Summary
Biz Amerikan ıstakoz mide stomatogastric sinir sisteminin ince diseksiyon tarif (
Abstract
Sistemleri faaliyet üretmek ve çevreye yanıt nasıl sinir anlayış hedefi, Nörobilimadamları ilgi faaliyet gösterirler ve erişilebilir ve deneysel yöntemler için uygun model sistemler açın. Amerikan ıstakoz stomatogastric sinir sistemi (STNS) (
Protocol
Istakoz, mide, bu protokolü başlamadan önce hayvan ve arkadaşı vallahi makale (Bierman ve Tobin, 2009) açıklandığı şekilde hazırlanmış olmalıdır. Aşağıda belirtilen adımları çoğunluğu bir diseksiyon mikroskop altında yapılacak.
Bölüm Commissural Ganglia I-Yalıtımlı
- Orient çanak (dudak) ön uç ve arka uç (pilor) uzak olduğu doğru.
- Çanak mümkün olduğunca düz yatıyor böylece mide tutturulmuş olduğundan emin olun.
- , Dudak, her tarafta yemek borusu aşağı pin.
- Gerekirse, brüt diseksiyonu sırasında yerleştirilen diğer iğneler yeniden düzenlemek.
- Hipodermis çıkarın.
- Hipodermis gm2/gm3 kasları yakın tut, bu kaslar anterior yönde ayırın ve yavaşça çekin.
- Herhangi bir bağlantı kırpma temel yağ hipodermis ayırın. Stomatogastric sinir sisteminin önemli bir parçası içine merkezi arter etrafında bakım arttı. Hipodermis hakkında gm1b kaslar arasındaki oturur stomatogastric ganglion 0.5 cm çapında, içinde sağlam bırakın.
- Ayrılmış hipodermis kesti.
- Altta yatan doku beynin ayırın.
- Beynin ön kısmı mide ön kısmında commissural ganglionlarda bilateral proje iki büyük commissural sinirler belirleyin.
- Bu sinirlerin bozulmadan bırakmak, forseps ile yavaşça beyin asansör ve beyin dokusunun geri kalanından ayırmak için kesmek. Stomatogastric sinir, beyin altından ve sağlam tutulmalıdır olarak bunu dikkatli olun.
- Dokuyu çevreleyen commissural ganglionlar ayırın.
- Commissural gangliyon biri commissural sinirler izleyin.
- Iyon ve oğlu tanımlanması - Bu sinirlerin sağlam kalmalıdır. Commissural ganglion dışarı yayılan birçok sinir olacak. (Iyon ve oğlu hariç) çoğu kesin, ama bir ekstra sinir diseksiyonu bitirmek yerine commissural ganglion tutun bağlı bırakın.
- Diğer commissural ganglion tekrarlayın.
- Lateralden mediale iyon ve oğlu temizleyin. Labial sinir, sinir sistemi, mide çapa gibi bırak. Özofagus ganglion iyon s kesiştiği edildi oturur. Inferior ventrikül sinir kapma ve altından kesmek için yukarı çekerek altında silebilirsiniz.
Bölüm II-Yalıtımlı Stomatogastric Ganglion (STG) ve kalan sinirler.
- STG dokuyu çevreleyen ayırın.
- STG gm1b kas ve gm2a, b kaslar arasında çalışan bir arter içinde oturur. Gm2a, b kasları yakın arter kesik ucuna arayın.
- Dvn ortaya çıkarmak için, yukarı ve anteriora arter kesik ucuna çekin. Kalan hipodermis seviyesine ulaşana kadar yukarı çekerek devam edin. Bir kez ayrılmış, kalan hipodermis dokunur seviyesine arter kesilmiş olabilir.
- Istakoz kürsüsüne bulunan flep kesti.
- Arter STG üzerindeki yağ içinde bir tünel yaptığı gözlemleyerek, arter üzerinde hipodermis yukarı kaldırın. Arter içinde bir bıçak, makas koyun ve üstündeki kas kesmek. STG yukarıda güvenli olduğundan emin olmak için kesilmiş olarak dvn görebilirsiniz kontrol edin. Arter aşağıdaki, anteriorda kesme devam edin. STG üzerinde kesim gibi, kas içine STG ve dalış aşağı stn anteriora yayılan görmek mümkün olacaktır. Anteriora STG yukarıdaki kas tamamen ayırmak için kesme devam edin.
