Summary

Выделение и Обогащение Крыса мезенхимальные стволовые клетки (МСК) и разъединении одной колонии Производные МСК

Published: March 22, 2010
doi:

Summary

Крыса МСК были изолированы от бедра и большеберцовые кости, а затем обогащенный магнитной сортировки клеток. Сортировать клетки были подтверждены для экспрессии поверхностных маркеров с помощью проточной цитометрии. Эти клетки также культивировали при клональной плотности для формирования отдельных колоний, а затем эти колонии были разделены клонирования цилиндров.

Abstract

МСК являются население взрослых стволовых клеток, что является перспективным источником для терапевтического применения. Эти клетки могут быть выделены из костного мозга и может быть легко отделена от гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в связи с их пластиковых приверженности. Этот протокол описывает, как изолировать МСК крысы бедра и большеберцовые кости. Изолированных клеток были дополнительно обогащенные против двух МСК поверхностные маркеры CD54 и CD90 магнитными сортировки клеток. Выражение поверхностные маркеры CD54 и CD90 были подтверждены с помощью проточной цитометрии анализа. HSC маркер CD45 также был включен, чтобы проверить, отсортированных МСК были истощены ГСК. МСК естественно очень неоднороден. Есть субпопуляций клеток, которые имеют различные формы, пролиферацию и дифференциацию способностей. Эти субпопуляции все выражают известные маркеры МСК и не уникальный маркер до сих пор не определены для различных подгрупп населения. Таким образом, альтернативный подход выделить различные субпопуляции используется клонирование цилиндров выделить одного колонии клеток, полученных из. Клетки, полученные из одной колонии может быть культурным и оцениваться отдельно.

Protocol

1. Выделение Крыса МСК Мезенхимальные стволовые клетки были выделены из 6-8 недельных Sprague-Dawley крыс женского пола, как описано выше 1, 2. Изолированные МСК может присоединиться к пластиковой поверхности и легко расширить при в культуре пробирке. Животных был вве…

Discussion

Этот протокол описывает, как изолировать и обогатить МСК. Метод для разделения одной колонии клеток, полученных также включена. Есть несколько шагов, которые важны для успешного разделения изоляции, обогащения и колонии. Делая изолятор от крыс, рекомендуется для фильтрации через сито ?…

Acknowledgements

Работа выполнена при частичной поддержке Национального института здравоохранения (R01GM079688, R21RR024439 и R21GM075838), Национальный научный фонд (конбет 0941055) и МГУ Foundation.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
1X D-PBS   Invitrogen 14040-133  
DMEM   Invitrogen 11885-084  
Cell strainer   BD Bioscience 352350  
FBS   Invitrogen 26140-079  
Pen-Strep   Invitrogen 15140  
Trypsin-EDTA   Invitrogen 25200-056  
BD Imagnet   BD Bioscience 552311  
Biotin mouse IgG2a   BD Bioscience 555572  
Biotin mouse IgG1   BD Bioscience 555747  
Biotin anti-rat CD54   Cedarlane Labs CL054B  
Biotin anti-rat CD90   Cedarlane Labs CL005B  
Biotin anti-rat CD45   Cedarlane Labs CL001B  
BD Imag buffer   BD Bioscience 552362  
Round-bottom tube   BD Bioscience 352063  
Streptavidin particles   BD Bioscience 557812  
SA-PE   R&D systems F0040  
Cloning cylinder   Sigma C2059  

References

  1. de Hemptinne, I., Vermeiren, C., Maloteaux, J. M., Hermans, E. Induction of glial glutamate transporters in adult mesenchymal stem cells. J Neurochem. 91, 155-166 (2004).
  2. Porter, R. M., Huckle, W. R., Goldstein, A. S. Effect of dexamethasone withdrawal on osteoblastic differentiation of bone marrow stromal cells. J Cell Biochem. 90, 13-22 (2003).
  3. Chamberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. Concise review: mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing. Stem Cells. 25, 2739-2749 (2007).
  4. Abdallah, B. M., Kassem, M. Human mesenchymal stem cells: from basic biology to clinical applications. Gene Ther. 15, 109-116 (2008).
  5. Erica, L., Herzog, L. C., Diane, S. Krause Plasticity of marrow-derived stem cells. Blood. 102, 3483-3493 (2003).
  6. Colter, D. C., Sekiya, I., Prockop, D. J. Identification of a subpopulation of rapidly self-renewing and multipotential adult stem cells in colonies of human marrow stromal cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 7841-7845 (2001).

Play Video

Cite This Article
Zhang, L., Chan, C. Isolation and Enrichment of Rat Mesenchymal Stem Cells (MSCs) and Separation of Single-colony Derived MSCs. J. Vis. Exp. (37), e1852, doi:10.3791/1852 (2010).

View Video