Summary
Telemetric א.ק.ג. התפתחה ככלי חיוני להערכת במודלים של בעלי חיים על הפרעות בקצב הלב או מוות קרדיאלי פתאומי. כאן, אנו מציגים מדריך בשלבים להקלטות telemetric א.ק.ג. עבור היישום לניטור ארוך טווח א.ק.ג. אמבולטורי בעכברים.
Abstract
Telemetric הקלטה א.ק.ג. בעכברים חיוני להבנת המנגנונים מאחורי הפרעות קצב, הפרעות הולכה, ועל למוות קרדיאלי פתאומי. למרות השטח א.ק.ג. ישמש לטווח קצר מדידות של מרווחי waveform, אין זה מעשי מחקרים ארוכי טווח של השתנות קצב הלב, או ללכוד פרקים נדירים של הפרעות קצב. מושתלת telemeters א.ק.ג. מציעים את היתרונות של השתלה כירורגית פשוטה, ארוכת טווח הקלטה של electrograms בעכברים אמבולטורי, ויכולת הרחבה עם הקלטות סימולטני של מספר רב של בעלי חיים. כאן, אנו מציגים מדריך צעד אחר צעד עד ההשתלה של telemeters הקלטה א.ק.ג. אמבולטורי בעכברים. היצמדות קפדנית על טכניקה aseptic נדרש תוצאות ההישרדות נוחים עם אפשרות של השתלת הקלטה של שבועות עד חודשים. לפיכך, מושתלת טלמטריה אק"ג הוא כלי רב ערך לגילוי של מידע קריטי על electrophysiology לב במודלים של בעלי חיים אמבולטוריים כגון העכבר.
Protocol
1. הכנת מד מרחק להשתלה כירורגי
- לפני החדרת מד מרחק א.ק.ג. לתוך העכבר, חשוב לוודא את מד מרחק א.ק.ג. הוא סטרילי תקין. מכשירי טלמטריה ניו ניתנים בדרך כלל במצב סטרילי על ידי היצרן. Telemeters א.ק.ג. ניתן לעשות שימוש חוזר בתנאי התקן הוא ניקה באמצעות פתרון Tergazyme 1% לפחות 4 שעות. אתה יכול לשטוף את מד מרחק עם מים סטריליים לאחר ניקוי עם Tergazyme. בנוסף, השימוש Wavicide-01 חיטוי לילה לעקר את מד מרחק אק"ג. הקפידו לשטוף את חומר חיטוי עם מים סטריליים 48 שעות לפני ההשתלה לעכברים. שומרים בכלי סטרילי.
- בדוק מד מרחק מוביל שלמות של שני חוטים ניצוח את נדן בידוד. הפעל את משדר טלמטריה באמצעות מגנט נופף בתוך 5 ס"מ של מד מרחק, ולבדוק את האות עם רדיו AM בתדר 530. האות צריך להיות חזק וברור צריך להשתנות בעוצמה המגרש המבוססת על מניפולציה של החוטים. רשום את מספר הדגם, המספר הסידורי מד מרחק, והערך כיול אק"ג. יצרנים לעתים קרובות ממליצים מד מרחק צריך להיות על 24 שעות לפני ההשתלה, ראה את הוראות השימוש מד מרחק הספציפי שלך לקבלת פרטים. בדוגמה זו, נשתמש למדעי נתונים בינלאומיים (DSI) מד מרחק להשתלה.
- הכנת מד מרחק להוביל עשויה להיות מושגת על ידי חיתוך להוביל שלילי (לבן) של כ 3.5 ס"מ להוביל חיובי (אדום) עד 2.5 ס"מ. אלה הם אורכים אופטימליים עבור השתלת להוביל השלילי בבית החזה הימני, להוביל חיובי בבטן השמאלי (ראה איור 2). בשלב הבא, להסיר את נדן בידוד לחשוף 7 מ"מ של חוט. צייר את הקצה של עופרת המתכת עם דבק מגע סטרילית, כגון בונד וטרינר, ולאחר מכן לצרף כמוסות להוביל את הטיפים מתכת. כמוסות אלו ימנע שחיקה העור בשל להוביל השמה. כ 2-3 מ"מ חוט מתכת צריך להיות חשוף חישה חשמלי של קצב הלב הילידים.