- Herhangi bir doku stn temizleyin.
- Çevreleyen doku AGN ayırın. (AGN kayıt düşünmüyorsanız bile, sağlam sinir ganglion hücre içi kayıtlar için aşağı pin bir kısmı ihtiyacınız olacaktır.)
- AGN lar daha iyi görmek için, kalan hipodermis ve altta yatan kas ince bir tabaka kaldırın.
- STG Sadece arka dvn her iki tarafında yağ ve kas karanlık bir tünel tanımlar.
- Tünel içinde bir makas bıçak sopa ve sinir üzerindeki doku kesmek. Izole etmek için, sinir, yanal kesme devam edin. (Birkaç milimetre ganglion iğneleyerek için yeterli, ama maruz kayıt planlıyorsanız AGN en az 5 mm.)
- AGN innervates kas bağlantıları keserek ayırın.
- Diğer AGN izole etmek için, diğer tarafta tekrarlayın.
- Hem AGN s diseke edildikten sonra, mide STG bağlanan tüm kas ve doku kesti.
- Mvn yalıtın s LVN dallanma ve yağ altında yanal çaprazlayan küçük sinirlerin iki taraflı bir çift vardır.
- Ya yakınlarında, dvn bir tarafta yağ ile kesmek için makas ya da iki forseps iki LVN s içine dallarına Burada çok mvn s ve kesme riski olmaz.
- Yağ tabakası yukarı kaldırın ve küçük mvn altında belirlemek. Bu sinirler yanal gm1b kasların sadece posterior medial çalıştırın.
- Mvn üzerinde yağ tabakası, sinir şimdi bu yüzden karışık girmeyeceğim zedelemeden çıkarın. Diseksiyon sonunda mide kapalı lateral ucu.
- Diğer mvn izole etmek için, diğer tarafta bu işlemi tekrarlayın.
- LVN ve posterior sinirler izole edin.
- LVN s şube yanal dvn kapalı, yukarıdaki yağ keserek bir LVN takip nerede başlatılıyor. Hazırlık bağlı olarak, bazen, sinir üzerindeki tüm yağ tabakası çıkardı olabilir.
- Psn dalları noktaya kadar LVN ifşa devam edin.
- Pyn ayırın.
- Pyn bulup posteriora pilorusta üzerinde seyahat eden bir sinir olduğunu.
- Bu bölgeyi kapsayan ince bir zar çıkarın.
- Pyn bağlı pilorusta küçük bir bölümü, kesim pyn kesin.
- Pilorik bölümde yavaşça kaldırın ve PDN verdiği şube ulaşana kadar, pyn her iki tarafta doku kesip .
- PDN ayırın.
- PDN bulup pilorik dilatör kas sinir posteriora seyahat.
- Pilorik dilatör kas PDN bağlı küçük bir bölümünde, kesin.
- Yavaşça, pilorik dilatör kas bölümü kaldırın pyn verdiği şube ulaşana kadar PDN her iki tarafında doku kesip.
- LVN pyn ve PDN bağlayan ventral LVN, tecrit edin.
- Pyn ve PDN ventral LVN bağlanmak üçgen şube noktada, küçük bir bölümü herhangi bir sinir izole vpln gibi ventral LVN kapalı şubeleri. Bu ventral LVN çekmek için bir tutamak olarak kullanılabilir.
- Kolu kaldırın ve yere psn dal ulaşıncaya kadar ön yönde çalışan, ventral LVN iki tarafta doku kesip.
- Diğer tarafta LVN ve posterior sinirleri izole etmek için adımlar 10 - 13 tekrarlayın.
- Mide stomatogastric sinir sistemi ayırın.
- Mide LVN tamamen ayırmak için, psn çekin ve LVN ve ventral LVN bağlı PDN ve pyn hariç, tüm doku ve sinirleri kesmek. Diğer tarafta bu işlemi tekrarlayın.
