Здесь мы опишем основные протокол для флуоресцентной маркировки различных элементов сердце труб из личинки и взрослых<em> Дрозофилы</em>. Эти образцы хорошо подходят для работы с изображениями с помощью люминесцентных или конфокальной микроскопии. Эта техника позволяет детальный структурный анализ особенностей сердца от могучий организм модели.
<em> Дрозофилы</em> Спинной сосуд, или сердце, является трубчатая структура состоит из одного слоя сократительные кардиомиоциты, клетки, перикарда выровнять вдоль каждой стороны сердечной стенки, поддерживающие мышцы крыловидный и у взрослых, слой вентральных продольных мышечных клеток. Сократительной дом волокна сохраняется составляющих мышцу cytoarchitecture включая плотно упакованных пучков миофибрилл и цитоскелета / submembranous белковых комплексов, которые взаимодействуют с гомологичными компонентов внеклеточного матрикса. Здесь мы опишем протокол для фиксации и флуоресцентные маркировки частности инфаркта элементы из сердца расчлененный личинок и полу-нетронутыми взрослых<em> Drosophila</em>. В частности, мы демонстрируем маркировки саркомерных F-актин и α-актинина в личиночной сердца. Кроме того, мы выполняем маркировка F-актин и α-актинина в миозина-GFP выражения взрослых мух и α-актинина и pericardin, тип IV внеклеточной коллагеновой матрицы, в диких сердцем взрослого типа. Особое внимание уделяется установке стратегии для полу-нетронутыми сердца взрослых, которая минимизирует обработку и оптимизирует возможности для сохранения целостности сердечной трубки и связанных тканей. Эти препараты предназначены для работы с изображениями с помощью флуоресцентной и конфокальной микроскопии. В целом, эта процедура позволяет тщательный и подробный анализ структурных характеристик сердца от мощного генетически послушный модели системы.
Здесь мы приводим протокол полезно для подготовки и окраски спинной дрозофилы судна и связанные с ними тканей для работы с изображениями с помощью люминесцентных или конфокальной микроскопии. Мы предоставляем краткий отчет о шагах уточнены и обычно используются в нашей лаборато…
Авторы выражают благодарность С. И. Бернштейн (San Diego State University) за критическое прочтение и полезные предложения по подготовке этой рукописи. Эта работа была поддержана грантами NIH С. И. Бернштейн, СДСУ и Р. Бодмер, BIMR; и пост-докторские стипендии с партнерской западных государств Американской ассоциации сердца к Г. Фоглер и А. Cammarato.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich® | E4378 | |
Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences Inc. | 50-00-0 | |
Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich® | 9002-93-1 | |
Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen™ | A12381 | |
Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories, Inc. | H-1200 | |
Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |