Summary
هذا الفيديو يوضح كيفية استخدام نموذج سريعة وموثوق بها لدراسة العمليات الفيزيولوجية المرضية وpathobiological من نقص تروية عضلة القلب.
Abstract
النماذج البحثية لاحتشاء عضلة القلب ونقص التروية ضرورية للتحقيق في العمليات الحادة والمزمنة وpathobiological الفيزيولوجية المرضية في نقص التروية القلبية وتطوير وتحسين العلاج في المستقبل.
يتم تنفيذ اثنين من أساليب مختلفة من نقص تروية عضلة القلب في إنشاء مختبر القوارض. الأسلوب الأول هو خلق احتشاء البرد ، وهي تقنية سريعة ولكن غير دقيقة ، حيث يتم تطبيق البرد القلم على سطح القلب (1-3). باستخدام هذه الطريقة يمكن للعالم لا تضمن أن البرد يؤدي إلى نقص التروية ندبة ، كما يتم إنشاء إصابة عضلة القلب الشاسعة التي تظهر آثار جانبية الفيزيولوجية المرضية التي لا علاقة لها احتشاء عضلة القلب. الأسلوب الثاني هو ربط دائم من الشريان الأيسر الأمامي النازل (LAD). هنا ligated الفتى غرزة واحدة واحدة ، وتشكيل نقص التروية التي يمكن رؤيتها على الفور تقريبا. عن طريق إغلاق LAD ، لا يسمح مزيد من تدفق الدم في هذا المجال ، في حين أن ما يقرب من الأنسجة المحيطة لا تتأثر عضلة القلب. هذا الإجراء الجراحي يقلد الجوانب pathobiological والفيزيولوجية المرضية التي تحدث في احتشاء عضلة القلب المرتبطة نقص التروية.
طريقة عرض في هذا الفيديو يوضح الإجراء الجراحي للماوس نموذج احتشاء ligating بواسطة الفتى. هذا النموذج هو مناسب للدراسات pathobiological والفيزيولوجية المرضية وكذلك المناعية على احتشاء عضلة القلب. أظهرت هذه التقنية توفر الدقة العالية ويرتبط بشكل جيد مع المقاطع النسيجية.
Protocol
يتم شراؤها BALB / C الفئران وزنها يقل عن 20G في سن 8 إلى 12 أسبوعا من نهر تشارلز (7 Sandhofer خبراء المياه ، D - 97633 Sulzfeld).
ويعيش في ظل ظروف الفئران التقليدية ، والكريات تغذية الماوس القياسية والمياه بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية. تخدير الفأر مع isoflurane (2 ٪) باستخدام غرفة التعريفي.
- حلق منطقة الرقبة والجانب الأيسر من القفص الصدري وتعقيمها باستخدام الايثانول 80 ٪.
- ضع الماوس على ظهرها ووضع قناع على الأنف والفم والخمسين للحفاظ على التخدير.
- التحقق من ردود الفعل معسر الذيل والقدمين الخلفيتين للتأكد من أن الفأر هو anesthesized كافية.
- تحت عرض المجهرية إجراء شق خط الوسط عنق الرحم التي تفصل بين الجلد والعضلات والأنسجة التي تغطي القصبة الهوائية.
- عندما يتعرض القصبة الهوائية قطع ثقب صغير في الأنسجة بين عصابات خرطوشة جهازي أدناه على المزمار لادخال الأنبوب الرغامي (الشكل 1). إدراج أنبوب القصبة الهوائية عقد جزء من الجمجمة القصبة الهوائية باستخدام forecepts الجراحية الصغرى. تحقق من حركة الصدر للتأكد من أن تكون جيدة التهوية كلا الرئتين.
- يجب أن معدل التنفس (RR) أن ما يقرب من 110 في الدقيقة ، مع الضغط الشهيقي من 17 إلى 18cm H 2 O. بدوره الماوس بعناية ، والكذب على جانبها الأيسر ، تواجه جانبها الأيسر. أداء بضع الصدر leftsided بين الثالثة (3) والضلع الرابع 4 ، وتشريح الانسجة والعضلات بعناية ، وذلك باستخدام مكواة لمنع النزيف.
- فتح القفص الصدري بعناية ، وبمجرد فتح القفص الصدري ، والعثور على القلب والرئة من دون لمس أي جسم مع حادة. الآن إزالة جزء من كيس التامور الذي يغطي القلب.
- يقع LAD بين الشريان الرئوي والأذن اليسرى. استخدام 8-0 Prolene خياطة (Ethicon ، Norderstedt ، المانيا) لligate الفتى القريبة مع واحد وحيد خياطة (الشكل 2).
- وضع أنبوب الصدر (28G ، القسطرة المرتشين) ، في الفترة الواقعة بين 4 و 5 الضلع الرابع.
- إغلاق شق الصدر في الطبقات ، وذلك باستخدام الخيوط 6-0 Prolene تشغيل (Ethicon ، Norderstedt ، المانيا) للتكيف مع الأضلاع والغرز Prolene 4-0 تشغيل (Ethicon ، Norderstedt ، المانيا) لإغلاق الجلد.