2. השתלה ניתוחית של מד מרחק
- על מנת להשתמש בטכניקה סטרילית בכירורגיה Murine, תצטרך כפפות סטריליות, וילון סטרילי, 6-0 תפרים Prolene. אתה גם צריך 2 זוגות של מלקחיים מעוקרות, 1 זוג בוטה, הסתיים מספריים, אזמל, ונהג מחט. מכשירי ניתוח עשויים להיות מעוקרים מעקר חרוז זכוכית מחומם ל 250 מעלות צלזיוס. הקפד לחטא ולשטוף את מד מרחק כפי שתואר לעיל לפני השימוש.
- הכינו את העכבר לניתוח על ידי הראשון הרדמה העכבר בתיבה באמצעות אינדוקציה 3% isoflurane ב L 0.5 / min O2 100%. השתמש כרית חימום, כגון משאבת-T, אשר מפיצה מים חמים, כדי לשמור על הטמפרטורה של העכבר בהרדמה. הטמפרטורה עשויה להיות במעקב על ידי בדיקה רקטלית, אם תרצה בכך. כאשר העכבר מסומם כראוי, לחלוטין לגלח את הבטן והחזה של העכבר עם קוצץ חשמלי. Re-להרדים את העכבר עם isoflurane לפני העברת העכבר צינור זרימה קבועה, פרקדן, עם הראש פונה משם בזנב כלפיך. קלטת את הכפות של העכבר לשולחן כירורגי מחומם. נגבו את הבטן עם ספוגית אלכוהול כדי להסיר שיער מגולח לנקות את שדה הניתוח. החל בשלוש שכבות נפרדות של בבטאדין עם מטליות לחטא את הבטן והחזה. ודא רמת הנכונות של הרדמה על ידי הפעלת לחץ על הציפורן העכבר. לאחר עכבר הוכן לניתוח, להשתמש בכפפות סטריליות וליישם את וילון סטרילי לתחום כירורגית.
- ההשתלה מד מרחק intraperitoneal מציעה את היתרון של ניסויים הפיזיולוגיה תרגיל. עבור הכניסה intraperitoneal, להתחיל ניתוח באמצעות אזמל כדי ליצור חתך קו האמצע האנכי של העור המכסה את הבטן בערך 2.5 ס"מ אורך. בזהירות העור להפריד רקמות החיבור הבסיסי באמצעות בוטה, הסתיים מספריים. לאחר מכן, ליצור חתך קו האמצע האנכי של Linea alba שמעל הצפק, בערך 1.5 ס"מ אורך. בנוסף, ליצור חור קטן בדיוק מעל הצפק (הגולגולת) כדי חתך הצפק, אשר תשמש פורקן תת עורי מוביל. בזמן ביצוע הניתוח, לשמור על לחות אתר כירורגית מפעם לפעם על ידי טפטוף תמיסת מלח סטרילית למגרש ההפעלה.
- הכנס את מד מרחק לתוך חלל הצפק הנכון. הכנס מלקחיים לתוך החור מעולה מד מרחק ולמשוך גם מוביל את דרך החור להוביל ולכן הם בולטים מן הצפק. שימוש מתמשך 6-0 תפרים Prolene כדי לסגור את קו האמצע 1.5 ס"מ הצפק חתך אנכי.
3. עופרת השרשה וסגירת בטן
- מוביל א.ק.ג. ממוקמות בתצורה השנייה להוביל. להוביל עם נדן לבן / שקוף הוא שלילי, ממוקם בבטן הימנית העליונה. ראשית, ליצור 0.5 ס"מ העור חתך בחזה הימני העליון של העכבר.בשלב הבא, להשתמש במספריים בוטה כדי ליצור מנהרה חזרה החתך בבטן. משוך את ההובלה במנהרה ולהשתמש תפר 6-0 Prolene לעגן את להוביל שריר החזה. ודא תפר הוא על גבי החלק החשוף של עופרת, ויוצר קשר טוב בין שריר להוביל הבסיסית. השתמש תפר second בקרבה אחד הנ"ל, כדי לשתק את להוביל השריר. סגירת החתך בעור באמצעות תפר 6-0 Prolene.
- להוביל חיובי (נדן אדום) ממוקם בבטן הימנית מתחת לסרעפת שמאל מתחת ללב. להוביל מעוגן לרקמת הצפק הבסיסית על ידי תפר 6-0 ו Prolene צריך קשר טוב עם רקמת הצפק. חתך נוסף אין צורך בשלב זה כי באתר של ההשתלה להוביל קרוב החתך קו האמצע האנכי, וכך ניתן לגשת בקלות עם שדה הניתוח הקיים. ראוי לציין, כי רקמת הצפק יש הרים, כדי למנוע ניקוב של המעי הבסיסית.
