Summary
וידאו זה מתאר את שיטת לבידוד של neuroprecursors מהקורטקס המתפתח של עכברים עובריים. ההליך להסרת עוברים מן הרחם, לנתח את רקמת קליפת המוח, ולעכל את קליפת המוח מבודד מוצג.
Abstract
ראשי עצביים תא תרבויות גזע שימושי לחקר המנגנונים של מערכת העצבים המרכזית פיתוח. המחקר בתאי גזע תגדיל את הבנתנו את מערכת העצבים עשויה לאפשר לנו לפתח טיפולים למחלות מוח ופציעות כיום חשוכת מרפא. בנוסף, בתאי גזע אמור לשמש למחקר בתאי גזע שמטרתו מחקר מפורט של מנגנוני התמיינות transdifferentiation עצביים ואת אותות גנטיים וסביבתיים התמחות ישיר של תאים לתוך תאים מסוגים מסוימים. וידאו זה מדגים טכניקה המשמשת disaggregate תאים עובריים forebrain 12.5 יום העכבר הגבי. ההליך לנתיחה כולל קצירת E12.5 עוברי עכברים מן הרחם, הסרת "עור" עם מלקחיים לנתח בסדר ולבסוף לבודד חתיכות של קליפת המוח. בעקבות לנתיחה, הרקמה מתעכל והוא ניתק מכנית. התאים ניתק resuspended הם מתורבתים אז "תא גזע" התקשורת מעדיפה צמיחה של בתאי גזע עצביים.
Protocol
- מבשרי עכבר עצביים (NPCs) בודדו מקליפת E12.5 העובר.
- שכבות העור mesenchymal הוסרו שלפוחית telencephalic גזור.
- שלפוחית הודגרו ב טריפסין 0.05% עם EDTA 0.02% ו 0.2% ב BSA HBSS במשך 20 דקות בטמפרטורה 37 ° C.
- Trypsinization נעצר על ידי נפח שווה של 1 מעכב מ"ג / מ"ל סויה טריפסין (Sigma # T6522) ב HBSS.
- רקמות מעכל היו מנותקים באמצעות מספר סבבי טחינה דקה עם אש מלוטש pipettes פסטר.
- תאים נשטפו פעם עם BSA 0.2% ב HBSS ו מצופה ב 50,000 תאים / מ"ל על laminin מצופה coverslips בתקשורת עם 20 ng / ml EGF, 10 ng / ml FGF2 (R & D מערכות או Peprotech), ו 2 UG / הפרין מ"ל ( סיגמא).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
התקדמות גדולה להבנת התפתחות מערכת העצבים המרכזית ו ביולוגיה של התא גזע כבר מתאפשרת על ידי היכולת שלנו הקציר, לבודד תרבות עובריים לתאי גזע עצביים. וידאו זה מדגים את דיסקציה של קליפת המוח E12.5 העכבר ואת disaggregation culturing עתידיים של עובריים לתאי גזע עצביים. רבים שיטות אחרות דומות אחרות להיות מועסק בהצלחה על ידי חוקרים אחרים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
