Summary

Ryggmärg Elektrofysiologi

Published: January 18, 2010
doi:

Summary

En demonstration av isolering av neonatal musen ryggmärgen för elektrofysiologiska studier.

Abstract

Den neonatala musen ryggmärgen är en modell för att studera utvecklingen av neurala kretsar och rörelseapparaten rörelse. Vi visar ryggmärgen dissekering och förbereda inspelningen bad konstgjorda cerebrospinalvätska används för rörelseapparaten studier. När dissekerade kan ryggmärgen ventrala nervrötterna knytas till en inspelning elektrod att registrera elektrofysiologiska signaler från den centrala mönstret generera kretsar i ländryggen sladden.

Protocol

1. Förbered konstgjorda cerebrospinalvätska (aCSF) 1. Vi förbereder först en 2L av en 10X lager av aCSF utan magnesium eller kalcium. Reagenser som anges i millimolar. Katalog Siffrorna hänvisar till Sigma / Aldrich. 2 liter 10X aCSF (utan Mg och Ca) Reagens mM g/2L Katalog KCl 40 5,96 P-9333 <td…

Discussion

De isolerade neonatal ryggmärgen ger en lätthanterlig metod för att studera nervsystemet utveckling1, 2. Inom ländryggen ryggmärgen av neonatal gnagare, kan centrala mönster generera kretsar producera fiktiva förflyttning i närvaro av neurotransmittorer. Denna fiktiva rörelseorganen består av rytmiska ökad verksamhet, skurar, som produceras vid 0,2 till 0,5 Hz. Dessa brister är organiserade för att producera vänster-höger växlingen längs sladden och böj-extensor växling (ipsilaterala L2 förhållande …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Samuel L. Pfaff är professor i laboratorier Gene Expression vid The Salk Institute för biologiska studier och en utredare vid Howard Hughes Medical Institute. Detta arbete stöddes av Christopher och Dana Reeve Foundation. Joe Belcovson, Kent Schnoeker och Mike Sullivan i multimedia vid Salk Institute bistått med fotografi och redigering.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
KCl     P-9333  
NaCl     S-7653  
NaHCO3     S-6297  
NaH2PO4     S-9638  
Glucose     D-9434  
CaCl2     C-5080  
MgSO4     M-5921  
Large Scissors   Fine Science Tools 14070-12  
Forceps   Fine Science Tools 11050-10  
Fine Scissors   Fine Science Tools 15000-10  
Insect pins   Fine Science Tools 26002-10  
Sylgard 184 (Dow-Corning)        
1L volumetric flask        
100mL volumetric flask        

References

  1. Myers, C. P. Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits. Neuron. 46, 37-49 (2005).
  2. Goulding, M., Pfaff, S. L. Development of circuits that generate simple rhythmic behaviors in vertebrates. Curr Opin Neurobiol. 15 (1), 14-20 (2005).
  3. Gallarda, B. Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling. Science. 320, (2008).
  4. Gosgnach, S. V1 spinal neurons regulate the speed of vertebrate locomotor outputs. Nature. 440 (7081), 215-219 (2006).
  5. Lanuza, G. M., Gosgnach, S., Pierani, A., Jessell, T. M., Goulding, M. Genetic identification of spinal interneurons that coordinate left-right locomotor activity necessary for walking movements. Neuron. 42 (3), 375-386 (2004).
  6. Jiang, Z., Carlin, K. P., Brownstone, R. M. An in vitro functionally mature mouse spinal cord preparation for the study of spinal motor networks. Brain Res. 816 (2), 493-499 (1999).
  7. Ziskind-Conhaim, L., Gao, B. X., Hinckley, C. Ethanol dual modulatory actions on spontaneous postsynaptic currents in spinal motoneurons. J Neurophysiol. 89 (2), 806-813 (2003).
  8. Tabak, J., Rinzel, J., O’Donovan, M. J. The role of activity-dependent network depression in the expression and self-regulation of spontaneous activity in the developing spinal cord. J Neurosci. 21 (22), 8966-8978 (2001).
  9. Chub, N., Mentis, G. Z., O’Donovan, M. J. Chloride-sensitive MEQ fluorescence in chick embryo motoneurons following manipulations of chloride and during spontaneous network activity. J Neurophysiol. 95 (1), 323-330 (2006).

Play Video

Cite This Article
Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. Spinal Cord Electrophysiology. J. Vis. Exp. (35), e1660, doi:10.3791/1660 (2010).

View Video