Summary
בתגובה חוטם הארכה או PER היא התנהגות טעם assay כי נעשה שימוש זבובים וכן דבורי דבש. כאשר חוטם הופך במגע עם חומר אטרקטיבי, לטוס מרחיב חוטם שלה לצרוך את החומר. פתרונות של סוכרים שונים הם אטרקטיביים מאוד לטוס.
Abstract
בתגובה חוטם הארכה (PER) היא התנהגות טעם assay כי נעשה שימוש זבובים וכן דבורי דבש.
על פני השטח של הפה של זבוב (labellum), ישנם מבנים דמויי שיער הנקרא sensilla אשר בתים נוירונים טעם. כאשר חומר אטרקטיבי יוצר קשר עם labellum, לטוס מרחיב חוטם שלה לצרוך את החומר. תגובת חוטם הרחבה (PER) assay מודד את התגובה התנהגות הטעם, היא שיטה יעילה כדי ללמוד על העדפות מזון זבוב אחד. פתרונות של סוכרים שונים, כגון גלוקוז סוכרוז, פרוקטוז ו, הם אטרקטיביים מאוד לטוס. ההשפעה של חומרים מרתיעה גם יכול להיבדק כמו הפחתה של PER כאשר מעורבים פתרון מתוק.
למרות הפשטות של התהליך הבסיסי, יש הרבה דברים שיכולים למנוע ממנו לעבוד. אחד הגורמים הדורש תשומת לב הוא מצב תגובה של הזבוב. בפעם רעב הנדרש כדי להביא את המדינה לטוס מענה הולם משתנה באופן דרסטי 36-72 שעות. הקמנו סדרה של בקרות כדי להעריך מצב של זבוב המאפשר סינון החוצה של בעלי חיים יחידים שאינם מגיבים או Hyper-תגובה. גורם חשוב נוסף הוא רמת ההשפעה ואת המיקום של איש הקשר של labellum, אשר יהיה קשה לתאר במילים. מצגת וידאו זה מדגים את כל אלה, יחד עם שיפורים נוספים אשר יגדילו את שחזור של שיטה זו.
Protocol
רעב
- ראשית, להרעיב את לעוף.
- לשים חתיכה קטנה של קים, לנגב ספוגה מים בקבוקון ריק.
- העברת 20-30 המדושנים טס הבקבוקון הריק.
- בדוק כל 12 -24 שעות כדי לוודא נייר לח.
- להרעיב את לטוס על 36-72 שעות.
תקן את הזבוב
- קח אחד לטוס aspirator.
- המקום טיפ 200 μl צהוב על פתיחת. במקביל להטלת ונשף על זה, אתה יכול ללחוץ על לטוס אל קצה צהוב.
- בעדינות להחיל קצת אוויר כדי לדחוף את לטוס עד לנקודה שבה הוא לא יכול לזוז.
- באמצעות סכין גילוח, לשים סימן כ בעין של זבוב, אז למצוץ את לטוס הלוך לחתוך את קצה.
- בעדינות המכה לטוס בחזרה למצב, אבל רק לפני שהגיע סוף מאוד, לעשות בשיפוע לחתוך במיקום שבו חוטם הוא הולך להיות ממוקם. אתה יכול לעשות את זה בלי לחתוך באלכסון, אבל זה בהחלט להפוך את התהליך הבא קל יותר.
הכינו פתילות סוכרוז
- טוויסט רצועה ברוחב של 6 מ"מ Kimwipes ® נייר לתוך חוט, ולמשוך בנפרד לחתיכות קטנות של הפתיל כמו בצורת קונוס (<1 ס"מ).
- פתילים אלה קטן היו טבל פתרונות סוכרוז או מים בפני חוטם על ידי יצירת קשר.
הכן שולטת בחיות מעבדה
- לפני כל בדיקה tastants, לתת פתרון סוכרוז 4% לטוס. זה פועל כמו שליטה חיובית. מחק כל לעוף כי לא הגיב.
