Summary
इस प्रोटोकॉल पुरुषों के वृषण से शुक्राणु निकालने और फिर महिला चूहों inseminating के लिए तरीकों को दर्शाता है. यह प्रक्रिया उपयोगी है जब विकासात्मक अध्ययन में ट्रांसजेनिक काम के रूप में के रूप में अच्छी तरह से सटीक समय की जरूरत है.
Abstract
जीनस Peromyscus (हिरण चूहों) के कृन्तकों सबसे अधिक प्रचलित देशी उत्तरी अमेरिकी स्तनधारियों हैं. Peromyscus प्रजातियों अनुसंधान के एक विस्तृत रेंज सहित विष विज्ञान, जानपदिक रोग विज्ञान, पारिस्थितिकी, व्यवहार, और आनुवंशिक अध्ययन में किया जाता है. यहाँ वे कृत्रिम गर्भाधान के प्रदर्शनों के लिए एक उपयोगी मॉडल उपलब्ध कराते हैं.
यहाँ प्रदर्शित उन लोगों के लिए समान तरीके पहले कई हिरण माउस अध्ययन में इस्तेमाल किया गया है, अभी तक कोई विस्तृत प्रोटोकॉल प्रकाशित किया गया है. यहाँ हम कृत्रिम गर्भाधान के बुनियादी विधि प्रदर्शित करता है. इस विधि कृंतक से निकालने testes, तो अधिवृषण और वीएएस deferens से शुक्राणु अलग जरूरत पर जोर देता है. परिपक्व शुक्राणु, अब दूध मिश्रण में महिला प्रजनन पथ में ovulation के समय में रखा जाता है. निषेचन भ्रूण विकास के समय के लिए दिन 0 के रूप में गिना जाता है. भ्रूण तो वांछित समय बिंदु पर लिया जा सकता है और चालाकी.
कृत्रिम गर्भाधान कृंतक प्रजातियों की एक किस्म है, जहां सटीक भ्रूण समय महत्वपूर्ण है या प्राप्त करने के लिए कठिन है में इस्तेमाल किया जा सकता है. इस तकनीक प्रजाति या उपभेदों (ज्यादातर Peromyscus सहित) जो तुरंत और / या संभोग का आकलन करना मुश्किल है जहाँ दोस्त नहीं हो सकता है के लिए महत्वपूर्ण है. इसके अलावा, कृत्रिम गर्भाधान या तो विकास और प्रगति / या ट्रांसजेनिक काम मानचित्रण में भ्रूण के विकास के लिए सही समय प्रदान करता है. पशुओं की कम संख्या के बाद निषेचन की गारंटी है इस्तेमाल किया जा सकता है. इस विधि Peromyscus प्रणाली को आगे बढ़ाने के लिए महत्वपूर्ण हो गया है, और उम्मीद है कि दूसरों को लाभ होगा के रूप में अच्छी तरह से.
Protocol
कृत्रिम गर्भाधान
कृत्रिम गर्भाधान प्राकृतिक matings के बजाय प्रयोग किया जाता है संभावना है कि सभी महिलाओं को गर्भवती हो जाएगा में वृद्धि. 2 पुरुष हर 1 superovulated महिलाओं या एक महिला estrous में जाना जाता के लिए इस्तेमाल किया गया था. परिपक्व नर चूहों से caudae epididymides एक 9% दूध निलंबन में रखा गया और 18 गेज सुई के साथ खुला कटा हुआ. शुक्राणु के लिए एक कुछ मिनट के लिए स्वतंत्र रूप से तैरने की अनुमति दी गई थी और तब epididymides मिश्रण से ले जाया गया. निलंबन संगम और गतिशील शुक्राणु के लिए एक खुर्दबीन के साथ मूल्यांकन किया गया था. एक कुंद 22 एक गेज आधा इंच लंबी सुई शुक्राणु प्रशासन के लिए इस्तेमाल किया गया था. एक 120 ° मोड़ सुई नीचे 3 / 4 वें तरीका के बारे में रखा गया था. सुई योनि में डाला गया था मोड़ और 0.025 करने के लिए - 0.05mls इंजेक्शन. यदि एक सहायक के लिए उपयुक्त स्थिति में महिला को पकड़ प्रयोग किया जाता है, anesthetics के उपयोग की जरूरत नहीं है.
तैयार
- 6 महिलाओं के लिए 4 पुरुषों का प्रयोग करें
- मछली पालने का बाड़ा में पुरुषों euthanize
- दूध पाउडर से 9% के दूध के बारे में 5 मिलीलीटर की तैयारी
- छोटे पेट्री डिश में 1.5 मिलीलीटर रखो
- Epididymus और वीएएस deferens कट
- 9% के दूध के 1.5ml में रखो
- दो 18 गेज सुई का प्रयोग, और सुइयों के साथ लंबे समय काटने गति का उपयोग करते हुए, शुक्राणु जारी epididymus और वीएएस deferens खुला टुकड़ा
- बाहर ले जाओ ऊतक पर छोड़ दिया है और माइक्रोस्कोप के अंतर्गत शुक्राणु की जांच करने के लिए
इंजेक्शन
- 120 ° के कोण पर कुंद सुई का प्रयोग करें
- हाथ में माउस पकड़ो और मिश्रण इंजेक्षन. यदि एक व्यक्ति पकड़ और इंजेक्शन के साथ असहज, दो लोगों का इस्तेमाल किया जा सकता है. नहीं चतनाशून्य करनेवाली औषधि, इस्तेमाल किया जाना चाहिए एक पर के रूप में जानता है कि कैसे इस प्रक्रिया प्रभावित हो सकता है.
- महिला प्रति शुक्राणु / दूध मिश्रण के 0.05ml का उपयोग करें
प्राप्तकर्ता महिलाओं
- प्राप्तकर्ता महिलाओं पर योनि स्मीयर (इस समय तक प्राप्तकर्ता महिलाओं proestrus / मद में होना चाहिए) करो
- मादा है कि मद 5 दिन से नहीं पहुंचे हैं शायद नहीं किया जाना चाहिए
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Acknowledgments
मैं Peromyscus अपने बहुमूल्य अंतर्दृष्टि के लिए आनुवंशिक स्टॉक केंद्र, धैर्य, और कृंतक प्रजनन पर ज्ञान से माइक डेवी धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Petri Dish | Tool | Fisher Scientific | 08-772-30 | |
| 18 G needle | Tool | BD Biosciences | 305195 | |
| Powdered milk | Reagent | Any Supplier | ||
| 1 mL syringe | Tool | National Scientific Company | S7510-1 | |
| Forceps | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5060 | |
| Scissors | Tool | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5882 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Reagent | GIBCO, by Life Technologies | 14200-075 | |
| 22 G blunt needle | Tool | Give to me |
