يصف هذا الإجراء سير عمل سريعة وسهلة لإدخال سيرنا إلى الصعب transfect خطوط الخلايا والجينات التي تتبع في الوقت الحقيقي PCR. استخدام عداد الخلية الآلي ، وكذلك لوحة متعددة electroporation ، ومؤتمتة محطة الكهربائي تقديم نتائج سريعة وموثوق بها من دون الحاجة للتعامل مع آلية مكلفة.
استخدام بوساطة سيرنا ضربة قاضية الجين هو استمرار لتكون أداة مهمة في دراسة التعبير الجيني. وتجري دراسات سيرنا ليس فقط لدراسة آثار downregulating الجينات واحد ، ولكن أيضا لاستجواب مسارات الإشارات وغيرها من شبكات التفاعل المعقد. هذه التحليلات المسار يتطلب كلا من استخدام نماذج ذات الصلة الخلوية والأساليب التي تسبب أقل اضطراب في الفيزيولوجيا الخلوية. ويتزايد Electroporation تستخدم وسيلة فعالة لإدخال سيرنا والأحماض النووية الأخرى إلى الصعب transfect خطوط الخلايا والخلايا الأولية دون تغيير مسار الإشارات قيد التحقيق. هناك عدة خطوات حاسمة لتجربة ناجحة سيرنا ، وهناك طرق لتبسيط العمل وتحسين نوعية البيانات في مراحل تجريبية عدة. لمساعدتك على البدء مع المشروع الخاص بوساطة سيرنا ضربة قاضية الجينات ، وسوف نقوم شرح كيفية إجراء دراسة كاملة عن طريق جمع وفرز الخلايا قبل electroporation من خلال تحليل آخر ترنسفكأيشن PCR الوقت الحقيقي التعبير الجيني. الدراسة التالية تحقق في دور المنشط في الترانسكربتي STAT6 IL – 4 التعبير الجيني تعتمد على CCL17 في خلية سرطان الغدد الليمفاوية بيركيت خط (Namalwa). أثبتت تقنيات مفيدة لطائفة واسعة من سيرنا على أساس التجارب على كل من الخلايا الملتصقة والتعليق. وسوف نعرض أيضا كيفية تبسيط خلية العد مع العداد الآلي TC10 الخلية ، وكيفية electroporate عينات متعددة في وقت واحد باستخدام نظام electroporation MXcell ، وكيفية تقييم واحد RNA نوعية وكمية مع الكهربائي Experion النظام الآلي.
وقد أثبتت هذه المقالة كيفية electroporate siRNAs إلى الصعب transfect خط التعليق الخلية وكيفية متابعة التعبير الجيني في هذه الخلايا. عندما تفعل هذا الإجراء فإنه من المهم أن نتذكر أن تبقي الأمور كما يتفق ممكن عبر جميع العينات.
The authors have nothing to disclose.