Summary

Kultur av mus neurala prekursorer Stem Cell

Published: February 25, 2007
doi:

Summary

Denna video beskriver den metod som används för isolering av neuroprecursors från utvecklingsländerna cortex av embryonala möss. Förfarandet för att ta bort embryon från livmodern, dissekera den kortikala vävnad, och smälta den isolerade hjärnbarken visas.

Abstract

Primär neurala stamceller kulturer är användbara för att studera mekanismerna bakom centrala nervsystemet utveckling. Stamcellsforskning kommer att öka vår förståelse för nervsystemet och kan tillåta oss att utveckla behandlingar för närvarande obotliga hjärnsjukdomar och skador. Dessutom bör stamceller användas för stamcellsforskning syftar till detaljerad studie av mekanismer för neural differentiering och transdifferentiation och den genetiska och miljömässiga signaler som styr specialiseringen av celler till särskilda celltyper. Denna video visar en teknik som används för att dela upp celler från embryonala dag 12,5 musen rygg framhjärnan. Det dissektion förfarandet ingår skörd E12.5 musembryon från livmodern, att ta bort "hud" med fina dissekera pincett och slutligen isolera delar av hjärnbarken. Efter dissektion är vävnaden rötas och mekaniskt dissocierade. Den återsuspenderade dissocierade celler sedan odlas i "stamceller" medier som gynnar tillväxten av neurala stamceller.

Protocol

Mus neurala prekursorer (NPC) var isolerade från E12.5 embryo cortex. Hud och mesenkymala skikt togs bort från dissekeras telencephalic blåsor. Blåsor inkuberades i 0,05% trypsin med 0,02% EDTA och 0,2% BSA i HBSS under 20 minuter vid 37 ° C. Trypsinization stoppades av en lika stor volym på 1 mg / ml soja trypsin inhibitor (Sigma # T6522) i HBSS. Tissue smälter har tagit avstånd med hjälp av flera omgångar trituration med eld-polerad Pasteur pipetter. Cellerna tvättades en g…

Discussion

Stora framsteg i vår förståelse av CNS utveckling och stamcellsbiologi har gjorts möjligt genom vår förmåga att skörda, isolera och odla embryonala neurala stamceller. Denna video visar dissektion av E12.5 mus hjärnbarken och den därpå följande uppdelning och odling av embryonala neurala stamceller. Många andra liknande metoder har framgångsrikt används av andra utredare.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Straight Iris Scissors Tool FST 14060-11  
Medium Scissors Tool FST 15024-10  
Micro Scissors Tool FST 15002-08  
Bent Forceps Tool FST 11251-35  

References

  1. Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E., Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).

Play Video

Cite This Article
Currle, D. S., Hu, J. S., Kolski-Andreaco, A., Monuki, E. S. Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors. J. Vis. Exp. (2), e152, doi:10.3791/152 (2007).

View Video