Summary
Это видео документы методы сбора проб воды прибрежных морских и обработка их для различных приложений, включая вниз по течению концентрация биомассы, нуклеиновые кислоты очистки, сотовые изобилие, питательных веществ и следов анализ газа.
Abstract
Это видео документы методы сбора проб воды прибрежных морских и обработка их для различных приложений, включая вниз по течению концентрация биомассы, нуклеиновые кислоты очистки, сотовые изобилие, питательных веществ и следов анализ газа. Для демонстрации сегодняшней образцы были собраны с палубы HMS Джон Стрикленд, работающих в Саанич входе. А-образные вышки, с многоцелевым лебедки и кабельная система, используется в сочетании с Niskin или Go-Flo бутылки отбора проб воды. Проводимости, температуры и глубины (CTD) датчики используются также для образца основной водной массы. Чтобы свести к минимуму дегазации, следов газа образцы собраны в первую очередь. Затем, питательные вещества, химический состав воды, а также клеток определяются. Наконец, воды собираются для биомассы фильтрации. Настройка и время сбора для одного приведение ~ 1,5 часа при максимальной глубине 215 метров. Таким образом, в общей сложности 6 часов, как правило, необходимых для завершения коллекции серии описаны здесь.
Protocol
Часть 1: для сбора воды
- Глубины присваиваются каждому актеров.
- Глубины на отбор проб и общего объема должны быть собраны для текущего литых определяются.
- Он заверил, что Go-Фло и Niskin бутылки открыты, и что их клапаны и краны закрыты.
- CTD загружается на нижней линии и ниже в воду.
- Бутылки для глубокой глубине, отобранных в литых первой загружается на линии после CTD, он заверил, что линия правильно установлены в скобы и винты затянуты.
- Посланник прилагается к каждой бутылке (за исключением самых глубоких один) перед спуском.
- Линия опускается расстояние между первым глубину и затем; еще одну бутылку, затем загружены. Следует отметить, что для глубин, где 20L собираются для фильтрации, в общей сложности 2 12L бутылки загружаются последовательно около 0,75 м друг от друга.
- После того как все бутылки на линии, линии опускают на необходимую глубину и 2 минуты разрешается проход.
- Гонец направляется вниз и через несколько минут разрешено пройти, чтобы все бутылки близко.
- Линия наматывается внутри и бутылки выгружаются по мере их появления на стойках.
- Для глубин, которые требуют 20L пробы для ДНК и РНК, две бутылки Niskin собираются. Одна бутылка используется для образцов химических параметров (см. ниже), в то время как другие сливают в бутыль. РНК собирается сразу со второго Niskin. Остальная часть первой также слить в бутыль, чтобы дать ~ 20L конечного объема. Для низкого разрешения образцов только 1л воды, предназначенные для фильтрации в стерильные бутылки Nalgene.
Часть 2: сбор пробы газа
- Если кислорода образцы нужны, они собираются в первую очередь.
- Кусок тонкой трубки крепится к Niskin / Go-Flo кран, а другой конец трубки находится место в стеклянные бутылки сыворотки.
- Сыворотке бутылки промыть 3 раза пробы воды, и наполнил до краев, что нет воздушных пузырей присутствуют.
- 50 мкл хлоридом ртути (HgCl 2) будут добавлены в сыворотке бутылку так, чтобы не вводить воздушных пузырьков в пробе.
- Бутылка запечатана с резиновой пробкой и обжимается с алюминиевой крышкой, а затем хранится на льду в кулере.
Часть 3: Питательный сбор образцов
- 60 мл шприца промывают пробы воды, (0,2 мкм) прилагается в линию и немного воды выталкивается через Acrodisc.
- Полиэтиленовые бутылки промыть ~ 10 мл фильтрованной воды 3 раза (взболтайте бутылку, когда промывка).
- Фильтрованный пробы воды добавляется в бутылки, около ¾ полном объеме.
- Образец хранится на лед в холодильнике.
Часть 4: коллекции образцов Аммиак
- Пример трубы промываются пробы воды.
- Пример трубы заполняются полностью с образцом воды.
