6.5 DPCのマウス胚の解剖

Summary

postimplantation段階の胚の分離は1つが遺伝子のパターンを研究し、胚発生時にプロセスを作る細胞系譜の決定を分析することができますが、初期胚の適切な解剖は挑戦することができます。このプロトコルは、初期の原始-ストリーク段階の胚を単離する方法を説明します（〜6.5日後に交尾[DPC]）。

Abstract

哺乳類の胚発生の初期段階での遺伝子発現パターンの解析は、遺伝子の機能、細胞間相互作用とシグナル伝達機構そのガイド胚のパターン形成についての重要な手がかりを提供することができます。しかし、まもなく移植後の脱落膜からマウス胚の解剖は、挑戦的な手順にすることができ、このプロセスの詳細なステップバイステップの資料が不足している。

ここでは、移植後（6.5 DPC）胚が最初に妊娠マウス（膣栓が指定されていた一日0.5 poistの交尾の検出）の子宮を解剖し、その後母体脱落膜から胚を解剖によって分離されている方法を示しています。ライヘルトの膜の郭清は、栄養膜の円錐の除去と同様に記述されています。

Protocol

雌のマウスからの生殖器官の解剖

1. 妊娠動物は、圧縮ガスを使用してCO ₂窒息により安楽死させる。
2. 吸収性パッド上に動物の仰臥位に置き、マウスの毛で解剖を汚染の危険性を減らすために70％エタノールに浸けます。
3. 皮膚をつまんで、通常の手術用はさみで正中線にある小さな横切開を行います。しっかりと切開の上下の皮膚を持ち、腹部を露出する頭部と尾部に向かって離れて皮膚を引っ張る。
4. 鉗子で腹膜を掴んで、腹腔を露出するカット。
5. two子宮角、卵管と卵巣：体腔の背側領域での生殖器官を見つけます。

プリミティブストリーク段階（6.5 DPC）解剖

1. 卵管下子宮を把握し、子宮角を取り出して、子宮間膜に沿って、それがフリーカット。氷冷PBSで切除した子宮を置きます。
   
   
   
   図1
   
   
2. 子宮角に沿って注入部位との間で切断することにより、各胚を区切ります。
   
   
   
   図2
   
   
   
3. 周囲の筋層と包ま脱落膜組織との間に時計メーカーの鉗子をスライドさせて筋肉の子宮内膜をつかみます。筋層バックピール、脱落膜を露出させる。
   
   
   
   図3
   
   
4. 同封の胚のmidventralまたは遠位端を露出される頂点（脱落膜組織の約1 / 5）で露出脱落膜の一部をオフにクリップ。
   
   
   
   図4
   
   
5. 胚は、鉗子の先端を使用して砲撃することができます。ピアース離れて脱落膜を引き裂くために胚とオープン鉗子を取り巻くピンセットで脱落。
   
   
   
   図5
   
   
6. 一度胚が削除される、Reichartの膜はまだだけでなく、栄養膜のコーン（栄養膜）を結合することができる。胚は、慎重に解剖によって、さらに解剖することができます。
   
   
   図6
   

Discussion

マウスのPostimplantationは4.5 DPCと出産の間で発生します。この解剖の方法は、前または後5.5〜8.5 DPCでのステージの胚を分離するために、基本的に前述のように、適用することができます。

Materials

Name	Type	Company	Catalog Number	Comments
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1x)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope