Summary
Это видео описывает метод, используемый для изоляции neuroprecursors из развивающихся коры эмбриональных мышей. Процедура снятия эмбрионов из матки, рассекая корковой ткани, и перевариванием изолированных кора головного мозга показано на рисунке.
Abstract
Первичная нейронных культур стволовых клеток являются полезными для изучения механизмов, лежащих развития центральной нервной системы. Исследования стволовых клеток увеличится нашем понимании нервной системы и может позволить нам разработать методы лечения в настоящее время неизлечимых заболеваний головного мозга и травмы. Кроме того, стволовые клетки должны быть использованы для исследования стволовых клеток, направленных на детальное изучение механизмов нейронных дифференциации и трансдифференцировки и генетических и экологических сигналы, которые прямой специализации клеток в определенные типы клеток. Это видео демонстрирует метод, используемый для разбивки клетки эмбрионального день 12,5 передний мозг спинной мыши. Рассечение процедура включает в себя уборка E12.5 эмбрионов мыши из матки, удаление "кожу" с мелкими рассекает щипцы и, наконец, выделения кусков коры головного мозга. После вскрытия, ткань переваривается и механически диссоциирован. Ресуспендировали диссоциированных Затем клетки культивировали в "стволовая клетка" СМИ, что способствует росту нервных стволовых клеток.
Protocol
- Мышь нейронных прекурсоров (НПС) были выделены из эмбриона E12.5 коры головного мозга.
- Кожа и мезенхимальные слои были сняты с расчлененным telencephalic пузырьков.
- Пузырьки инкубировали в 0,05% трипсина с 0,02% ЭДТА и 0,2% BSA в HBSS в течение 20 минут при температуре 37 ° C.
- Трипсинизации был остановлен равным объемом 1 мг / мл соевого ингибитора трипсина (Sigma # T6522) в HBSS.
- Ткань дайджесты были диссоциированных с помощью нескольких раундов растирания с огневой полировкой пипетки Пастера.
- Клетки промывали один раз с 0,2% BSA в HBSS и помещали на 50 000 клеток / мл на ламинин покрытием покровных в средах с 20 нг / мл ЭФР, 10 нг / мл FGF2 (R & D Systems или Peprotech), и 2 мкг / мл гепарина ( Sigma).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Большие успехи в нашем понимании развития ЦНС и биологии стволовых клеток стало возможным благодаря нашей способности урожая, изолировать и культуру эмбриональных нервных стволовых клеток. В этом видеоролике показано рассечение E12.5 мыши коры головного мозга и последующее разукрупнения и культивирования эмбриональных нервных стволовых клеток. Многие другие другие подобные методы были успешно использованы другими исследователями.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Straight Iris Scissors | Tool | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| Medium Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| Micro Scissors | Tool | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| Bent Forceps | Tool | Fine Science Tools | 11251-35 |
References
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