- Her mvn lateral sonu kesin. Lateral uç kaldırın ve sinir ve altta yatan mide dokusu arasında herhangi bir yabancı ekleri kesti.
- Anterior sonunda, herhangi bir yabancı ekleri commissural ganglionlar kesme, ve her iki tarafında labial sinir kesmek.
- Görme tanımlamak ve sonra mide dokusunda herhangi bir ek ekleri kesme stomatogastric sinir sistemi tarayın.
- Commissural ganglionlar üzerinde, ve mide kapalı stomatogastric sinir sistemi kabuğu, iki commissural sinirlerin ön ucuna alın ve yemeğin tarafa taşımak. Bunu yaparken, sinir sistemi, serbest kalan tüm ekleri kesme.
- Küçük Sylgard yemek hazırlayın.
- Küçük bir tabak içinde Sylgard yüzeyinde bazı mide dokusu iyice ovalayın. Bu tuzlu su yemeğin eşit olarak dağıtmak böylece Sylgard hidrofobik azalacaktır.
- Sylgard tabak soğutulmuş tuzlu su ile doldurmak ve durulayın.
- Sinir sistemi, hem de commissural sinirlerin ön uçları kapma, büyük bir çanak sinir sistemi kaldırma ve küçük bir çanak içinde döşeme hazırlanan Sylgard çanak aktarın.
- Tungsten tel kesme Minuten pimleri ve ince pimleri bir kombinasyonunu kullanarak küçük bir tabak içinde STNS Pin.
- Hazırlık aşağı ventriküler sinir Sylgard işaret olup olmadığını kontrol dorsal yüzü yukarı olduğunu emin olun.
- Beyin çıkarın commissural sinirler pin.
- Yavaşça, posteriora ve yanal her psn s çekme ve onları aşağı bağlantılarını sinir sistemi sıkı ve düz çekin .
- PDN s pilorik dilatör kas çıkarın ve PDN pin s
- Kaldırpyn s pilorik segment ve pyn s pin
- Labial sinirler gibi kalan tüm sinirler izole Pin, mvn ve AGN s
- Desheath STG.
- STG Sylgard karşı düz ve yanal AGN ler, ön stn ve arka dvn gergin düzenlenen olun.
- Dvn içinde akson görselleştirme etkinleştirmek için aydınlatma düzenleyin.
- Küçük bir iğne veya ince tungsten iğne kullanarak, STG sadece arka dvn çevreleyen kılıf, küçük bir sığ delik olun .
- Aksonlar sinir kılıfı yatay bir gözyaşı oluşturmak için, sırt, dvn boyunca iğne çekin.
- STG posterior sinir kılıfı flep alın ve STG dorsal tarafında kılıf kaldırmak için anteriora çekin.
| Kısaltmalar: | |
| STNS | Stomatogastric sinir sistemi |
| STG | Stomatogastric ganglion |
| COG | Commissural ganglion |
| stn | stomatogastric sinir |
| mvn | medial ventriküler sinir |
| iyon | alt özofagus sinir |
| oğlum | üstün özofagus sinir |
| AGN | anterior gastrik sinir |
| dvn | dorsal ventriküler sinir |
| LVN | lateral ventriküler sinir |
| psn | posterior mide sinir |
| vpln | ventral arka yan sinir |
| pyn | pilorik sinir |
| PDN | pilorik dilatör sinir |
Discussion
Istakoz mide ve STNS anatomisi daha önce 5,6 olmuştur ve bu diseksiyon prosedür varyasyonları çeşitli çalışmalarda kullanılmıştır. Biz önce başlayan diseksiyonları 5-7 ve STNS 5,8 mide anatomisi aşina olma tavsiye ederiz. Böyle bir aşinalık, sinirler ve doku kaza sonucu hasar riskini azaltmak.
Hazırlık sağlığını korumak için, serin bir ısıda hazırlanması korumak için kritik öneme sahiptir. Bu tuzlu su ˚ C tuzlu su, buzdolabında tutulan her 30 dakika 4 ile değiş tokuş ederek kolayca elde edilir. Soğuk tuzlu su dalmış, izole STNS hazırlık kaç saat için geçerli. STG ilgili Homarus Gammarus Kayıtlar in vitro 9 5 gün boyunca istikrarlı bir ritmik faaliyet göstermiştir; benzer sağlamlık H. görülmüştür americanus (atıl Pers..).
