Summary
postimplantation - 무대 배아의 격리는 한 유전자 patterning을 연구하고 개발하는 동안 배아 프로세스를 만드는 세포 혈통 결정을 분석할 수 있지만, 초기 배아의 적절한 절개 도전하실 수 있습니다. 이 프로토콜은 초기 원시 - 연속 단계의 배아를 분리하는 방법을 설명합니다 (~ 6.5 일 이후 coitum [DPC]).
Abstract
포유류의 배아 발달의 초기 단계 동안 유전자 발현 패턴 분석 유전자 기능, 세포 - 세포 상호 작용 및 신호 메커니즘 그 가이드 배아 patterning에 대한 중요한 단서를 제공할 수 있습니다. 그러나, 곧 주입 후 decidua에서 마우스 배아의 해부는 도전적인 절차 될 수 있으며,이 과정에 대한 자세한 단계별 문서는 부족합니다.
여기 이후 주입 (6.5 DPC) 배아가 처음 임신 마우스 (질 플러그가 지정 일 0.5 poist의 coitum의 검출)의 자궁을 해부하고 그 후에 산모 decidua에서 배아를 해부하여 격리하는 방법을 보여줍니다. 레이처트의 막의 절개는 ectoplacental 원추의 제거뿐만 아니라 설명되어 있습니다.
Protocol
여성 마우스에서 생식 기관의 해부
- 임신 동물 압축 가스를 사용하여 CO 2 질식에 의해 euthanized 있습니다.
- 흡수 패드에있는 동물 부정사를 틀어서 마우스 머리로 절개를 오염의 위험을 줄이기 위해 70 %의 에탄올에 만끽해보세요.
- 피부를 꼬집어하고 정기적으로 수술 가위로 정중선에서 작은 측면 절개합니다. 확고하게 상기와 절개 아래의 피부를 잡고 머리와 복부를 노출 꼬리쪽으로 떨어져 피부를 당기십시오.
- 포셉로 복막을 파악하여 복강을 노출 그만 하죠.
- 이 자궁 뿔을, 수란관과 난소 : 뱃속의 지느러미 지역에서 생식 기관을 찾습니다.
원시 리크 단계 (6.5 DPC) 해부
- 수란관 아래 자궁 쥐고하여 자궁 경적을 제거하고 mesometrium 따라 그것이 무료로 잘라. 얼음 차가운 PBS의 해부 자궁 놓으십시오.
그림 1 - 자궁 호른 함께 주입 사이트간에 절단하여 각 배아를 구분합니다.
그림 2 - 주변 근육의 레이어와 싸여 decidua 조직 사이의 시계 제조인의 집게를 슬라이딩하여 근육의 자궁 내막을 파악. 다시 근육 계층 껍질, decidua을 알아가는 겁니다.
그림 3 - 동봉된 배아의 midventral 또는 말초 팁을 노출됩니다 아펙스 (약 decidua 조직의 1 / 5)에서 노출 decidua의 일부를 클립.
그림 4 - 배아는 포셉의 도움말을 사용하여 밖으로 껍질 수 있습니다. 피어스는 배아를 둘러싼 포셉와 오픈 포셉와 decidua 떨어져 decidua 찢어 수 있습니다.
그림 5 - 일단 배아가 제거되어 Reichart의 멤브레인 여전히 ectoplacental 콘 (trophoblast)뿐만 아니라 첨부할 수 있습니다. 배아는주의 절개로 추가 해부하실 수 있습니다.
그림 6
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Discussion
마우스의 Postimplantation 4.5 DPC과 출산 사이에 발생합니다. 이 절개 방법은 이전 또는 이후 5.5-8.5 DPC에 무대 배아를 분리하기 위해 본질적으로 설명, 적용할 수 있습니다.
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Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro Dissecting Forceps serrated, straight | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5130 | 2 pairs |
| Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5010 | 2 pairs |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1x) | Reagent | Invitrogen | 14190 | |
| Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
| 4% Paraformaldehyde in PBS | Reagent | |||
| Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Tool | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pregnant female mice | Animal | |||
| Dissecting Microscope | Microscope |
References
- Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).
