DAL-Ligature: un modèle murin d'infarctus du myocarde

Summary

Cette vidéo montre comment utiliser un modèle rapide et fiable pour étudier les processus pathobiologiques et physiopathologiques de l'ischémie myocardique.

Abstract

Les modèles de recherche de l'infarctus et l'ischémie myocardique sont indispensables pour étudier les processus aigus et chroniques pathobiologiques et physiopathologiques de l'ischémie myocardique et de développer et d'optimiser le traitement futur.

Deux méthodes différentes de créer une ischémie myocardique sont effectuées sur des rongeurs de laboratoire. La première méthode est de créer cryo infarctus, une technique rapide mais inexacte, où un cryo-plume est appliqué sur la surface du cœur (1-3). En utilisant cette méthode, le chercheur ne peut garantir que la cryo-cicatriciel entraîne une ischémie, également une blessure vastes du myocarde est créé, qui montre que les effets secondaires physiopathologiques sont pas liés à un infarctus du myocarde. La deuxième méthode est la ligature permanente de l'artère interventriculaire antérieure (AIA). Ici, le DAL est ligaturé avec un point unique, formant une ischémie qui peut être vu presque immédiatement. En fermant la DAL, aucun flux sanguin supplémentaire est permise dans cette zone, tandis que les tissus environnants du myocarde est presque pas affecté. Cette intervention chirurgicale imite les aspects pathobiologiques et physiopathologiques se produisant dans l'infarctus liés à l'ischémie myocardique.

La méthode introduite dans cette vidéo démontre la procédure chirurgicale d'un modèle de souris infarctus par ligature de la LAD. Ce modèle est pratique pour les études pathobiologiques et physiopathologiques ainsi que sur les immunobiologiques infarctus du myocarde. La technique montrée offre une grande précision et une bonne corrélation avec les coupes histologiques.

Protocol

Souris Balb / C d'un poids minimum de 20g à l'âge de 8 à 12 semaines sont achetés auprès de Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld).
Les souris sont logées dans des conditions classiques, nourris avec des granulés de souris standard et eau ad libitum. Anesthetize souris avec l'isoflurane (2%) en utilisant une chambre d'induction.

1. Rasez la zone du cou et le côté gauche de la cage thoracique et de désinfecter à l'aide d'éthanol à 80%.
2. Placez la souris sur son dos et placer un masque sur sa bouche et le nez pour maintenir l'anesthésie.
3. Vérifiez les réflexes pincer la queue et les pattes arrières pour être sûr que la souris est suffisant anesthésiés.
4. Sous vue microscopique effectuer une incision médiane cervical séparant la peau, des muscles et du tissu couvrant la trachée.
5. Lorsque la trachée est exposé couper un petit trou dans le tissu entre deux anneaux cartouche en dessous de la glotte pour insérer la sonde endotrachéale (figure 1). Insérez la sonde endotrachéale tenant la partie crânienne de la trachée à l'aide de micro forecepts chirurgicale. Vérifiez le mouvement thoracique pour être sûr que les deux poumons sont bien aérés.
6. Le taux de respiration (RR) devrait être d'environ 110 par minute, avec une pression inspiratoire de 17 à 18cm H ₂ O. Retournez la souris attentivement, couché sur son côté droit, face à son côté gauche. Effectuer une thoracotomie leftsided entre le 3 ^ème et 4 ^ème de la côte, et de disséquer les tissus et les muscles soigneusement, en utilisant une Cauter pour prévenir les saignements.
7. Ouvrez le thorax attentivement, une fois le thorax est ouvert, trouver le cœur, sans toucher le poumon avec un objet pointu. Maintenant, enlevez la partie du sac péricardique qui recouvre le cœur.
8. Le DAL est situé entre l'artère pulmonaire et l'oreillette gauche. Utilisez un 8-0 Prolène suture (Ethicon, Norderstedt, Allemagne) pour ligaturer l'artère interventriculaire antérieure proximale avec une suture simple (figure 2).
9. Placer un drain thoracique (28G, un cathéter veineux), entre le 4 ^ème et 5 ^ème de la côte.
10. Fermer l'incision thoracique en couches, en utilisant 6-0 Prolène sutures course (Ethicon, Norderstedt, Allemagne) pour adapter les côtes et les points de suture Prolène 4-0 fonctionnement (Ethicon, Norderstedt, Allemagne) pour fermer la peau.
11. Égoutter le thorax à l'aide d'une seringue 2ml soigneusement (figure 3). Placez la souris sur son dos. Maintenant, prenez la sonde endotrachéale et d'adapter les anneaux cartouche trachéale avec un point unique à l'aide des sutures 7-0 Prolène (Ethicon, Norderstedt, Allemagne).
12. Placez le masque sur la souris et fermer la peau à l'aide Prolène 4-0 courir sutures (Ethicon, Norderstedt, Allemagne).

