Крыса МСК были изолированы от бедра и большеберцовые кости, а затем обогащенный магнитной сортировки клеток. Сортировать клетки были подтверждены для экспрессии поверхностных маркеров с помощью проточной цитометрии. Эти клетки также культивировали при клональной плотности для формирования отдельных колоний, а затем эти колонии были разделены клонирования цилиндров.
Abstract
МСК являются население взрослых стволовых клеток, что является перспективным источником для терапевтического применения. Эти клетки могут быть выделены из костного мозга и может быть легко отделена от гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в связи с их пластиковых приверженности. Этот протокол описывает, как изолировать МСК крысы бедра и большеберцовые кости. Изолированных клеток были дополнительно обогащенные против двух МСК поверхностные маркеры CD54 и CD90 магнитными сортировки клеток. Выражение поверхностные маркеры CD54 и CD90 были подтверждены с помощью проточной цитометрии анализа. HSC маркер CD45 также был включен, чтобы проверить, отсортированных МСК были истощены ГСК. МСК естественно очень неоднороден. Есть субпопуляций клеток, которые имеют различные формы, пролиферацию и дифференциацию способностей. Эти субпопуляции все выражают известные маркеры МСК и не уникальный маркер до сих пор не определены для различных подгрупп населения. Таким образом, альтернативный подход выделить различные субпопуляции используется клонирование цилиндров выделить одного колонии клеток, полученных из. Клетки, полученные из одной колонии может быть культурным и оцениваться отдельно.
Protocol
1. Выделение Крыса МСК Мезенхимальные стволовые клетки были выделены из 6-8 недельных Sprague-Dawley крыс женского пола, как описано выше 1, 2. Изолированные МСК может присоединиться к пластиковой поверхности и легко расширить при в культуре пробирке. Животных был вве…
Discussion
Этот протокол описывает, как изолировать и обогатить МСК. Метод для разделения одной колонии клеток, полученных также включена. Есть несколько шагов, которые важны для успешного разделения изоляции, обогащения и колонии. Делая изолятор от крыс, рекомендуется для фильтрации через сито ?…
Acknowledgements
Работа выполнена при частичной поддержке Национального института здравоохранения (R01GM079688, R21RR024439 и R21GM075838), Национальный научный фонд (конбет 0941055) и МГУ Foundation.
Zhang, L., Chan, C. Isolation and Enrichment of Rat Mesenchymal Stem Cells (MSCs) and Separation of Single-colony Derived MSCs. J. Vis. Exp. (37), e1852, doi:10.3791/1852 (2010).