- استنزاف الصدر بمساعدة حقنة 2ml بعناية (الشكل 3). ضع الماوس على ظهرها. تتخذ الآن من الأنبوب الرغامي وتكييف حلقات القصبة الهوائية خرطوشة واحدة واحدة باستخدام غرزة خياطة الجروح Prolene 7-0 (Ethicon ، Norderstedt ، ألمانيا).
- وضع قناع للوجه على الماوس وإغلاق الجلد باستخدام Prolene 4-0 تشغيل الغرز (Ethicon ، Norderstedt ، ألمانيا).
التحقق من صحة
هناك احتمالات مختلفة لتأكيد نجاح عملية ربط - LAD.
ويمكن إجراء الاختبار تروبونين 6-18 ساعة بعد الجراحة ، وذلك باستخدام سوى 150 لتر الدم من دون الحاجة إلى الموت ببطء الحيوان. يتم تطبيق الدم لعدة اختبار تروبونين مخصصة (T TROP الحساسة ، روش ، مانهايم) (الشكل 4). تروبونين هو بروتين التنظيمية في شعيرات أكتين من الخلية العضلات ، وهناك isotypes مختلفة في ثلاثة أنواع من العضلات. تم العثور على cTnI isotypes وcTnT في قلب وصدر في إصابة الأنسجة. ويستند اختبار موحد لT تروبونين (cTnT) على اثنين من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة القلب محددة ، واحدة من الفخاخ تروبونين في عينة من الدم ، والثانية هي علامة.
ويمكن تحديد المنطقة احتشاء ظاهريا بعد 3 أيام (الشكل 5).
TTC (2،3،5 - Triphenyltetrazolium كلوريد) الأنسجة تدابير السلامة تلطيخ المستخدمة لتقييم حجم احتشاء. صبغة زرقاء ايفانز (1،5 ٪ ، 1.0mL) في الفوسفات مخزنة يتم حقن المياه المالحة (PBS) في تجويف البطين الأيسر لقياس مساحة العضلة القلبية الدماغية. الموت الرحيم هو الماوس ويتم حصاد القلب ومقطوع إلى شرائح. يتم تحضين شرائح الأنسجة في 1 ٪ حل PBS TTC ، ودرجة الحموضة 7.4 عند 37 درجة مئوية لمدة 20min. يتم إصلاح الأنسجة في برنامج تلفزيوني ، 10 ٪ بين عشية وضحاها مخزنة في الفورمالين 2-8 درجة مئوية. يدار TTC فيفو السابقين إلى المناطق صبغة زرقاء السلبية ايفانز (الشكل 6).
لالأنسجة الماوس يجب أن يكون الموت الرحيم والقلب يجب أن تكون جزءا لا يتجزأ من لمزيد من المعالجة. بعد أداء أقسام البارافين ، ملطخة الشرائح مع H & E (الهيماتوكسيلين ويوزين) أو ثلاثي الألوان لتصور نسيج متليف (الشكل 7).
الشكل 1 : أنبوب القصبة الهوائية.
1A : مكشوف القصبة الهوائية ، وبعد شق بطني عنق الرحم.
1B : فتح القصبة الهوائية حلقات الغضروف two الذيلية إلى الحنجرة.
1C : يتم إدخال أنبوب القصبة الهوائية في القصبة الهوائية.
الشكل 2 : يتم كشفها من خلال بضع الصدر والقلب a الجانب الأيسر ، وligated الفتى.
الشكل 3 : بعد إغلاق الصدر ، يتم تنفيذ عملية استنزاف الجنبة. الماوس لا يزال تحت التخدير.
الشكل 4 : خطان تظهر بعد بضع دقائق عند الاختبار تروبونين إيجابية.
الشكل 5 : يعرض explanted القلب.
5A : عرض العينية من القلب مع المنطقة الدماغية مع اللون بيضاء باهتة.
5B : الباب الصليب احتشاء القلب ، وهي المنطقة الدماغية يظهر في الزاوية اليمنى العليا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
باختصار ، هذا الفيديو يتصور النموذج LAD - ربط خطوة بخطوة ، ويحدد - LAD عملية ربط في الفئران والعمليات الجراحية ممكنا بسهولة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
التمويل
وأيد هذه الدراسة من جامعة هامبورغ مستشفى (MK ، المرأة التأهيل غرانت) ، DFG (SS ، SCHR992/3-1) ، ISHLT (TD ، وجائزة البحوث 2009).
بيان
وكانت جميع الحيوانات تلقوا رعاية الإنسان وفقا للمبادئ رعاية الحيوان المعملية ، وأجرى تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها الجمعية الوطنية للبحوث الطبية ودليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية التي نشرتها المعاهد الوطنية للصحة (المعاهد الوطنية للصحة المنشور 85-23 ، منقحة 1985).
تم الحصول على جميع الحيوانات من مختبرات نهر تشارلز (Sulzfeld ، ألمانيا) ، وكان يحتفظ بها في مرافق الرعاية الحيوانية من مستشفى جامعة هامبورغ إيبندورف. تلقى طعام الحيوانات والمياه القياسية بالمال وبالشهرة أيضا الإعلانية.
Acknowledgments
الكتاب أشكر كريستيان Pahrmann لمساعدتها التقنية والأنسجة الأداء.
References
- Atkins, B. Z., Hueman, M. T. Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart. J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).
- Jaquet, K., KT, K. rause Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism. Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).
- Joung, B., Kim, I. K. Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects. Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).
