نحن هنا وصف بروتوكول الأساسية لوصفها الفلورسنت من عناصر مختلفة من الأنابيب القلب من اليرقة وتعليم الكبار<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em>. وهذه عينات مناسبة تماما للتصوير المجهري الفلورسنت أو عبر مبائر. هذا الأسلوب يسمح التحليل البنيوي مفصلا لملامح قلوب من كائن نموذج قوية.
Abstract
و<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em> سفينة الظهرية ، أو القلب ، هو بنية أنبوبية تتألف من طبقة واحدة من مقلص العضلية ، والخلايا التي تأموري محاذاة على طول كل جانب من جدار القلب والعضلات alary داعمة ، ولدى البالغين ، وهي طبقة من خلايا العضلات البطنية الطولية. البيت ألياف مقلص الحفظ المكونة من التهندس الخلوي بما في ذلك العضلات حزم المكتظ اللييفات العضلية ومجمعات البروتين هيكل الخلية / غشائي جزئيا ، والتي تتفاعل مع المكونات مثلي من المصفوفة خارج الخلية. نحن هنا وصف بروتوكول لتثبيت ووضع العلامات الفلورية عضلة القلب من العناصر ولا سيما من قلوب الكبار واليرقات تشريح شبه سليمة<em> ذبابة الفاكهة</em>. تحديدا ، علينا أن نظهر للتوسيم sarcomeric F – أكتين وα – actinin في قلوب اليرقات. بالإضافة إلى ذلك ، نقوم بوضع العلامات على F – أكتين وα actinin في الميوسين ، معربا عن GFP الذباب الكبار وα – actinin وpericardin ، وهو نوع الكولاجين الرابع المصفوفة خارج الخلية ، في قلوب الكبار البرية النوع. ويولى اهتمام خاص لوضع استراتيجية متزايدة لقلوب الكبار شبه سليمة تقلل إلى أدنى حد ويحسن التعامل مع الفرصة للحفاظ على سلامة القلب والأنابيب الأنسجة المرتبطة بها. هذه الاستعدادات هي مناسبة للتصوير المجهري عبر الفلورسنت ومبائر. عموما ، هذا الإجراء يسمح لتحليل دقيق ومفصل من الخصائص الهيكلية للقلب قوي وراثيا من النظام النموذجي لين العريكة.
Protocol
قبل أن تبدأ إعداد الحلول التالية : الاسترخاء العازلة (ذبابة الفاكهة الاصطناعي الدملمف (ADH) (انظر "تصور القلب النابض في ذبابة الفاكهة")…
Discussion
هنا نقدم بروتوكول مفيدة لإعداد وتلطيخ الظهرية melanogaster ذبابة الفاكهة السفن والأنسجة المرتبطة بها عن طريق التصوير المجهري أو مبائر الفلورسنت. ونحن نقدم سردا موجزا للخطوات التي المكرر واستخداما في مختبرنا للتلوين الفعالة التي تسمح جيدا حلها في الموقع من التص…
Acknowledgements
المؤلفان بالشكر SI برنشتاين (جامعة ولاية سان دييغو) لقراءة نقدية واقتراحات مفيدة بشأن إعداد هذه المخطوطة. وأيد هذا العمل عن طريق منح المعاهد الوطنية للصحة لبرنشتاين SI ، SDSU ، ور بودمر ، BIMR ؛ وزمالة في مرحلة ما بعد الدكتوراه من الدول الغربية التابعة لرابطة القلب الأميركية إلى Vogler زاي وألف Cammarato.
Alayari, N. N., Vogler, G., Taghli-Lamallem, O., Ocorr, K., Bodmer, R., Cammarato, A. Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures. J. Vis. Exp. (32), e1423, doi:10.3791/1423 (2009).