Summary
Nous décrivons la dissection brut de l'estomac du homard d'Amérique (
Abstract
L'estomac du homard d'Amérique (
Protocol
- Avant la dissection du homard devrait être enterré dans la glace pendant 30 minutes à anesthésier l'animal.
- Le sexe du homard peut être déterminé en regardant la forme de la nageoire d'abord. Les mâles ont pléopodes Boney et les femelles ont pléopodes plumeuses.
- Isoler le céphalothorax.
- Utilisez un mouvement de torsion pour arnaquer les griffes avant.
- Retirer de l'abdomen (partie arrière) en utilisant les gros ciseaux pour faire une coupure profonde entre le céphalothorax et l'abdomen. Cette coupe les faisceaux de fibres géantes contrôlant la réponse la queue flip. Ensuite, passez à couper le ventre.
- Retirez les antennes en les taillant avec des ciseaux, et enlevez les jambes et les maxillipèdes tiers.
- Retirer la carapace de partout dans le ventre, (ie la région de la tête entre la rainure du col utérin et la tribune).
- Démarrage sur le bord latéral de cette section et l'utilisation Rongeurs spatule pour retirer soigneusement la carapace dure, tout en laissant l'hypoderme rougeâtre sous-jacente intacte. La spatule est utile pour séparer les couches de sorte que la carapace peut être rompu avec les rongeurs.
- Déplacement vers les yeux vous trouvez bilatérale légère calcification des plaques ovales de petite taille (IIIa osselets). Aussi près que possible de ces osselets, soigneusement détacher le muscle de la chaîne des osselets de l'aide de petits ciseaux.
- En utilisant une spatule et retirer la carapace des rongeurs entre les yeux et la partie caudale (environ 1 centimètre) de la tribune.
- Détacher la face (région, y compris les yeux, et la tribune).
- L'utilisation de petits ciseaux faire une coupe horizontale à travers le tissu le plus rostrale exposés dans la tribune pour le détacher de l'exosquelette. Puis utilisez pointe de ciseaux et / ou spatule pour enrouler soigneusement le tissu caudalement, juste après le niveau de la chaîne des osselets IIIa.
- À partir dorsalement, l'utilisation de petits ciseaux pour détacher les tissus restants de l'exosquelette visage. Coupez le plus près à la carapace dure que possible, arrêter quand vous obtenez près du centre et de l'attachement de la bouche.
- Du point de vue ventrale de la mandibule doit être facilement visible. Détachez maxillipèdes restantes.
- Localisez la lèvre molle sous les mandibules.
- Faire des coupes latérales pour détacher le visage tout en gardant la lèvre attachée à l'estomac. (Il est un peu courbée partie bleuâtre bouche extérieure qui peut être utilisé comme un guide.)
- Détacher et retirer l'estomac.
- Tenez le homard dans la paume de votre main, face ventrale et de telle sorte que l'extrémité antérieure est vers votre coude.
- Fixer une pince hémostatique à la lèvre et laisser la gravité tirer la hémostatique et la lèvre vers le bas et loin de la paroi ventrale du corps.
- L'utilisation de petits ciseaux couper mandibules.
- Repérez la face dorsale de la paroi du corps ventrale, qui forme un disque dur "plateau" à la lèvre ventrale et l'estomac. Coupez juste au-dessous du «plateau», très proche de la paroi du corps, à travers l'ensemble de la ligne médiane médial-latéral. Tout le côté ventral de l'estomac devrait maintenant être détaché de la paroi du corps.
- Tournez le homard de telle sorte que la face dorsale est en hausse. Coupez le long du bord rostral de l'cervicale sillon, où la carapace a été enlevée, et tire doucement sur le ventre.
- Détachez toutes les intestins supplémentaires qui restent attachés à l'estomac.
- Ouvrez l'estomac, et le préparer pour l'épinglage.
- Tenir l'estomac dans la paume de votre main avec l'hypoderme vers le bas. Le hémostatique doit être encore attachée à la lèvre et devrait se situer entre vos doigts.
