כאן אנו מתארים פרוטוקול בסיסי תיוג הניאון של אלמנטים שונים של צינורות הלב של הזחל והמבוגר<em> תסיסנית melanogaster</em>. דגימות אלו הן היטב מתאים דימות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי או confocal. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מבני מפורט של התכונות של לבבות מן אורגניזם מודל עוצמה.
Abstract
<em> תסיסנית melanogaster</em> כלי הגבי, או לב, הוא מבנה צינורי מורכבת בשכבה אחת של cardiomyocytes כויץ, תאים קרום הלב כי ליישר משני צדי הקיר הלב, השרירים כנפי תומכת, אצל מבוגרים, שכבת הגחון לתאי שריר האורך. בית סיבי התכווצות שימור מרכיבי cytoarchitecture השריר כולל חבילות בצפיפות של myofibrils ו קומפלקסים חלבונים cytoskeletal / submembranous, אשר אינטראקציה עם הומולוגיים הרכיבים של המטריצה תאיים. כאן אנו מתארים פרוטוקול קיבעון ואת תיוג פלורסנט של אלמנטים שריר הלב בפרט מלב הזחלים גזור למחצה שלם מבוגר<em> תסיסנית</em>. באופן ספציפי, אנחנו מדגימים את התיוג של sarcomeric F-אקטין של α-actinin בלב הזחל. בנוסף, אנו מבצעים תיוג של ה-F-אקטין α-actinin שרירן ב-GFP להביע זבובים בוגרים של α ו-actinin pericardin, סוג IV תאי מטריקס קולגן, בלב מבוגר בר סוג. תשומת לב מיוחדת ניתנת אסטרטגיה הרכבה למחצה שלם לבבות מבוגר זה ממזער טיפול מייעל את ההזדמנות לשמירה על שלמות הצינורות לב הרקמות קשור. תכשירים אלה מתאימים עבור דימות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי confocal. ככלל, הליך זה מאפשר ניתוח זהיר ומפורט של מאפיינים מבניים של הלב ממערכת מודל גנטי חזק צייתן.
Protocol
לפני שתתחיל הכן את הפתרונות הבאים: חיץ מרגיע (מלאכותי תסיסנית hemolymph (ADH) (ראה "לדמיין את הלב הפועם תסיסנית") המכיל 10 mM EGTA) <li style=";text-alig…
Discussion
כאן אנו מציגים פרוטוקול שימושי עבור הכנת מכתים את כלי melanogaster תסיסנית הגב ורקמות הקשורים עבור דימות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי או confocal. אנו מספקים דיווח תמציתי על הפעולות מעודן על ידי והעסיק נפוץ מכתים יעיל המאפשר היטב נפתרה הדמיה באתרו של הזחל והמ?…
Acknowledgements
המחברים מודים SI ברנשטיין (סן דייגו סטייט) לקריאה ביקורתית הצעות מועילות לגבי הכנת כתב היד הזה. עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענקים SI ברנשטיין, SDSU, וכן ר בודמר, BIMR, ועל ידי אחווה פוסט דוקטורט מ שותפים המערבי הברית של איגוד הלב האמריקני אל G. Vogler ו א Cammarato.
Alayari, N. N., Vogler, G., Taghli-Lamallem, O., Ocorr, K., Bodmer, R., Cammarato, A. Fluorescent Labeling of Drosophila Heart Structures. J. Vis. Exp. (32), e1423, doi:10.3791/1423 (2009).