- סגור את fascia עור הבטן ברצף עם Prolene 6-0 שכבות.
4. לאחר הניתוח טיפול
- תן 0.1 מ"ל של עכבר [1 מ"ג / מ"ל] עצירות עבור כאבים מיד לאחר הניתוח. אפשר בעכבר כדי להתאושש מניתוח על משטח לוהט. אם העכבר עבר ניתוח ממושך> 30 דקות, או אם העכבר נראה יבש, ניתן להזריק 0.2-0.3 מ"ל סליין סטרילי אל תוך הצפק עבור להחזרת נוזלים. עבור כאבים שלאחר הניתוח המשיך מקובל לספק עכברים עם עצירות פעמיים ביום למשך שלושה ימים, ולאחר מכן לפי הצורך כל שמונה שעות.
- נקו את בבטאדין עם ספוגית אלכוהול, כדי למנוע גירוי לאחר ניתוח. זכור לרשום את משקל לאחר ניתוח לקביעת הבאות של בריאות לאחר ניתוח.
- 8-24 שעות לאחר הניתוח, לתת את העכבר כאבים עם עצירות נוספות בעת הצורך, כמו זה יהיה להפחית את הכאב ולהפחית להוביל לכישלון ההשמה של העכבר לופתת את האתר לאחר ניתוח.
5. נציג תוצאות
כאשר מבוצע כהלכה, העכבר צריך להיות סגור חתכים בבטן עם תת עורי מוביל מתחת לעור. בדרך כלל, העכבר לוקח 10-30 דקות כדי להתאושש מן ההרדמה. זה לוקח בערך 7-10 ימים לפני העכברים התאוששו לחלוטין מהניתוח, כפי שמעידים ההתאוששות של אובדן שלאחר הניתוח במשקל הנורמליזציה של הניידות.
הסיבוך השכיח ביותר של הניתוח הוא מוביל לשחיקה של איבר דרך העור ב 10 הימים הראשונים לאחר הניתוח. סיבוך זה שכיח ניתן להימנע על ידי הקפדה בתוקף תת עורי מוביל רקמות תת עורית או הצפק. טכניקה זו מונעת מוביל הרפיון, אשר ליצור לחץ וחיכוך על העור כאשר העכבר ambulates. אמנם פחות שכיח, זיהום אלח דם עלולה להתרחש טעויות בטכניקה סטרילית, או ניקוי שלם של telemeters בשימוש.
פלט א.ק. ג עשוי להיות מוקלט על ידי מטריקס מקלט יחד עם רכישת התוכנה נתונים, כגון נתונים למדעים הבינלאומי (DSI). תוצאות Waveform לכלול גל מוגדרים P, המציין שלילת קוטביות פרוזדורים, וגם גל QRS המסמל שלילת קוטביות חדרית, כפי שמוצג באיור 3 להלן. איכות טובה א.ק.ג. עקבות צריך גל מוגדרים P שלפני ברורים גל QRS ביחס של 1:1. לא צריך להיות אות רקע נמוך מרווחי RR צריך להיות קבוע wild-type עכברים. איכות עניים א.ק.ג. עקבות ייתכן P ברור או גלי QRS, או אות הרקע, אשר עשוי להפוך את המחשב בעקבות ניתוח קשה. א.ק.ג. עני זכר יכול להיות קבוע על ידי מחדש השתלת מוביל מד מרחק, בדרך כלל אחד בכל פעם. כדי לחדש את השתל להוביל מד מרחק, במקום את העכבר תחת הרדמה, באמצעות טכניקה כירורגית, לעשות חתך בעור ישירות המכסה את ההובלה השאלה. כאשר להוביל הגישה, לחתוך את תפר עיגון להוביל, ולהמשיך להוביל למיקום הרצוי לפני עיגון להוביל שוב. לבסוף, לסגור את האתר כירורגית עם Prolene 6-0.
איור 1: דוגמה מד מרחק חיה קטנה עם מוביל חיוביים ושליליים. באופן כללי, להוביל אדום הוא להוביל חיובית, את ההובלה לבן הוא להוביל שלילי. להוביל כל אחד צריך בידוד, נדן 5-7 מ"מ של חוט חשוף, ועל קצה כתרים מפלסטיק, אשר מונע שחיקת להוביל את דרך העור.
איור 2: קריקטורה המראה הנכון ההשתלה מד מרחק אתרים על עכבר. להוביל לבן (שלילי) הוא מושתל בחזה העליון הימני של העכבר, את ההובלה (חיובי) אדום ממוקם בבטן הימנית, כך החושים מד מרחק "שתי להוביל" תצורה.