Commissural ganglionlar STG modüle girişi devam eden motor kalıplarını korumak için gereklidir. Bu nedenle, normal bir ritmik aktivitesi bu ganglionlar ve iyon, oğlu korumak ve stn sinirlerin sağlam tutulmalıdır. (Mide Mill (GM) aksonları içeren), mvn s (Yanal Mide (LG) ve inferior Kardiyak (IC) aksonlar içeren), pyn AGN s: biz tarif diseksiyonu birkaç motor sinirleri (motor nöron aksonları içeren) korur (pilorik nöron (PY) aksonlar içeren), PDN ve LVN (Yanal pilorik (LP), Medial Mide (MG), LPG aksonlar yanı sıra GM içeren (pilorik dilatör (PD) aksonları içeren), PD ve PY). Ek (veya farklı) sinirler diseksiyon, diğer motor nöron aksonları kaydedilebilir. Her birey tip motor nöron akson diseksiyon ve sinir kayıt kas innerve tarafından ayrı ayrı kayıt olabilir, bu tür nöron projeleri.
Bu preparat, çeşitli sinir sistemi fonksiyon odaklı çalışmalar için kullanılan olabilir. Nöronların aktivitesi, somata veya aksonları hücre içi, keskin elektrot kayıtları kullanarak veya ekstraselüler sinirlerin elektrik impulsları kayıt ya da kayıt olabilir. Birçok iyon kanalları STG nöronların kısmen klonlanmış ve mRNA elle çekti somata 10,11 ölçülebilir.
Acknowledgments
Biz danışmanı Dr. Havva Marder kabul etmek istiyorum. Bu araştırma, AE T. Ulusal Sağlık Eve Marder ve NS059255 hibe NS17813 Enstitüsü tarafından desteklenen
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter) | Tool | California Fine Wire Company | Cut into 1-2mm pieces to use as fine pins. | |
| Forceps #5 | Tool | Fine Science Tools | 91150-20 | |
| Minuten Pins | Tool | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Moria Spring Scissors (7mm blades) | Tool | Fine Science Tools | 15370-52 | These are the top of the line. There are more economical spring scissors available from the same company. |
| Petri Dish (100x15mm) | Tool | Fisher Scientific | 08-757-12 | Fill 2-4mm with Sylgard 182. |
| Sylgard 182 | Other | Dow Corning | 182 | |
| Pin Holder | Tool | Fine Science Tools | 26018-17 | Optional. Desheathing can be done with scissors and fine forceps alone. |
| Super fine forceps #5SF | Tool | Fine Science Tools | 11252-00 | |
| Tungsten Needles | Tool | Fine Science Tools | 10130-05 | Optional. Desheathing can be done with scissors or with pins cut from fine tungsten wire. |
| Dissection microscope |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Bierman, H. S., Tobin, A. E. Gross dissection of the stomach of the lobster, Homarus americanus. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American lobster. Bull. U.S. Bur. Fish. 29, 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
- Bucher, D., Taylor, A. L., Marder, E. Central pattern generating neurons simultaneously express fast and slow rhythmic activities in the stomatogastric ganglion. J. Neurophysiol. 95, 3617-3632 (2006).
- Mizrahi, A., Dickinson, P. S., Kloppenburg, P., Fénelon, V., Baro, D. J., Harris-Warrick, R. M., Meyrand, P., Simmers, J. Long-term maintenance of channel distribution in a central pattern generator neuron by neuromodulatory inputs revealed by decentralization in organ culture. J. Neurosci. 21, 7331-7339 (2001).
- Schulz, D. J., Goaillard, J. M., Marder, E. Variable channel expression in identified single and electrically coupled neurons in different animals. Nat. Neurosci. 9, 356-362 (2006).
- Schulz, D. J., Goaillard, J. M., Marder, E. E. Quantitative expression profiling of identified neurons reveals cell-specific constraints on highly variable levels of gene expression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 13187-13191 (2007).
