Summary
Denna video beskriver den metod som används för isolering av neuroprecursors från utvecklingsländerna cortex av embryonala möss. Förfarandet för att ta bort embryon från livmodern, dissekera den kortikala vävnad, och smälta den isolerade hjärnbarken visas.
Abstract
Primär neurala stamceller kulturer är användbara för att studera mekanismerna bakom centrala nervsystemet utveckling. Stamcellsforskning kommer att öka vår förståelse för nervsystemet och kan tillåta oss att utveckla behandlingar för närvarande obotliga hjärnsjukdomar och skador. Dessutom bör stamceller användas för stamcellsforskning syftar till detaljerad studie av mekanismer för neural differentiering och transdifferentiation och den genetiska och miljömässiga signaler som styr specialiseringen av celler till särskilda celltyper. Denna video visar en teknik som används för att dela upp celler från embryonala dag 12,5 musen rygg framhjärnan. Det dissektion förfarandet ingår skörd E12.5 musembryon från livmodern, att ta bort "hud" med fina dissekera pincett och slutligen isolera delar av hjärnbarken. Efter dissektion är vävnaden rötas och mekaniskt dissocierade. Den återsuspenderade dissocierade celler sedan odlas i "stamceller" medier som gynnar tillväxten av neurala stamceller.
Protocol
- Mus neurala prekursorer (NPC) var isolerade från E12.5 embryo cortex.
- Hud och mesenkymala skikt togs bort från dissekeras telencephalic blåsor.
- Blåsor inkuberades i 0,05% trypsin med 0,02% EDTA och 0,2% BSA i HBSS under 20 minuter vid 37 ° C.
- Trypsinization stoppades av en lika stor volym på 1 mg / ml soja trypsin inhibitor (Sigma # T6522) i HBSS.
- Tissue smälter har tagit avstånd med hjälp av flera omgångar trituration med eld-polerad Pasteur pipetter.
- Cellerna tvättades en gång med 0,2% BSA i HBSS och pläterade på 50 tusen celler / ml på laminin-belagda täckglas i media med 20 ng / ml fonden, 10 ng / ml FGF2 (FoU-system eller Peprotech) och 2 ug / ml heparin ( sigma).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Stora framsteg i vår förståelse av CNS utveckling och stamcellsbiologi har gjorts möjligt genom vår förmåga att skörda, isolera och odla embryonala neurala stamceller. Denna video visar dissektion av E12.5 mus hjärnbarken och den därpå följande uppdelning och odling av embryonala neurala stamceller. Många andra liknande metoder har framgångsrikt används av andra utredare.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
