Virüs indüklenen gen susturma (VIGS) Nicotiana benthamiana Ve Domates
Summary
Knock-down gen ekspresyonu için bir virüs kaynaklı gen susturulması (VIGS) yöntemi Tanımı<em> Nicotiana benthamiana</em> Ve domates.
Abstract
RNA enterferans (RNAi) dsRNA 1 tarafından tetiklenen son derece özel bir gen susturulması olgudur . MicroRNA, non-protein kodlayan genlerin ve kısa müdahale RNA'lar (siRNA) üretilmektedir: Bu susturma mekanizması RNA düzenleyiciler iki ana sınıfları kullanır. Tesisleri transpozonlar kontrol etmek ve çiçek organ oluşumu ve yaprak gelişimi 2,3,4 gibi gelişim süreçleri üzerinde sıkı bir denetim uygulamak için RNAi. Bitkiler de virüsler tarafından enfeksiyona karşı kendilerini savunmak için RNAi kullanabilirsiniz. Sonuç olarak, birçok virüs, ev sahibi 5 başarılı kolonizasyon izin susturma gen bastırıcılarının evrildi .
Virüs indüklenen gen susturulması (VIGS) bitki RNAi aracılı antiviral savunma mekanizması yararlanan bir yöntemdir. Değiştirilmemiş virüsleri ile enfekte olmuş bitkilerde mekanizması, özellikle viral genom karşı hedeflenmektedir. Ancak, ana genlerden kaynaklanan dizileri taşıyan virüs vektörleri, süreci ek karşılık gelen ana mRNA'ların karşı hedef olabilir. Plazmid Ti, tamamını ya da susturulması için hedeflenen gen dizisinin parçası taşıyan rekombinant virüs yoluyla VIGS teslim bitki patojen Agrobacterium tumefaciens kullanılarak bitkilerde yüksek verim fonksiyonel genomik için adapte edilmiştir. Sistemik virüs yaymak ve endojen bitki RNAi makine geri kalanının özen gösterin. hedef gen ilgili dsRNAs uzunluğu 21 ila 24 nükleotidler siRNA'lar içine Ribonükleaz Dicer tarafından üretilen ve sonra parçalanır. Bu siRNA'lar sonuçta hedef transkript 2 düşmeye RNA-indüklenmiş susturma kompleksi (RISC), rehberlik eder.
Farklı vektörleri VIGS istihdam edilmiş ve en sık kullanılan bir tütün çıngırak virüsü (TRV) dayanmaktadır. TRV, iki taraflı bir virüs olup, iki farklı A. tumefaciens suşları VIGS için kullanılır. Bir kat protein ve VIGS 6,7 için kullanılan sırasını, pTRV2, diğer limanlarda ise çoğaltma ve hareket viral fonksiyonları kodlar pTRV1 taşır. Aşılama Nicotiana benthamiana ve gen susturulması suşları sonuçları hem bir karışımı ile domates fideleri. Photobleaching neden endojen phytoene desaturaz (PDS) gen, susturma VIGS verimliliği için bir kontrol olarak kullanılır. Ancak, belirtmek gerekir ki, bu susturma domates genellikle N. daha az verimli benthamiana. Ilgi genin RNA transkript bolluğu her zaman hedef gen verimli down-regüle edildiğini sağlamak için ölçülmelidir. N. Bununla birlikte, heterolog gen dizileri benthamiana domates ve tam tersi 8 kendi orthologs susturmak için kullanılabilir.
Protocol
Discussion
Virüs indüklenen gen susturma, hızlı bir şekilde ters genetik ekranlar veren bir yöntem. T-DNA veya Arabidopsis ve mısır gibi bazı bitkiler mevcuttur transpozon aracılı gen knock-çıkışları, üretimi önler. Ayrıca bitki dönüşüm zaman alıcı bir süreç circumvents ve yeterli homoloji 10 ya da susturulması vektör 6, 11 farklı ana hedef dizileri tandem düzenlenmiş olması kaydıyla, aynı anda birden fazla genin hedef sağlar.
Ancak, su…
Acknowledgements
Dr. Patricia Manosalva yazının onu değerli bilgiler için teşekkür ederim. Finansman Ulusal Bilim Vakfı Bitki Genom Programı, ödül sayısı DBI-0605059 tarafından sağlandı.
References
- Voinnet, O. RNA silencing as a plant immune system against viruses. Trends Genet. 17, 449-459 (2001).
- Carrington, J. C., Ambros, V. Role of microRNAs in plant and animal development. Science. 301, 336-338 (2003).
- Chen, X. A microRNA as a translational repressor of APETALA2 in Arabidopsis flower development. Science. 303, 2022-2025 (2004).
- Palatnik, J. F. Control of leaf morphogenesis by microRNAs. Nature. 425, 257-263 (2003).
- Brigneti, G. Viral pathogenicity determinants are suppressors of transgene silencing in Nicotiana benthamiana. EMBO J. 17, 6739-6746 (1998).
- Liu, Y., Schiff, M., Dinesh-Kumar, S. P. Virus-induced gene silencing in tomato. Plant Journal. 31, 777-786 (2002).
- MacFarlane, S. A. Molecular biology of the tobraviruses. J. Gen. Virol. 80, 2799-2807 (1999).
- Senthil-Kumar, M. A systematic study to determine the extent of gene silencing in Nicotiana benthamiana and other Solanaceae species when heterologous gene sequences are used for virus-induced gene silencing. New Phytol. 176, 782-791 (2007).
- McCullen, C. A., Binns, A. N. Agrobacterium tumefaciens and plant cell interactions and activities required for interkingdom macromolecular transfer. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 101-127 (2006).
- Rosebrock, T. R. A bacterial E3 ubiquitin ligase targets a host protein kinase to disrupt plant immunity. Nature. 448, 370-374 (2007).
- Miki, D., Itoh, R., Shimamoto, K. RNA silencing of single and multiple members in a gene family of rice. Plant Physiol. 138, 1903-1913 (2005).
- Voinnet, O. Use, tolerance and avoidance of amplified RNA silencing by plants. Trends Plant Sci. 13, 317-328 (2008).
- Ekengren, S. K., Liu, Y., Schiff, M., Kumar-Dinesh, S. P., Martin, G. B. Two MAPK cascades, NPR1, and TGA transcription factors play a role in Pto-mediated disease resistance in tomato. Plant J. 36, 905-917 (2003).
- Liu, E., Page, J. E. Optimized cDNA libraries for virus-induced gene silencing (VIGS) using tobacco rattle virus. Plant. Methods. 4, 5-5 (2008).