- בשלב הבא, מבחן DH 2 0 על לטוס. מעשה זה כביקורת שלילית. מחק את הזבוב אם הגיב.
- מבחן פקדים אלה לאחר בדיקות tastants שלך.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
במצגת זו, שעברנו את כל השלבים עבור assay בתגובה חוטם הארכה. השיטה נשמעת די פשוטה אבל כמו רבים מבחני התנהגות אחרים, דברים קטנים רבים יכולים למנוע את assay מעבודה. עברנו שלבים רבים כאלה שצריכים תשומת לב. הנה, אני reemphasize כמה מן הגורמים החשובים ביותר.
גורם אחד כזה הוא צורה של הפתיל. הראיתי כמה דוגמאות טובות מאוד, אבל כמובן, במציאות הכל יהיה ספקטרום רציף בין טוב מאוד רע מאוד. בהתחלה, ייתכן שאתה משתמש בדברים קרוב לצד טובים מאוד, אבל יום אחר יום רגיל שלך עלול להתחיל להעביר לאט לאט לתחום לא כל כך טוב. תפיסת האדם של כך נקרא "טוב" יכול בקלות משמרת במודע. אחת הדרכים למנוע זאת היא לקחת תמונה של הפתיל השתמשת בניסויים שלך, ולהשוות את כל התמונות על ידי צד בצד. או, לפחות לקחת תמונה אחת של פתילות זה עבד טוב מאוד, ובוהה בו זמן מה לפני הבדיקה Pers.
דבר נוסף חשוב הוא רמת ההשפעה של הקשר. זה יותר קל להתמודד עם כי המטרה היא להפוך את מגע עדין ככל האפשר. אם אינך רואה להזיז את ראשו של לטוס בכלל, כי הוא הטוב ביותר.
התנאי רעב הוא הגורם הכי קשה לשלוט. טעם רבים או מבחני התנהגות חוש הריח, בזמן רעב של 24 שעות משמש לעתים קרובות מאוד. 24 שעות עשוי להיות נוח מאוד לאנשים לעשות את הניסוי, אבל אם אתה טס האחורי שלך במצב טוב מאוד, זו תקופה קצרה למדי. אבל גם אם השתמשת מזון לטוס עשיר, ושליטה צפיפות בדיוק, חלון לבדיקות PER יכול לנוע בין 36 שעות ל 72 שעות. לכן, כניסוי, אני חייב להגיד שזה מאוד לא נוח לאנשים. ישנו גורם נוסף להקשות על נסיינים. כעניין של עובדה, יהיו קבוצות רבות, שבו חלון לצורך הניסוי עשוי להיות קצר מאוד, או אולי אפילו לא קיים כלל.
אז יש כמה המכשולים העיקריים שאתה צריך לעבור, אבל הדבר החשוב ביותר הוא שליטה חיוביות ושליליות שהזכרתי. על ידי שמירה על תקן אותם מאוד חמור, תוכל לאסוף אמין ערכות נתונים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
אנו מודים פול גרהם עבור משרת כאיש מצלמה במצגת וידאו.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| HDR-HC1 | Camera | Sony Corporation | ||
| SMZ800 | Microscope | Nikon Instruments | ||
| P-IBSS | Camera Adapter | Nikon Instruments | ||
| 1x DC10LN | Camera Adapter | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| 257010 | Camera Adapter | Optem, Qioptiq Inc. | ||
| TREKKER Mk2 | Tripod | BENBO | ||
| Gorillapod SLR | Tripod | Joby | ||
| iMac G5 | Computer | Apple | ||
| Power Mac G5 | Computer | Apple | ||
| iMovie | Software | Apple | ||
| MPEG Streamclip | Software | SQUARED 5 |
References
- Dethier, V. G. The Hungry Fly. , Harvard University Press. Cambridge. (1976).
