 고무 마개와 알루미늄 마개와 곱슬머리로 밀폐되어 있고, 다음 냉장고에서 얼음에 저장됩니다.
파트 3 : 영양소 샘플 모음
- 60 CC 주사기가 샘플 물로 씻어서입니다 (0.2 μm의)가 온라인에 연결되어 일부 물이 acrodisc을 통해 밀려있다.
- 폴리에틸렌 병은 (rinsing 때 병을 흔들) ~ 10 ML 여과 물을 3 번 씻어서입니다.
- 필터링 샘플 물은 약 병에 추가됩니다 벗어 가득.
- 예제는 냉장고에 얼음에 저장됩니다.
4 부 : 암모니아 샘플 모음
- 샘플 튜브가 샘플 물로 씻어서 있습니다.
- 샘플 튜브가 샘플 물로 완전히 채워지게된다.
- 샘플 물 5ml는 10ml의 pipet을 사용하여 밖으로 이동되며, 튜브에 물을 나머지는 폐기되고 pipet 팁에서 5ml가 샘플 튜브로 대체됩니다.
- 모든 깊이에서 샘플을 수집되고 나면 작업 암모늄 시약의 7.5ml은 각 튜브에 추가됩니다.
제 5 부 : 휴대 열거를위한 샘플 수집
- 5.4 ML 37 % 포름 알데히드를 포함하는 미리 표시 50 ML 팰컨 튜브 4 %의 최종 농도에 대한 위로 가득 차 있습니다. 주의 누설하지 않도록합니다.
파트 6 : 수소 황화물 측정 샘플 수집
- 20 % 아연 아세테이트 (Zn (O 2 CCH 3) 2)가 포함된 사전 라벨 50 ML 팰컨 튜브가 제일 첫번째로 가득 차 있습니다. 주의 누설하지 않도록합니다.
7 부 : 바이오 매스 농도에 대한 소량의 수집
- 1 리터 병은 위로 채워진다.
8 부 : 바이오 매스 농도에 대한 대량 수집
- 20 리터 carboys이 채워집니다.
파트 9 : 대표 결과
약 12 용존산소 샘플, 32-48 가스 샘플, 16 영양 샘플, 32 암모늄 샘플, 16 황화수소 샘플, 셀 카운트 16 샘플, 6 20 리터 carboys, 16 1 리터 병에 결과를 샘플링 해수의 최종 결과 및 미생물 바이오 매스를 포함하는 4 Sterivex 0.22μm 필터는 나중에 RNA와 보존.
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Discussion
전반적으로,이 샘플링 이러한 유형의에 필요한 준비와 계획의 큰 거래이므로 여행 모든 걸 정리 해 줘서 나중에 주문하고 하루 만에 물건을 얻기 위해서는 예산 이일 전에. 일반적으로, 소금물은 연동 펌프와 접촉하거나 필드 장비를 수송하는 데 사용되는 알루미늄 Zarges 상자에 오게하지 않습니다. 존중과 장비를 취급하고 오실 오랫동안 잘 수행합니다.
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Acknowledgments
우리는 해안과 열린 바다 바닷물의 낮은 산소 지역에 지속적인 연구를 지원하기위한 혁신, 브리티시 컬럼비아 기술 개발 기금과 국립 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회 (NSERC)에 대한 캐나다 재단 감사드립니다. 또한, 도스는 NSERC, 킬람와 툴라 기초 미생물 다양성과 진화에 대한 재정 지원 센터에서 장학금으로 지원했다.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| 20L Carboys | Fisher Scientific | 02-960-15 | ||
| 3/8" Tygon | Cole-Parmer | 06429-36 | ||
| Sterivex filters | Fisher Scientific | SVG010RS | ||
| Prefilter Housing Unit | AMD | 501200 | ||
| Luer Fitting | Cole-Parmer | 31507-27 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 50ml Plastic tubes | ||||
| Glass Serum Bottles | Glass Sample Collection | |||
| Septa and aluminum caps for glass serum bottles | ||||
| Hand Crimper | ||||
| 20-200ul Pipette and Tips | ||||
| Glass Tubes | Ammonium Sample Collection | |||
| 30ml Plastic Bottles | Nutrient Collection | |||
| Acrodisc Filters | EMD Millipore | |||
| 5 ml Tubes | Nitrite Sample Collection | |||
| 37% Formaldehyde | Reagent | For cell count samples | ||
| 20% Zinc Acetate | Reagent | For sulfide samples | ||
| Mercuric Chloride | Reagent | For gas samples | ||
| milliQ water | Reagent | |||
| Ammonium Working Reagent | Reagent | Borate buffer, sodium sulfite, orthophaladialdehyde | ||
| Sulfanilamide | Reagent | 5g into 450ml water and 50ml HCl | ||
| N-(1-naphthy)-ethylenediamine dihydrochloride solution | Reagent | 0.5g into 500ml water |
References
- Cline, J. D. Spectrophotometric determination of hydrogen sulfide in natural waters. Limnology & Oceanography. 14, 454-458 (1969).
- Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems. Canadian Journal of fisheries and Aquatic Science. 56, 1801-1808 (1999).