איור 3: waveform נציג עכבר קצב סינוס נורמלי. גל P מייצג שלילת קוטביות פרוזדורים QRS קומפלקס מייצג שלילת קוטביות חדרית. Waveform באיכות גבוהה צריך גל P ברור שלפני כל מורכבות QRS ביחס 01:01.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
השלבים הקריטיים של הליך זה מנקים הכנה נכונה של העכבר לפני הניתוח הישרדות. כאשר מד מרחק ואת אתר פעיל עכבר מנקים כמו שצריך, יש הרבה יותר טוב לאחר ניתוח התוצאות. בנוסף, תשומת לב להוביל מיקום מפחית לאחר ניתוח שחיקת העור. שינויים אפשריים לטכניקה כוללים תצורות חלופיות להערכת תפקוד LV לרוחב הקיר (אני להוביל תצורה), או את השימוש של מד מרחק לא רק לניתוח waveform א.ק.ג., אלא גם הטמפרטורה וגם הלחץ בדיקות דם [מעבר להיקף של מאמר זה] . מיקום חלופי הקלטה טלמטריה א.ק.ג. הוא מיקום תת עורית להוביל עם חוטי חיצוני, כלומר מד מרחק שאינו מושתל. זה מתאים הקלטה של ילודים א.ק.ג. גל, אך אינו מעשי עבור טלמטריה א.ק.ג. אמבולטורי.
ההשתלה מד מרחק הוא כלי רב עוצמה לניטור א.ק.ג. אמבולטורי, נעשה שימוש על מנת להעריך את המופע של טכיקרדיה חדרית, למוות קרדיאלי פתאומי, לחסום AV קטרי, ו פרפור פרוזדורים. 1,2,3 נתונים יקרי ערך בנוסף, יישומים של ניתוח טלמטריה הניבו לגבי השליטה על קצב הלב ואת קצב השתנות הלב. הפיתוחים האחרונים 4,5 ב אק"ג מד מרחק טכנולוגיה כללו מדידות רגישות של טמפרטורת הגוף ולחץ הדם. 6 לפיכך, מד מרחק ההשתלה היא טכניקה ערך עבור assaying שינויים פיזיולוגיים בעכברים במודלים של בעלי חיים אחרים של המחלה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
סמן מקאולי נתמך על ידי mentored-NIH להעניק הכשרה 5T32HL066991-07
קסנדר Wehrens נתמך על ידי NIH / NHLBI מענקים 1R01HL091947-01A209 3R01HL089598 ו-03S109
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Steri 250 Bead Sterilizer | Inotech | IS-250 | |
| Blunt-Ended Scissors | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5980 | |
| Blunt-Ended Forceps (x2) | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5138 | |
| Veterinary Anesthesia Vaporizer | Surgivet | Isotec 4 | |
| T/Pump | Gaymar Industries | P/N11184-000 | |
| Propylene Blue Monofilament Suture | Ethicon Inc. | 8718 | |
| Povodone Iodine, 10% | Equate | N/A | |
| Alcohol Swabs | PDI | B339 | |
| Tergazyme | Alconox, Inc. | 21837-118 | |
| Wavidicde-01 | Medical Chemical Corporation | Wavicide-01 | |
| ECG Telemeter | DataSciences International | EA-F20 |
References
- Cerrone, M. Bidirectional ventricular tachycardia and fibrillation elicited in a knock-in mouse model carrier of a mutation in the cardiac ryanodine receptor. Circ Res. 96 (10), e77-e77 (2005).
- Chelu, M. G. Calmodulin kinase II-mediated sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak promotes atrial fibrillation in mice. J Clin Invest. 119 (7), 1940-1940 (1940).
- Sood, S. Intracellular calcium leak due to FKBP12.6 deficiency in mice facilitates the inducibility of atrial fibrillation. Heart Rhythm. 5 (7), 1047-1047 (2008).
- Swoap, S. J., Gutilla, M. J. Cardiovascular changes during daily torpor in the laboratory mouse. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 297 (3), R769-R769 (2009).
- Costa-Goncalves, da, C, A. Role of the multidomain protein spinophilin in blood pressure and cardiac function regulation. Hypertension. 52 (4), 702-702 (2008).
- Wehrens, X. H., Kirchhoff, S., Doevendans, P. A. Mouse electrocardiography: an interval of thirty years. Cardiovasc Res. 45 (1), 231-231 (2000).