- 5 мл пробы воды берутся с помощью пипетки 10 мл, остальное вода в трубке отбрасывается и 5 мл в пипетки наконечник заменяются в пробирку.
- 7.5ml аммония рабочий раствор добавляют в каждую пробирку раз образцы из всех глубинах были собраны.
Часть 5: сбор проб для сотовых перечисления
- Предварительно меченных 50 мл Сокол пробирку, содержащую 5,4 мл 37% формальдегида доверху для конечной концентрации 4%. Уход берется не расплескать.
Часть 6: сбор проб для измерения водородного сульфида
- Предварительно меченных 50 мл Сокол трубки, содержащей 20% ацетат цинка (Zn (O 2 CCH 3) 2) заполняется до самого верха. Уход берется не расплескать.
Часть 7: Небольшая коллекция объем биомассы концентрация
- 1-литровые бутылки доверху.
Часть 8: Большая коллекция объем биомассы концентрация
- 20-литровых бутылях заполнены.
Часть 9: Представитель Результаты
Окончательные результаты отбора проб морской воды приводит к приблизительно 12 растворенные образцы кислорода, 32-48 образцов газа, 16 питательных проб, 32 пробы аммония, 16 образцов сероводорода, 16 образцов для клеток, 6 20-литровых бутылях 16, 1-литровых бутылок и 4 Sterivex 0.22μm фильтры, содержащие микробной биомассы сохранились с РНК позже.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В целом, существует большая подготовка и планирование необходимых для этого типа выборки, поэтому бюджет за 2 дня до поездки, чтобы получить вещи в порядок и потом в один прекрасный день для очистки все вверх. В общем, не давайте соленой воде вступает в контакт с перистальтического насоса или в окне алюминия Zarges использовались для перевозки полевого оборудования. Лечить оборудования с уважением и он будет выполнять в течение длительного времени в будущем.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Мы хотели бы поблагодарить Канадский фонд инноваций, знаний британской Колумбии Фонд развития и Национального наукам и инженерным исследованиям Совета (NSERC) Канады за поддержку проводимых исследований на регионах с низким уровнем кислорода в прибрежных и открытых водах океана. Кроме того, ОУПЖ была поддержана стипендии NSERC, Киллам и ТУЛА основу финансируемого Центром микробного разнообразия и эволюции.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| 20L Carboys | Fisher Scientific | 02-960-15 | ||
| 3/8" Tygon | Cole-Parmer | 06429-36 | ||
| Sterivex filters | Fisher Scientific | SVG010RS | ||
| Prefilter Housing Unit | AMD | 501200 | ||
| Luer Fitting | Cole-Parmer | 31507-27 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 1/4" Tygon tubing | Cole-Parmer | 06429-24 | ||
| 50ml Plastic tubes | ||||
| Glass Serum Bottles | Glass Sample Collection | |||
| Septa and aluminum caps for glass serum bottles | ||||
| Hand Crimper | ||||
| 20-200ul Pipette and Tips | ||||
| Glass Tubes | Ammonium Sample Collection | |||
| 30ml Plastic Bottles | Nutrient Collection | |||
| Acrodisc Filters | EMD Millipore | |||
| 5 ml Tubes | Nitrite Sample Collection | |||
| 37% Formaldehyde | Reagent | For cell count samples | ||
| 20% Zinc Acetate | Reagent | For sulfide samples | ||
| Mercuric Chloride | Reagent | For gas samples | ||
| milliQ water | Reagent | |||
| Ammonium Working Reagent | Reagent | Borate buffer, sodium sulfite, orthophaladialdehyde | ||
| Sulfanilamide | Reagent | 5g into 450ml water and 50ml HCl | ||
| N-(1-naphthy)-ethylenediamine dihydrochloride solution | Reagent | 0.5g into 500ml water |
References
- Cline, J. D. Spectrophotometric determination of hydrogen sulfide in natural waters. Limnology & Oceanography. 14, 454-458 (1969).
- Holmes, R. M., Aminot, A., Kerouel, R., Hooker, B. A., Peterson, B. J. A simple and precise method for measuring ammonium in marine and freshwater ecosystems. Canadian Journal of fisheries and Aquatic Science. 56, 1801-1808 (1999).
