Summary
이 동영상은 배아 생쥐의 개발 피질에서 neuroprecursors의 절연에 사용되는 방법을 설명합니다. , 자궁에서 태아를 제거하는 대뇌 피질의 조직을 해부하고, 고립 대뇌 피질을 소화에 대한 절차는 표시됩니다.
Abstract
기본 신경 줄기 세포 문화는 중추 신경 시스템 개발을 기본 메커니즘을 연구하는 데 유용합니다. 줄기 세포 연구는 신경계에 대한 우리의 이해를 증가하고 우리가 현재 불치의 뇌 질병 및 부상에 대한 치료를 개발할 수 있습니다. 또한, 줄기 세포가 신경 분화 및 transdifferentiation의 메커니즘 및 유전과 환경 신호의 세부적인 연구 목적으로 줄기 세포 연구에 사용해야 특정 세포 종류에 세포의 직접 전문. 이 동영상은 배아 일 12.5 마우스 지느러미의 forebrain에서 세포를 disaggregate하는 데 사용하는 기술을 보여줍니다. 해부 절차는 자궁에서 E12.5 마우스 배아를 수확 미세 해부 포셉으로 "피부"를 제거하고 마지막으로 대뇌 피질의 조각 격리가 포함되어 있습니다. 절개 후, 조직은 소화와 기계 dissociated 수 있습니다. resuspended dissociated 세포는 다음 신경 줄기 세포의 성장을 하시더군요 "줄기 세포"미디어에서 양식입니다.
Protocol
- 마우스 신경 엽 성의 전구 물질 (NPCs)는 E12.5 배아 대뇌 피질에서 격리되었다.
- 피부와 mesenchymal 레이어는 해부 telencephalic vesicles에서 제거되었습니다.
- Vesicles는 37 0.02 % EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 20 분 HBSS에 0.2 % BSA ° C.와 0.05 %의 트립신에 incubated되었습니다
- Trypsinization은 HBSS 1 MG / ML 대두 트립신 억제제의 동일한 볼륨 (시그마 # T6522)에 의해 중지되었습니다.
- 조직 화재 - 세련된 파스퇴르 pipettes로 분쇄 여러 라운드를 사용하여 dissociated되었습니다 요약.
- 세포 HBSS에 0.2 % BSA로 한 번 씻어 20 NG / ML EGF, 10 NG / ML FGF2 (R & D 시스템 또는 Peprotech), 2 UG / ML의 헤파린 (와 미디어에 laminin - 코팅 coverslips 50,000 세포 / ML에 도금했다 시그마).
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Discussion
CNS 개발과 줄기 세포 생물학에 대한 우리의 이해에 큰 발전이 배아 신경 줄기 세포를 수확 격리와 문화 능력에 의해 가능하게되었습니다. 이 비디오는 E12.5 마우스 대뇌 피질과 배아 신경 줄기 세포의 후속 disaggregation과 culturing의 절개를 보여줍니다. 다른 많은 다른 유사한 방법이 성공적으로 다른 수사관에 의해 고용되어있다.
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
