Summary
Este vídeo descreve o método utilizado para o isolamento de neuroprecursors desenvolvimento do córtex de ratos embrionárias. O procedimento para a remoção de embriões do útero, dissecando o tecido cortical, e digerindo o córtex cerebral isolado é mostrado.
Abstract
Culturas primárias de células-tronco neurais são úteis para estudar os mecanismos subjacentes ao desenvolvimento do sistema nervoso central. Pesquisas com células-tronco vai aumentar a nossa compreensão do sistema nervoso e pode permitir-nos desenvolver tratamentos para doenças atualmente incuráveis cérebro e lesões. Além disso, as células-tronco devem ser usados para pesquisa com células-tronco que visam o estudo detalhado dos mecanismos de diferenciação neural e transdiferenciação e os sinais genéticos e ambientais que a especialização da direta das células em tipos de células particular. Este vídeo demonstra uma técnica utilizada para desagregar as células embrionárias a partir do dia cérebro anterior dorsal 12,5 mouse. O procedimento inclui a colheita dissecção E12.5 embriões de camundongos a partir do útero, eliminando a "pele" com finas pinças de dissecação e, finalmente, isolando partes do córtex cerebral. Após a dissecção, o tecido é digerido e mecanicamente dissociados. As células são então ressuspenso dissociada cultivadas em "células tronco" de mídia que favorece o crescimento de células-tronco neurais.
Protocol
- Precursores do mouse neural (NPCs) foram isoladas do córtex E12.5 embrião.
- Camadas da pele e mesenquimais foram retirados dissecados vesículas telencefálico.
- Vesículas foram incubadas em tripsina 0,05% com EDTA 0,02% e BSA 0,2% em HBSS durante 20 minutos a 37 ° C.
- Tripsinização foi parado por um volume igual de 1 mg / ml inibidor de tripsina de soja (Sigma # T6522) em HBSS.
- Digere o tecido foram dissociadas utilizando várias rodadas de trituração com pipetas Pasteur-fogo polido.
- Células foram lavadas uma vez com BSA 0,2% em HBSS e banhado em 50.000 células / ml em laminina revestido lamínulas em meios com 20 ng / EGF ml, 10 ng / ml FGF2 (R & D Systems ou Peprotech), e 2 ug / heparina ml ( Sigma).
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Discussion
Grandes avanços em nossa compreensão do CNS desenvolvimento e biologia das células estaminais tem sido possível graças a nossa capacidade de colheita, isolar e cultivar células-tronco embrionárias neural. Este vídeo demonstra a dissecação de E12.5 córtex cerebral do rato e da desagregação e posterior cultivo de células-tronco embrionárias neural. Muitos outros outros métodos semelhantes têm sido empregada com sucesso por outros pesquisadores.
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