- Utilisez des ciseaux pour faire une petite superficielle antéro-postérieure coupé de l'ouverture buccale (en dessous de la lèvre) vers le bas par la face ventrale du pylore.
- Pour ouvrir davantage l'estomac, faire deux coupes latérales le long de la chaîne des osselets qui traverse le centre de l'estomac.
- Une solution saline froide peut être versé dans l'estomac pour améliorer la visibilité et d'expulser le contenu stomacal.
- Afin de permettre la préparation à plat dans le plat dissection utiliser les petits ciseaux pour couper les trois dents gastriques.
- Pin de l'estomac dans le plat de dissection.
- Placez l'estomac, l'hypoderme vers le haut, dans un plat de dissection remplis de solution saline.
- Placez broches d'insectes à la lèvre et aux quatre coins créé lorsque l'estomac a été ouvert. Pour les coins antérieure broches et haut lieu près du bord, pour ne pas déranger les ganglions de la commissure des nerfs ou inférieur oesophagien. Pour les broches postérieures coins lieu un peu élevée pour ne pas déranger le muscle dilatateur du pylore.
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Discussion
Dans notre laboratoire de dissection de l'estomac du homard est fait pour accéder au système nerveux stomatogastric, un réseau qui contrôle les contractions rythmiques de l'estomac. L'anatomie de l'estomac du homard a été bien décrite précédemment 5-7, et nous recommandons de se familiariser avec son anatomie. Cela permettra de réduire le risque d'endommager les nerfs et les muscles délicats.
À la fin de la dissection d'estomac, différentes portions de la STNS peut encore être disséqué. Par exemple pour étudier des jonctions neuromusculaires, l'un des nerfs et le muscle STNS qu'il innerve peuvent être isolées. Les corps cellulaires des neurones dans le ganglion stomatogastric peut être consulté pour des enregistrements ou des travaux moléculaires en isolant le ganglion stomatogastric. La dissection de la STNS, y compris le ganglion stomatogastric et les nerfs, a été documentée dans une JoVE compagnon de l'article 4.
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Acknowledgments
Nous tenons à remercier notre conseiller, la Dre Eve Marder. Cette recherche a été soutenue par l'Institut national de bourses en santé NS17813 à Eve Marder et NS059255 à AE T.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Homarus americanus | Commercial Lobster | Can be purchased from any lobster supplier, We specifically request chicken” lobsters. | |
| Black Sylgard 170 | Dow Corning | 170 | |
| Preparation Dish | Fisher Scientific | 08-807 | Fill 2" with Black Sylgard 170. |
| Fine Scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| Insect Pins size 6 | Fine Science Tools | 26000-65 | |
| Mayo Scissors | This is a common product offered by many suppliers of dissecting tools. | ||
| Micro-Spatula | WARD’s Natural Science | 15 V 4313 | This is a very common product offered by many suppliers of lab tools. |
| Rongeurs | Fine Science Tools | 16000-14 | |
| Plastic hemostat | This is a common product offered by many suppliers of dissecting or jewelry making tools. |
References
- Marder, E., Bucher, D. Central pattern generators and the control of rhythmic movements. Curr. Biol. 11, R986-R996 (2001).
- Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. A small-systems approach to motor pattern generation. Nature. 417, 343-350 (2002).
- Clemens, S., Massabuau, J. C., Legeay, A., Meyrand, P., Simmers, J. In vivo modulation of interacting central pattern generators in lobster stomatogastric ganglion: influence of feeding and partial pressure of oxygen. J. Neurosci. 18, 2788-2799 (1998).
- Tobin, A. E., Bierman, H. S. Homarus americanus stomatogastric nervous system dissection. J Vis Exp. 27, (2009).
- Maynard, D. M., Dando, M. R. The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean). Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268, 161-220 (1974).
- Herrick, F. H. Natural history of the American Lobster. U.S. Bur. Fish. , 219-252 (1909).
- Marder, E., Bucher, D. Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs. Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).
