在这段视频中,我们展示了开发和验证的表皮皮肤刺激性试验(表皮薛)<em>在体外</em>化学品的皮肤刺激测试,包括化妆品和药品的成分。
表皮皮肤刺激性试验(表皮薛)<sup>(1,2,3)</sup>和验证<sup>(4,5)</sup>为<em>在体外</em>化学品的皮肤刺激测试,包括化妆品和药品的成分。表皮薛利用3D<em>在体外</em>重建人表皮(RHE)模型表皮。本议定书中所描述的程序,允许综合住户统计调查“类的刺激和非刺激之间的歧视<sup>(6)</sup>。测试是在4天的时间内过程中,预培养,60分钟的曝光,42小时后孵化和MTT可行性实验。组织收到过夜预培养(0天)后,组织局部暴露试品(1天),它可以是液体,半固体,固体或蜡。三个组织是用于每个测试化学品,以及为阳性对照(5%AQ。SDS溶液),与阴性对照(DPBS)。化学品接触时间为60分钟,35分钟的组织孵化器保持在37 ° C。测试物质,然后从组织表面广泛的洗涤程序。组织将被抹杀,并转移到新鲜培养基。经过24小时的潜伏期(2天),中期交换。介质可以是保存的细胞因子或其他感兴趣的终点进一步分析。换液后,一个额外的18小时内组织培养。在整个42H后孵化(3天)结束时,组织转移到黄色的MTT溶液中孵育3小时。由此产生的蓝紫色的甲臜盐,形成主要由线粒体代谢,提取2小时使用异丙醇。用分光光度计测定提取的甲臜的光学密度。被列为一个相对阴性对照组织处理的组织活力,如果低于50%减少刺激性的化学品。这个过程可以被用来作为完全替代的,在体内兔皮肤刺激性试验危险化学品的识别和标签符合欧盟法规<sup>(7)</sup>。
在这段视频中,我们表现出的表皮皮肤刺激性试验(表皮薛)的化学品,包括化妆品和药品的成分在体外皮肤刺激测试开发和验证。执行此方法时,重要的是,在无菌条件下工作,并严格遵循验证协议,因为从协议的偏差可能会导致不同的结果。检测了一些修改是可能的,然而,协议的变化应直接讨论与作者。
这种方法唯一的限制是一个与MTT端点的测试物质可能会干扰。一个彩色的测试物质或直接降低MTT法(从而模仿脱氢酶活性的细胞线粒体)可能会干扰与MTT终点。然而,这些试验物质是一个问题,只有在MTT试验(即42小时后测试物质的暴露)足够数量的测试物质时间上仍存在(或)组织。在这不太可能发生,(真)代谢MTT还原和贡献,一个彩色的测试材料或测试材料(假)详细介绍了在检测标准作业程序提供一个程序可以通过量化的直接MTT还原的情况下MatTek公司
The authors have nothing to disclose.
作者想感谢参与国际多中心验证研究修改表皮坐(5 ZEBET BfR的(德国),巴斯夫(德国),IIVS公司(美国),说&劳基法(奥地利) )。