Validation

Il existe différentes possibilités pour confirmer le succès de la LAD-ligature.

Le test de la troponine peut être effectuée 6 à 18 heures après la chirurgie, en utilisant seulement 150 L de sang, sans la nécessité d'euthanasier l'animal. Le sang est appliqué à un kit de test personnalisés troponine (T TROP sensible, Roche, Mannheim) (figure 4). La troponine est une protéine régulatrice dans les filaments d'actine de la cellule musculaire, il ya différents isotypes dans les trois types de muscles. La cTnI et de cTnT isotypes sont trouvés dans le cœur et sont libérés des lésions tissulaires. Le test normalisé pour la troponine T (cTnT) est basé sur deux anticorps monoclonaux spécifiques du cœur, l'un des pièges de la troponine dans l'échantillon de sang, le second est un marqueur.

La zone infarcie peut être identifiée macroscopiquement après 3 jours (figure 5).

TTC (2,3,5-triphényltétrazolium chlorure) la viabilité des tissus coloration des mesures utilisées pour évaluer la taille d'infarctus. Bleu Evans (1,5%, 1,0 ml) dans un tampon phosphate salin (PBS) est injecté dans la cavité ventriculaire gauche à mesurer la surface du myocarde ischémique. La souris est euthanasié et le cœur est récolté et sectionnés en tranches. Les tranches de tissu sont incubés dans une solution de PBS% TTC, pH 7,4 à 37 ° C pendant 20min. Les tissus sont fixés dans 10% de PBS-formol tamponné nuit à 2-8 ° C. TTC est administré ex vivo pour la teinture bleu Evans-négatif domaines (figure 6).

Pour l'histologie de la souris doit être euthanasié et le cœur doit être intégré pour un traitement ultérieur. Après avoir effectué des coupes en paraffine, les lames sont colorées au H & E (hématoxyline-éosine) ou trichrome de visualiser les tissus fibreux (figure 7).

Figure 1: tube trachéal.
1A: Exposed trachée, après incision cervicale ventrale.
1B: trachée est ouvert deux anneaux cartilagineux caudale au larynx.
1C: tube trachéal est insérée dans la trachée.

Figure 2: Le coeur est exposée à travers une thoracotomie du côté gauche, le DAL est ligaturé.

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Figure 3: Après le thorax est fermé, un drain pleural est effectué. La souris est toujours sous anesthésie.

Figure 4: Deux lignes apparaissent après quelques minutes lorsque le test est positif de troponine.

Figure 5: Affiche le coeur explanté.
5A: Vue macroscopique du cœur avec la zone ischémique avec une couleur fanée blanchâtre.
5B: Coupe transversale du cœur infarci, la zone ischémique montre dans le coin supérieur droit.

Discussion

En résumé, cette vidéo permet de visualiser le modèle DAL-ligature, étape par étape, et identifie les données DAL-ligature des souris aussi facilement réalisables procédures chirurgicales.